外源性LIF和IL—1对围着床期小鼠子宫内膜整合素β3亚素表达的调节

目的：研究外源性LIF及IL－1对围着床期子中内膜整合素β3表达的调节,探讨LIF参与着床的具体机制,方法：给孕2－4d的小鼠注射不同浓度的白血病抑制因子,白介素－1或白介素－1受体拮抗剂,应用免疫印迹法和RT－RCR法测定子宫内膜整合素β3的蛋白及mRNA表达水平。结果注射ＬＩＦ,ＩＬ－１子宫内膜整合素β３的表达水平升高（Ｐ＜０．０５）,且高剂量时升高更明显（Ｐ＜０．０１）,注射ＩＬ－１ra整合素β3水平下降（Ｐ＜０．０５）,结论：细胞因子ＩＬ－１及ＬＩＦ对围着床期子宫内膜表达整合素β３有促调节作用,二者参与着床与调节细胞粘附分子表达有关。     

稳定表达stathmin Ser25磷酸化位点突变的肝癌细胞株的建立

目的：建立稳定表达stathmin Ser25磷酸化位点点突变（stathmin S25A）的肝癌细胞株。方法：采用PCR定点突变的方法构建stathmin S25A的重组质粒,并用酶切和测序技术鉴定突变结果;采用脂质体转染的方法,筛选建立stathmin野生型（wt）和突变型（S25A）的肝癌细胞HCCLM6,用Western blotting进行鉴定。结果：定点突变构建stathmin S25A的重组质粒,测序证实stathmin 25位丝氨酸突变为丙氨酸。将stathmin wt和S25A转染HCCLM6,筛选建立稳定表达的肝癌细胞株,Westernblotting检测发现stathmin pS25在stathmin S25A细胞中的表达较stathmin wt和对照组细胞明显下降（P〈0.05）。结论：建立了稳定表达stathmin S25A的肝癌细胞株,为研究stathmin位点磷酸化在肝癌发病中的分子机制提供实验模型。     

大鼠肝癌自发肺转移裸鼠模型的建立

目的　建立大鼠肝癌细胞系自发性肺转移裸鼠模型。方法　大鼠肝癌细胞系C5F皮下接种 4周龄雄性和 7周龄雌性BALB/CA裸鼠 ,观察皮下成瘤及肺部和腹腔脏器的大体转移灶形成情况 ,取可能转移的器官作组织学检查 ,肺组织连续切片并计数镜下转移灶。结果　裸鼠皮下成瘤率 10 /10 ,雌性裸鼠中肺表面肉眼可见明显转移灶 ,转移率为 6/6,肺表面大体转移灶中位数45 ,镜下转移灶中位数 75 5个 /裸鼠 ,腹腔及其脏器均未见转移灶。雄性裸鼠未见大体和镜下转移灶。结论　该细胞系在雌性BALB/cA裸鼠中能充分表达自发转移潜能 ,肺脏是其优势转移器官。成功建立的大鼠肝癌细胞自发肺转移裸鼠模型为肝癌转移抑制基因的染色体功能定位研究提供了适宜的动物模型。     

CCR1趋化因子受体在人肝癌组织中表达及其临床意义

目的了解CCRl趋化因子受体在人肝癌组织中表达分布情况，探讨其表达水平与临床病理特性的关系。方法采用RT-PCR、免疫组化、Western blot技术检测45例肝癌组织及相应癌旁肝组织CCRl趋化因子受体表达及分布情况，并分析其表达水平与临床病理特性的关系。结果RT-PCR、Western blot在肝癌组织及相应癌旁肝组织中均可以检测到CCR1趋化因子受体mRNA及蛋白，肝癌组织表达水平高于癌旁肝组织。免疫组化显示CCR1趋化因子受体主要表达于肝癌细胞膜。CCR1mRNA表达水平与病人性别、年龄、血清AFP水平、肿瘤大小、分期无明显相关性，而与肿瘤是否有包膜（t=2．305，P〈0．05）、门静脉浸润显著相关（t=3．004，P〈0．01）。无门静脉浸润的肝癌组织中，47．4％免疫组化染色强度为＋＋～＋＋＋，而有门静脉浸润的肝癌组织中，80．8％染色强度为＋＋～＋＋＋，两者比较差异具有显著意义（X^2=5．511，P〈0．05）。结论肝癌细胞表达CCR1趋化因子受体，其表达水平与肝癌侵袭性尤其是门静脉浸润相关，有望成为判断肝癌侵袭性及预后的指标。     

