缺血性脑卒中患者血清中sICAM-1的变化

目的：检验血清中可溶性细胞间粘附分子－１（Ｓｏｌｕｂｌｅ ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕａｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ－１,ｓＩＣＡＭ－１）,观察脑缺血患者血清中ｓＩＣＡＭ－１的变化规律。方法：采用Ｄｏｔ ｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测脑缺血后不同时相,高危人群和健康人群血清中的浓度,结果进行方差分析。结果：脑缺血患者脑缺血８ｈ血清中ｓＩＣＡＭ－１的浓度增高,脑缺血２４ｈ浓度达到高峰,持续１５ｄ仍处于     

磷酸化蛋白质的检测技术进展

蛋白质的可逆磷酸化修饰是生物体内普遍存在的信息转导调节方式,几乎参与生命活动的所有过程。现分析磷酸化蛋白质的各种方法及其进展,尤其是近年来蛋白质组学技术的发展与应用为磷酸化蛋白质的定性、定量和功能研究提供了必要的技术,使大规模和系统性进行磷酸化蛋白质的研究成为可能。     

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌过程中癌前病变阶段差异表达蛋白质的筛选

目的 通过比较二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝细胞癌发生过程中不同阶段的蛋白质表达谱,筛选在大鼠肝癌前病变阶段起重要作用的蛋白质分子. 方法大鼠分为DEN组和正常对照组,诱癌过程中定期处死动物并取其肝组织;以γ-谷氨酰转肽酶染色阳性的肝细胞增生灶为标志,识别和获取肝癌前病变的组织标本.用双向电泳及基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法对大鼠正常肝组织、癌前病变组织和肝癌组织的全蛋白质组表达谱进行比较和鉴定.用Western blot和RT-PCR方法对部分差异表达蛋白质(如层黏连蛋白受体1和鲱精胺酶)进行表达水平的验证.结果 筛选出表达水平差异≥2倍的蛋白质共82种,其中在癌前病变阶段即发生明显改变的差异表达蛋白质有47种,包括在正常对照组、癌前病变组、肝癌组呈现依次上调的层黏连蛋白受体1等8种蛋白质和在上述组织中呈现依次下调的鲱精胺酶等22种蛋白质.Western blot和RT-PCR方法对层黏连蛋白受体1和鲱精胺酶表达水平的验证结果与双向电泳的结果相似.结论 大鼠肝癌形成过程中不同阶段的蛋白质表达谱有所不同,对癌前病变的差异表达蛋白质如层黏连蛋白受体1和鲱精胺酶等进行深入探讨,有望为人类肝癌的早期诊断和治疗提供线索.     

肝癌发生不同病理阶段血清蛋白质组的比较

目的 比较肝癌发生不同病理阶段血清蛋白质组的表达变化情况,从中寻找特异性标志物.方法 用双向凝胶电泳分离正常人,慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者的血清蛋白质,结合质谱技术对差异点进行鉴定; Western blot检测结合珠蛋白β链以验证蛋白质水平的表达.计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示,采用方差分析和LSD检验进行两两比较.结果 4组血清的双向电泳图谱经软件匹配分析,并与基质辅助激光解析电离飞行时间质谱相结合,成功鉴定出结合珠蛋白,SAA1、SP40等30个差异蛋白质点,K cluster聚类分析不同的变化模式.在差异蛋白质点中,7个蛋白质点均为结合珠蛋白,呈现由正常→肝炎→肝硬化持续下调、到肝癌又上调的模式.Western blot证实结合珠蛋白β链的表达与双向电泳表达相一致.结论 在肝癌发生的动态过程中各疾病阶段的血清蛋白质差异表达有4种明显变化模式,可能为肝癌的早期诊断和预后提供依据,与肝癌发生发展相关的结合珠蛋白很可能是肝硬化发展到肝癌的一个潜在早期诊断标志物.     

膜联蛋白A4对肝癌细胞株MHCC97H黏附能力及黏附相关基因表达的影响

目的探讨人膜联蛋白A4(AnnexinA4,ANXA4)对肝癌细胞株MHCC97H黏附能力的影响及其相关机制。方法化学合成针对ANXA4序列特异性小干扰RNA,用脂质体LipofectamineTM2000转染人肝癌细胞株MHCC97H;RT-PCR和western blot检测RNA干扰后ANXA4 mRNA和蛋白质的表达水平;黏附实验检测ANXA4表达下降对细胞黏附能力的影响;荧光定量RT-PCR检测RNA干扰后黏附相关基因表达的变化。结果荧光定量RT-PCR及western blot结果表明,经siRNA干扰后,ANXA4 mRNA和蛋白质表达水平明显降低;细胞黏附实验结果显示,与空白对照组的0.293±0.019和Mock组的0.305±0.018相比,实验组为0.234±0.013,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光定量RT-PCR结果显示,与阴性对照组相比,实验组ITGA5、ITGB1、E-cadherin mRNA表达水平下调,ICAM1、CD44、OPN mRNA表达水平上调,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 ANXA4可能通过调节黏附相关基因的表达水平影响细胞的黏附能力,参与肝癌的发生和发展进程。     

