肝癌高低转移细胞株差异表达基因的初步研究

目的：肝癌高低转移细胞株的基因表达谱的比较。方法：应用cDNA microarray技术，对肝癌高低转移细胞株的基因表达谱进行比较，并应用RT—PCR对部分差异表达的基因进行了验证。结果：肝癌高转移细胞株与低转移细胞株相比，有384个基因存在差异表达，其中12个是位于染色体8p上。选取4个基因用RT—PCR验证，结果与cDNA microarray结论基本一致。结论：肝癌高低转移细胞株基因表达存在明显差别。染色体8p上可能存在促进和抑制肝癌转移的基因。     

多途径丝裂原激活的蛋白激酶介导一氧化氮引起的肝癌细胞凋亡

目的研究非离子型的diazeniumdiolate类一氧化氮供体引起肝癌细胞凋亡的分子机制.方法利用免疫印迹、免疫沉淀、凝胶阻滞实验研究一氧化氮供体处理Hep3B肝癌细胞后,丝裂原激活的蛋白激酶、AP-1的激活以及和Hep3B肝癌细胞凋亡的关系.结果一氧化氮可引起细胞外信号调节蛋白激酶、c-jun N末端激酶和p38激酶的激活,特别是细胞外信号调节的蛋白激酶的持续激活,其中细胞外信号调节的蛋白激酶和c-jun N末端激酶的特异的阻断剂U0126和JNK抑制剂Ⅱ可阻断AP-1的激活和Hep3B细胞的凋亡,而p38激酶的阻断剂SB203580不能阻断AP-1的激活和Hep3B肝癌细胞的凋亡.结论一氧化氮通过激活细胞外信号调节蛋白激酶、c-jun N末端激酶,进而激活AP-1而引起Hep3B肝癌细胞的凋亡.     

健康人肝组织麦胚凝集素亲和型糖蛋白表达谱分析

目的分析健康人肝组织麦胚凝集素(wheatgermagglutinin,WGA)亲和型糖蛋白表达谱。方法从30例健康人肝组织混合样本的总蛋白中用WGA凝集素亲和层析分离纯化糖蛋白,再利用双向电泳结合SYPRO Ruby荧光染色进一步分离WGA亲和型糖蛋白。目的蛋白质点经质谱鉴定后对其进行生物信息学分析及功能分类。结果初步建立WGA亲和型糖蛋白的双向电泳图谱,图谱均点数为(650±50)个,质谱鉴定并去冗余共获116个蛋白。经生物信息学分析104个蛋白具有不同程度的N糖基化位点,最后按Gene Ontology的分类原则进行功能分类。结论凝集素亲和层析结合双向电泳荧光染色、质谱鉴定是一种高通量的检测方法,WGA亲和型糖蛋白表达谱的初步构建为后续研究奠定了基础。     

聚乙二醇修饰对二聚β肽抗肿瘤转移生物活性的影响

目的:比较聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)修饰对二聚β肽(β2)抗肿瘤转移活性的影响。方法:采用纤连蛋白(fibronectin,FN)包被细胞培养板作为细胞外基质成分(extracellularmatrix,ECM),观察β2和PEG修饰物(β2-PEG)对肝癌细胞株与FN黏附能力的影响;采用Matrigel法观察β2肽和β2-PEG对肿瘤细胞侵袭重组基底膜能力的影响。结果:β2和β2-PEG对SMMC-7721和HCCLM6细胞与FN黏附均有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量与时间相关性;PEG修饰物对2种肿瘤细胞的黏附抑制作用均较未修饰的β2肽明显增强(P<0.05)。β2和β2-PEG对HCCLM6细胞迁移和侵袭均有明显的抑制作用(P<0.05),迁移抑制率分别为54.6%和56.3%,侵袭抑制率分别为36.8%和46.6%,PEG修饰前后差异无统计学意义;β2和β2-PEG对SMMC-7721细胞也有显著的抑制作用,迁移抑制率分别为43.6%和45.7%,侵袭抑制率分别为33.6%和35.9%,修饰前后差异无统计学意义。结论:β2肽和β2-PEG对肿瘤细胞与FN的黏附具有特异的抑制作用,呈剂量与时间相关性,PEG修饰后抗黏附作用增强。β2肽和β2-PEG对2种肿瘤细胞的迁移和侵袭均有明显的抑制作用,但修饰前后差异无统计学意义。     

维甲酸和维甲类X受体各型基因在原发性肝癌组织中表达

目的 维甲类药物的分化诱导作用受特定组织表达受体的影响,了解肝 癌组织表达维甲酸受体和维甲类X受体的表达,以便选择特异的维甲类药物治疗肝癌。方法 根据GeneBank的序列,设计对RARα、RARβ、RARγ、RXRα、RXRβ、RXRγ基因的6对引物,用RT－PCR的方法检测18例肝癌组织在肝癌组织表达率分别为44．4％（8／18）,16．7％（3／18）,77．8％（14／18％）,88．9％（16／18）,77．8％（14／18）,16．7％（3／18）;癌周肝硬化组织分别为27．8％（5／18）,0％（0／18）,61．1％（11／18）,77．8％（14／18）,55．6％（10／18）,0％（0／18）。这些受体亚型表达的阳性率在肝癌组织似高于癌周肝硬化组织,但统计学亚型表达的阳性率在肝癌组织似高于癌周肝硬化组织,但统计学无显著意义（P＞0．05）,以β－actin为内标测定RARs和RXRs的相对表达量,RXRβ相对表达量高于癌周肝硬化组织（配对秩和检验,P＝0．0208）。结论 由于肝癌组织表达有RARs和RXRs,提示除了应用全反式维甲酸治疗肝癌外,尚探讨RXRs选择性维甲类药物治疗价值。     