α-干扰素治疗肝癌耐药性机制的研究

目的观察α-干扰素(IFN-α)治疗肝癌产生耐药性的过程,探讨其机制。方法裸鼠肝内原位接种裸鼠人肝癌高转移裸鼠模型LCI-D20肿瘤组织,随机分为7组,每组6只。其中治疗组于接种肿瘤后第2天皮下注射给予IFN-α(1．5×10~7 U/kg体重/d)20 d,治疗组A和B裸鼠于停药后第1和21天分别被处死；治疗组C和D于停药后第21天再次给予同剂量IFN-α(1．5×10~7 U/kg体重/d)联合格列卫(100mg/kg体重/d,灌胃)治疗20 d。对照组E～G分别在接种肿瘤后第28、48、68天被处死。观察裸鼠体重,肿瘤大小、体积,检测血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)浓度、肿瘤组织微血管密度。抽提A、D、E、G各组总RNA做关于血管生成SuperArray基因芯片。结果A～G组肿瘤的大小分别为0．27、1．54、3．22、2．23、0．68、1．93、3．98 g,其中组A和组E,组D和组G相比,肿瘤大小差异有统计学意义(P＜0．05)。外周血VEGF浓度组A和组E,组C、D和组G相比差异有统计学意义(P＜0．05)。芯片结果提示在IFN-α治疗过程中,肝癌组织VEGF mRNA和裸鼠血清中的VEGF仍保持较低水平,而PDGF-AA mRNA的表达水平逐渐升高。组A微血管密度显著低于组E,而在组C和组G间差异无统计学意义。HE染色显示治疗组与对照组相比,异常核分裂象增多,肿瘤周围包膜变薄,纤维成分减少。结论肝癌可对IFN-α治疗产生耐药性,可能的机制为肝癌肿瘤血管生成由VEGF依赖转化为PDGF依赖。     

噬菌体展示技术在肝癌肿瘤血管异质性研究中的应用和优化

目的克服体内噬菌体展示技术在肝癌肿瘤血管异质性研究中应用的技术障碍。方法采用噬菌体体内分布及代谢实验研究噬菌体在裸鼠体内的分布及代谢规律，比较噬菌体饱和灌注、聚肌苷（Poly Ⅰ）及不同的活体灌洗技术对组织中噬菌体分布的影响。结果肝脏等网状内皮系统器官可非特异性结合噬菌体。这种结合可被空白噬菌体饱和灌注所抑制（P〈0．01），而Poly Ⅰ无显著影响（P〉0．05）。左、右心室加门静脉灌洗较单纯左心室灌洗可显著减少组织血管中血液及未结合噬菌体的残留（P〈0．01）。结论经过改进优化的体内噬菌体展示技术可为肝癌肿瘤血管异质性研究提供稳定、高效的技术平台。     

经飞行质谱筛选门静脉癌栓血清蛋白标记物及纯化鉴定的研究

目的筛选肝细胞癌门静脉癌栓相关的血清蛋白标记物。方法收集肝癌无癌栓患者和肝癌门静脉癌栓患者血清各12例，以弱阳离子交换蛋白质芯片为检测介质，利用表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱测定出蛋白质谱，BioMarkerWizard软件筛选出差异蛋白峰，选择其中一个蛋白进行分离纯化和富集，利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱对其进行鉴定。结果在m／z 1100～30000范围内，检测出的100个蛋白峰中7个差异有统计学意义（P〈0．05），m／z为3397的蛋白峰在肝细胞癌伴门静脉癌栓组中上调，而m／z为7546、7896、8682、15104、15857和16457的蛋白峰在肝细胞癌伴门静脉癌栓组中下调；m／z为8682的差异蛋白经鉴定为载脂蛋白A—I，与无癌栓组比较，门静脉癌栓组中该蛋白表达降低。结论筛选出的蛋白分子标记物可能与肝细胞癌门静脉癌栓形成有关，有可能为肝癌和门静脉癌栓早期预测及治疗监测提供参考。     

小鼠胚泡着床前后子宫内膜细胞间粘附分子-1 mRNA表达水平的变化

目的　研究小鼠胚泡着床前后子宫内膜细胞间粘附分子1(ICAM1)在转录水平的表达变化。方法　小鼠雌雄合笼后建立小鼠早孕模型,用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR),测定ICAM1mRNA的表达。结果　小鼠正常动情期子宫内膜有一定ICAM1mRNA的表达,着床前后其表达显著升高,并在着床前一天即孕3d达到高峰,着床后逐渐出现下降趋势。结论　ICAM1在胚泡着床前后明显上调,和胚泡着床密切相关。     

LIF对体外培养小鼠孕早期胚胎发育及ICAM-1表达的影响

目的研究白血病抑制因子（ＬＩＦ）在胚胎发育中的作用并探讨其参与胚泡着床的机制。方法收集昆明种小鼠的单细胞受精卵,连续培养１２０ｈ,观察不同浓度ＬＩＦ对胚胎发育的影响;用免疫印迹法测定培养液中细胞间粘附分子（ＩＣＡＭ－１的表达水平。结果ＬＩＦ在０．１～１０ｎｇ／ｍｌ浓度之间对胚胎发育有促进作用,其作用在桑椹胚及胚泡期最明显（Ｐ＜０．０５）;ＬＩＦ增加胚胎ＩＣＡＭ－１的表达,其作用在０．１ｎｇ／ｍｌ浓度时最强,并随着浓度的增加而减弱。结论适应浓度的ＬＩＦ可促进胚胎发育,增加ＩＣＡＭ－１的表达,从而参与胚胎着床过程。     

E-选择素在胚胎着床过程中小鼠子宫内膜的表达规律

目的：研究E-selectin在胚胎着床及早期分化中的作用。方法：用RT—PCR、Immunoblot、Western blot法检测小鼠胚胎着床前后蜕膜组织E-selectin的表达。结果：E-选择素在孕4天的小鼠子宫内膜中的表达出现升高，第5天达到峰值，随后妊娠第6、第7天E-selectin蛋白的表达则逐渐下降至正常水平。结论：提示E-选择素可能参与了胚胎着床过程。