人恶性黑素瘤细胞株A375中色素上皮衍生因子基因的突变

目的 探讨色素上皮衍生因子（PEDF）基因在恶性黑素瘤细胞系中的突变情况。方法 采用聚合酶链反应--单链构象多态性分析（PCR-SSCP）对人恶性黑素瘤细胞株A375和正常人黑素细胞中PEDF基因的所有8个外显子进行突变检测。对SSCP分析有异常泳动条带样本的PCR产物进行DNA 测序。结果 人恶性黑素瘤细胞株A375的第3到第7外显子都出现DNA泳动变位,其中以外显子5,6最为明显。PEDF基因第5,6外显子均存在突变。第5外显子的突变类型以单个碱基的缺失为主,第6外显子的突变类型则以单个碱基的置换为主。结论 PEDF基因的突变可能在恶性黑素瘤的发病中起一定作用。     

肝癌转移复发的临床蛋白质组学研究现状及进展

肝细胞性肝癌(HCC)是一种多基因参与、多因素、病理机制复杂的常见恶性肿瘤.该病多发于非洲、中国和东南亚地区,全世界每年约50～100万人死于肝癌.     

肝癌发生与转移过程中E—选择素在裸鼠肝、肺、肾微血管内皮细胞的表达

目的：观察肝原位种植肝癌裸鼠模型在肿瘤发生与转移过程中E－选择素在肝、肺、肾组织中的表达。方法：将人肝癌组织块直接种植于裸鼠肝内,术后15、17、19、21、40天取材,免疫组化法观察。结果：肝癌种植后第15－17天,肝、肺、肾组织中微血管内皮细胞E－选择素呈弱阳性表达,种植后第19天,肝血窦内皮细胞呈强阳性表达。种植后第19天,肺组织内E－t选择素表达增强。至40天时,表达最强,结论：E－选择素的表达和增强与肝癌的发生和转移有关。     

血清蛋白质组分析技术筛选肝癌自发抗体

目的采用血清蛋白质组分析技术(SERPA)筛选、鉴定肝癌自发抗体。方法双向电泳分离肝癌细胞系HCCLM3的总蛋白后将其转膜,肝癌、肝炎和正常组血清各8份与膜免疫印迹,图像分析确定不同血清免疫印迹图谱间的差异点及其与双向电泳图谱的对应关系,最后用基质辅助激光解吸飞行时间质谱进行鉴定。结果建立了高重复性HCCLM3的双向电泳图谱及其肝癌、肝炎及正常组血清的免疫印迹图谱,图谱均点数分别为603、70.75±24.25、68.50±23.44和41.38±15.05,肝癌、肝炎组图谱点数明显多于正常组,但肝癌与肝炎组差异无统计学意义。质谱鉴定确定了核蛋白、细胞骨架、代谢酶及热休克蛋白等五类肝癌自发抗体。结论SERPA是一种高通量筛选、鉴定肿瘤自发抗体的新技术,大量肝癌自发抗体的发现为肝癌进一步的免疫诊断及治疗奠定了基础。     

肝细胞生长因子(HGF)诱导肝癌Huh7细胞发生上皮间质转化(EMT)后细胞膜表面糖蛋白糖谱的变化

 目的  应用凝集素芯片技术寻找肝癌细胞表面转移相关的特征性糖谱。方法  应用肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导建立肝癌上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)细胞模型。通过凝集素芯片比较诱导前后细胞膜的糖谱改变,采用凝集素印迹和荧光细胞凝集素免疫组化方法验证芯片结果。结果  诱导后细胞对凝集素ACL、BPL、JAC、MPL、PHA E、SBA和SNA的亲和作用减弱,而对凝集素AAL、ConA、DBA、GSL Ⅱ、ECL、HAL、LCA、LTL、NML、NPL、PHA L、PTL Ⅱ和WFL的亲和作用增强。提示诱导后肝癌细胞表面出现了黏蛋白T/Tn抗原、平分型N-乙酰葡萄糖胺、α 2,6唾液酸和末端α或β连接的N-乙酰半乳糖胺结构减少;而末端和核心岩藻糖、高甘露糖、N-乙酰葡萄糖胺β 1,6分支和复杂型寡糖分支结构增多。结论  肝癌细胞发生EMT过程中细胞膜表面糖链结构改变,提示糖链结构与肝癌的转移密切相关,为有效控制肝癌转移、改善预后提供了新思路。     

