SLC基因修饰树突状细胞及不同免疫方式抗肿瘤作用探讨

目的：应用次级淋巴组织趋化因子（SLC）成熟肽基因／重组腺相关病毒（rAAV—SLC）转染树突状细胞（DC），探讨一种基因修饰DC的新方法及其抗肿瘤的生物学活性。方法：体外构建rAAV-SLC，按MOI为10、50、100与腺病毒（Ad2）协同转染小鼠骨髓来源成熟和未成熟DC，GFP作为成功转染的示踪蛋白。RT—PCR在mRNA水平、ELISA在蛋白水平检测SLC表达，Transwell检测转染DC的培养上清对T细胞的趋化作用。瘤苗的在体效应通过C57BL／6J小鼠肿瘤模型验证。皮下接种Hepal-6肿瘤细胞后成瘤小鼠分成3组：①生理盐水对照组，瘤内或足垫注射NS；②单纯DC对照组，瘤内或足垫注射未修饰DC；③SLC基因修饰DC组，瘤内或足垫注射SLC基因修饰的DC。每隔7天注射1次，观察各组小鼠肿瘤的生长情况。4周后分离瘤体，用荧光免疫组化检测瘤体内CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞浸润情况。结果：rAAV—SLC在MOI为100时能成功转染DC，未成熟DC的转染效率显著高于成熟DC，并产生对T细胞有明显趋化生物学活性的SLC。动物实验表明，瘤内注射SLC修饰后DC，肿瘤大小与对照组有明显差异，免疫组化显示瘤体内有较多的CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞浸润。足垫注射SLC修饰的DC与对照组相比，抗肿瘤作用无显著差异。结论：rAAV—SLC在Ad2的辅助下能有效转染未成熟DC并能表达具有趋化生物学活性的SLC。SLC基因修饰的树突状细胞瘤内注射以其对CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞的吸引作用而发挥了明显的抗肿瘤作用，同时也进一步证实用树突状细胞进行肿瘤生物免疫治疗时，不同免疫方式对疗效有明显影响。     

联合应用GH和Gln对短肠大鼠小肠粘膜上皮细胞谷氨酰胺酶和鸟氨酸脱羧酶活性的影响

目的 :探讨生长激素和谷氨酰胺促进小肠粘膜上皮细胞分裂增殖的作用途径及它们发挥协同作用的可能机制。方法 :选用 4 0只手术成功的SD短肠大鼠 ,按 2× 2析因实验设计随机分为四组 ,分别给予常规全肠外营养(STD组 ,n =1 0 )、附加谷氨酰胺 (Gln组 ,n =1 0 )、附加生长激素 (GH组 ,n =1 0 )及附加谷氨酰胺和生长激素全肠外营养 (GG组 ,n =1 0 ) ,持续 6天 ,取 8只正常大鼠模拟手术后第一天处死 ,作为基础对照组 (Gontrol组 ,n =8)。分别应用分光光度法和荧光分光光度法测定各组大鼠小肠粘膜上皮鸟氨酸脱羧酶和谷氨酰胺酶活性。结果 :谷氨酰胺能够显著增强小肠粘膜鸟氨酸脱羧酶和谷氨酰胺酶的活性 (P <0 .0 1 ) ,生长激素对这两种酶活性无明显影响 ,而联合应用谷氨酰胺和生长激素可明显增强此两种酶的活性 ,效果优于Gln的单独应用 (P <0 .0 1 )。结论 :研究表明联合应用生长激素和谷氨酰胺能显著增强短肠大鼠小肠粘膜上皮谷氨酰胺酶和鸟氨酸脱羧酶活性 ,促进小肠粘膜细胞对谷氨酰胺的代谢和多胺的生成 ,从而发挥其促进小肠粘膜细胞分裂增殖 ,防止小肠粘膜萎缩的发生的作用。     

人肝癌转移模型体系的建立

原发性肝癌(以下简称肝癌)的死亡率在全世界所有癌症中占第三位，是我国第二位癌症死亡原因。经过几十年的努力，肝癌临床和基础研究取得了许多进展，手术切除是肝癌获得长期生存的主要手段，在某些临床中心，肝癌根治性切除后5年生存率可达到40％．以上(我所治疗的肝癌病人的5年生存率在小肝癌切除术者中约为60％，大肝癌切除术者约为30％)。但术后5年复发率高达60％以上(小肝癌也达40％～50％)。转移复发已成为进一步延长肝癌病人生存期、提高远期疗效的瓶颈问题，也是最终攻克肝癌的关键。     