细胞因子对白血病抑制因子在小鼠孕早期子宫内膜表达的调节

本研究观察了白细胞介素 - 1(IL - 1)、白细胞介素 - 6 (IL - 6 )、单、粒 -细胞集落刺激因子 (GM- CSF)对子宫内膜白血病抑制因子 (LIF)表达的调节 ,探讨围着床期 LIF表达的调节机制。给妊娠 2～ 4 d的小鼠分别腹腔注射不同剂量的 IL - 1、白介素 - 1受体拮抗剂 (IL- 1ra)、IL- 6、GM- CSF,对照组注射 PBS,用免疫印迹法逆转录 -聚合酶链反应进行子宫内膜 LIF蛋白和 m RNA的半定量分析。结果 :对照组 LIF蛋白水平为 39.6 4± 9.95,与对照组比 ,IL - 14μg/kg剂量组明显升高 (P<0 .0 1) ;IL- 6和 GM- CSF 0 .8和 4μg/kg剂量组均明显升高 (分别为 P<0 .0 5,P<0 .0 1)。对照组 L IFm RNA水平为 1.10± 0 .2 1、IL-1、IL- 6和 GM- CSF4 μg/kg剂量组明显高于对照组 (分别为 P<0 .0 5,P<0 .0 5,P<0 .0 1) ,IL - 1ra 2 0μg/kg剂量组与对照组相比明显下降 (P<0 .0 5)。表明 IL- 1、IL - 6、GM-CSF对孕早期小鼠子宫内膜 LIF转录和转录后水平均有上调作用 ,可能是 L IF在围着床期子宫内膜的规律表达的潜在正调节因子     

小鼠胚泡着床前后子宫内膜细胞间粘附分子-1 mRNA表达水平的变化

目的　研究小鼠胚泡着床前后子宫内膜细胞间粘附分子1(ICAM1)在转录水平的表达变化。方法　小鼠雌雄合笼后建立小鼠早孕模型,用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR),测定ICAM1mRNA的表达。结果　小鼠正常动情期子宫内膜有一定ICAM1mRNA的表达,着床前后其表达显著升高,并在着床前一天即孕3d达到高峰,着床后逐渐出现下降趋势。结论　ICAM1在胚泡着床前后明显上调,和胚泡着床密切相关。     

LIF对体外培养小鼠孕早期胚胎发育及ICAM-1表达的影响

目的研究白血病抑制因子（ＬＩＦ）在胚胎发育中的作用并探讨其参与胚泡着床的机制。方法收集昆明种小鼠的单细胞受精卵,连续培养１２０ｈ,观察不同浓度ＬＩＦ对胚胎发育的影响;用免疫印迹法测定培养液中细胞间粘附分子（ＩＣＡＭ－１的表达水平。结果ＬＩＦ在０．１～１０ｎｇ／ｍｌ浓度之间对胚胎发育有促进作用,其作用在桑椹胚及胚泡期最明显（Ｐ＜０．０５）;ＬＩＦ增加胚胎ＩＣＡＭ－１的表达,其作用在０．１ｎｇ／ｍｌ浓度时最强,并随着浓度的增加而减弱。结论适应浓度的ＬＩＦ可促进胚胎发育,增加ＩＣＡＭ－１的表达,从而参与胚胎着床过程。     

原发性肝细胞癌β-catenin基因突变的研究

β 连环蛋白 ( β ｃａｔｅｎｉｎ)不但在钙粘蛋白 (ｃａｄｈｅｒｉｎ)介导的细胞粘附 ,而且在细胞发育、分化、细胞骨架维持上起重要作用。β ｃａｔｅｎｉｎ基因突变所致 β ｃａｔｅｎｉｎ蛋白异常与结肠癌、黑色素瘤等发生关系密切 ,被认为是候选的癌基因之一〔1〕。有关 β ｃａｔｅｎｉｎ基因在肝癌中突变情况国外报道极少 ,国内尚未见报道。本文研究了上海医科大学肝癌研究所手术切除的 3 4例肝癌标本中 β ｃａｔｅｎｉｎ基因突变 ,现报告如下。1.资料和方法 :( 1)收集上海医科大学中山医院肝癌研究所 1999年 2～ 7月间手术切除的经…     

神经节苷脂GM3,GD3对小鼠巨噬细胞介导的细胞毒作用的影响

目的观察外源性神经节苷脂ＧＭ３、ＧＤ３对人肝癌ＳＭＭＣ┐７７２１细胞的杀伤活力的影响。方法应用３Ｈ┐ＴｄＲ掺入法测定ＧＭ３、ＧＤ３对巨噬细胞的细胞毒作用的影响。结果ＧＭ３、ＧＤ３对巨噬细胞短时间（４５分钟）作用后，两者都对细胞毒产生双相调节，但两者调节作用相反。ＧＭ３、ＧＤ３对巨噬细胞长时间（２４小时）作用后，两者均抑制细胞毒作用，ＧＤ３的抑制作用更强。结论ＧＭ３、ＧＤ３作用于巨噬细胞后对其杀伤ＳＭＭＣ┐７７２１细胞的细胞毒作用产生不同程度的抑制，提示两者在巨噬细胞介导的宿主免疫监视和免疫破坏中发挥作用