Oncoprotein 18在肝癌侵袭转移过程中的作用

目的:探讨原癌蛋白18(Oncoprotein 18,Op18)在肝癌侵袭转移过程中的作用机制.方法:采用R N A干扰,抑制人肝癌细胞HCCLM3中Op18的表达,RT-PCR和Westernb l o t评价干扰效率;通过细胞粘附分析、体外Transwell分析法检测Op18表达缺失后对HCCLM3细胞粘附、运动和侵袭能力的改变;RT-PCR和免疫组织化学分别在48例未伴转移的肝癌组织和48例伴转移的肝癌组织中解析Op18表达与肝癌侵袭转移的关系.结果:RT-PCR和Western blot结果显示:在HCCLM3细胞中行RNAi后Op18表达被有效抑制,抑制率达到80%以上;Op18表达缺失后,在不同时间点(20、40和60 min)实验组细胞粘附能力(0.616±0.057、0.740±0.0713和1.001±0.083)较阴性对照组(0.944±0.068、1.196±0.115和1.441±0.053)明显下降(P<0.05);Transwell实验结果提示:经RNAi后实验组细胞运动、侵袭能力(运动:0.145±0.011,侵袭0.127±0.008)较阴性对照组(运动:0.206±0.008,侵袭:0.168±0.012)显著降低(P<0.01);分别在伴转移和未伴转移的肝癌组织中检测Op18的表达,RT-PCR(Op18与GAPDH相对比值:0.560±0.128vs 0.414±0.086)和IHC(积分吸光度值为:624.771±100.032 vs 413.786±71.833)实验结果均提示Op18在伴转移的肝癌组织中的表达更高(P<0.01).结论:Op18在肝癌的侵袭转移过程中发挥重要作用.     

凝集素芯片及其应用进展

凝集素芯片是糖组学研究的一项新技术。现就凝集素芯片的研究背景、原理、制备、应用和前景进行综述。     

P-选择素及其配体与肿瘤转移关系的研究进展

肿瘤转移为恶性肿瘤致死和临床治疗远期疗效较差的主要因素,细胞粘附为转移过程的关键步骤之一。有关研究表明Ｐ－选择素（Ｐ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ）及其配体与肿瘤浸润、侵袭和转移灶形成有关,并有可能成为肿瘤转移的预后指标和肿瘤标志。但Ｐ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ及其配体与肿瘤转移的关系,尤其是血小板Ｐ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ与肿瘤癌栓形成和转移的关系仍有待进一步研究。     

子宫内膜整合素蛋白β_3亚基在妊娠中的变化

为探讨整合素蛋白 β3亚基在胚胎着床期的作用 ,本实验应用特异性抗整合素蛋白 β3抗体 ,采用免疫和 Western印迹法 ,二氨基联苯胺显色 ,VDS扫描等技术 ,检测妊娠 d3、5、7、1 5小鼠子宫内膜及人分泌期子宫内膜和妊娠早期中整合素β3亚基的表达量。结果 :小鼠子宫内膜整合素蛋白 β3亚基表达量在妊娠 d5明显上升 ,至 d7时达高峰 (与对照组比较 ,P<0 .0 1 )。此后下降 ,d1 5时 ,整合素蛋白 β3的表达量与对照组相比 ,无明显差异。人蜕膜组织和分泌期子宫内膜均有整合素蛋白β3的表达。蜕膜整合素蛋白β3的表达量与胚囊大小无关 ,但比分泌期子宫内膜高 4～ 5倍 (P<0 .0 0 0 1 )。这些结果提示 :整合蛋白 β3亚基在子宫内膜中的特异性变化 ,可能启动、促进胚胎的粘附和着床 ,在着床过程中起重要作用。     

凝集素半乳糖结合蛋白3在人子宫内膜的表达

目的探讨凝集素半乳糖结合蛋白3（galectin-3）在子宫内膜的表达与子宫内膜容受性的形成和胚泡着床的关系。方法用RT-PCR和蛋白印迹法（Western blot）检测galectin-3 mRNA和蛋白在增生晚期和分泌中期子宫内膜的表达。用免疫组化方法检测galectin-3蛋白在子宫内膜的定位和表达。结果galectin-3mRNA和蛋白在分泌中期子宫内膜的表达高于增生晚期,galectin-3蛋白定位于上皮细胞和间质细胞。结论结果提示galeetin-3在分泌中期子宫内膜的高表达可能与子宫内膜容受性的形成和胚泡着床的过程有关。