黄曲霉毒素的酶联免疫测定法及其在肝癌流行病学研究中的应用评价

作者对黄曲霉毒素(Aflatoxin,AFT)B_1和M_1(AFB_1和AFM_1)的酶联免疫测定法(ELISA),AFB_1摄入量和尿中AFM_1排出量与原发性肝癌死亡率间的关系;AFB_1-辣根过氧化物酶(AFB_1-HRP)的合成及其应用于AFB_1和AFM_1的ELISA检测进行了研究。指出ELISA对样品中AFM_1、AFB_1测定最佳范围分别为0.5～10、0.5～21ng/ml。 与薄层层析法(TLC)相比,ELISA有检出率高、重复性好及专一的特点。用C_(18) Seppak处理样品不仅有效且简便快速。用ELISA检查了220份食品和230份尿液样本,证明了AFT的摄入和排泄间有很好的正相关。提示在流行病调查中,尿中AFM_1可作为人群AFB_1摄入的指标。     

外源性神经节苷脂GM_3对Ca~（2＋）－ATP酶及红细胞胞浆Ca~（2＋）－浓度的影响

研究神经节苷脂ＧＭ３（简称ＧＭ３）对部分纯化的人红细胞膜Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的作用和对完整兔红细胞浆［Ｃａ２＋］的影响。结果表明：外源性ＧＭ３对Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的作用呈浓度依赖性双相调节即浓度为１～６．５μｍｏｌ／Ｌ时抑制酶活性，浓度大于６．５μｍｏｌ／Ｌ时激活酶活性；ＧＭ３不影响钙调素（ＣａＭ）对酶的激活；ＣＭ３对兔红细胞浆［Ｃａ２＋］也呈浓度依赖性双相调节即在ＧＭ３浓度低于６９μｍｏｌ／Ｌ时［Ｃａ２＋］有不同程度升高，浓度大于６０μｍｏｌ／Ｌ时则降低［Ｃａ２＋］。     

维生素K2对人肝癌细胞的抗黏附和抗侵袭作用

维生素K2的抗肿瘤作用国外已有报道。我们以肝癌高转移细胞系MHCC97为靶细胞，检测维生素K2的体外抗黏附和抗侵袭作用。     

ανβ3抗体对人肝癌细胞系MHCC97的黏附抑制作用

整合素介导的黏附行为与肿瘤的发生、发展、浸润及转移等过程密不可分。研究结果表明,整合素是细胞表面受体家族,通过识别细胞外基质中的RGD序列(Arg-Cly-Asp,精氨酸、甘氨酸、天冬氨酸)介导细胞与细胞外基质之间的黏附。为了进一步证实这一机制同样发生于人肝癌细胞,我们以人肝癌高转移细胞系MHCC97为靶细胞,以纤连蛋白 (FN)替代体外细胞基质,以体外细胞-基     

钙结合蛋白S100A6基因的研究进展

S100A6是EF-手型钙结合蛋白S100家族成员之一，参与多种生物学过程，与肿瘤的发生、浸润和转移关系密切，作为肿瘤鉴定的一种标记物，正日益受到重视。现对S100A6基因的结构、定位、分布及其与肿瘤的关系作一综述。     

用国产酶标板测定黄曲霉毒素的条件

用ELISA法测定黄曲霉毒素B_1及其代谢产物M_1,适合于大规模的流行病现场调查。由于主要试剂和酶标板都靠进口,难于在国内推广。我们改进了测定方法,并使用国产试剂和器材的稳定性、可靠性、重复性与进口抗体和酶标板相同。 材料与方法 材料 黄曲霉毒素B_1(AFB_1),黄曲霉毒素M_1(AFM_1),辣根过氧化物酶(HRP),抗AFM_1抗血清和AFB_1-HRP(见方法),ABTS(2,2'-azino-diethy bentiazoline-6-