基质金属蛋白酶-9与肝细胞癌侵袭转移性的关系

目的：揭示基质金属蛋白酶－９（ＭＭＰ－９）与肝细胞癌（ＨＣＣ）侵袭转移性的关系,并探索ＭＭＰ－９判断肝细胞癌侵袭转移性的作用。方法：通过逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）对正常肝、ＨＣＣ及其癌旁肝组织、癌栓组织中的ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ进行半定量研究,并与ＨＣＣ侵袭转移的病理指标进行统计分析。结果：正常肝、ＨＣＣ及其癌旁组织、癌栓组织中均有ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ表达;癌组织、癌栓组织中,ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ水平增高与ＨＣＣ侵袭转移性有关;癌组织ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ水平高于癌旁组织,ＭＭＰ－９是判断ＨＣＣ侵袭转移性的重要指标。结论： ＭＭＰ－９与ＨＣＣ侵袭转移性有关,ＨＣＣ组织中的ＭＭＰ－９ ｍＲＮＡ水平是否高于癌旁组织可作为ＨＣＣ侵袭转移性的指标。     

亲和纯化技术联合质谱分析筛选乳腺癌中p90核糖体S6蛋白激酶4相互作用蛋白

背景与目的：p90核糖体S6蛋白激酶4基因(ribosomal S6 kinase 4 gene,RSK4)作为抑癌基因,能够抑制细胞增殖、迁移并诱导细胞的凋亡,但与其配合发挥相应功能的相互作用蛋白尚不明确。该研究利用Flag标签纯化技术和质谱分析筛选鉴定乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的RSK4相互作用蛋白。方法：构建含有RSK4全长和Flag亲和标签的真核表达载体pcDNA3.1/EGFP-RSK4-Flag,将其转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞株,72 h后收集细胞蛋白。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain re-action,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测RSK4表达情况。运用标签分离纯化RSK4蛋白,液相质谱/质谱分析技术(liquid chromatography mass spectrometry/mass spectrometry,LC-MS/MS)鉴定RSK4相互作用蛋白,通过生物信息学的方法(GO分析和IPA分析)归纳分析互作蛋白以及与RSK4相互作用机制。结果：通过标签纯化联合质谱分析成功鉴定出丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶38(serine/threonine-protein kinase 38,STK38)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶38类(serine/threonine-protein kinase 38-like,STK38L)、MOB激酶致活因子2(MOB kinase activator 2,MOB2)、蛋白精氨酸N甲基转移酶5(protein arginineN-methyltransferase 5,PRMT5)等24个RSK4相互作用蛋白。对所鉴定出的互作蛋白进行生物信息学分析,提示RSK4互作蛋白组参与包含细胞凋亡和细胞迁移运动等在内的多种生物信号通路。结论：利用亲和纯化技术联合质谱鉴定成功筛选出RSK4相互作用蛋白并通过生物信息学分析获得了RSK4参与乳腺癌细胞的凋亡、迁移相关生物调控网络。     

高转移人肝癌裸鼠模型和细胞系的建立、研究与应用

本课题受国家重点基础研究发展规划基础基金项目(G1998051211)和上海市医学领先专业基金项目(983001)资助,围绕肝癌转移复发这一重大问题,建立了高转移人肝癌裸小鼠模型和细胞系,并进行了转移机制及干预研究。 1.首先采用原位移植策略,将肝癌病人的肝内转移灶接种到雄性裸小鼠肝内传代并筛选,建成高转移人肝癌裸鼠模型LCI-D20,该模型模拟了肝癌病人的临床病理过程。潜伏期1周,第2周在呈肝     

低糖下调HSF1抑制肝癌细胞EMT及相关转移

目的分析低糖(LG)对肝癌细胞上皮间质转化(EMT)相关转移的影响以及热休克因子1(HSF1)在其中的作用。方法分别用LG和对照高糖(Control)培养基培养肝癌细胞;用Transwell迁移试验检测细胞的迁移能力;利用shRNA干扰HSF1,并采用HSF1基因回补(shRES)策略,检测HSF1在低糖抑制肝癌细胞EMT及转移中的作用。结果 LG抑制肝癌细胞的EMT样的形态学改变,抑制其"钙黏着蛋白转换"和迁移能力;此外,葡萄糖限制还可引起HSF1下调,导致E-钙黏蛋白(ECadherin)表达增高,N-钙黏蛋白(N-Cadherin)表达降低;LG培养时,敲减HSF1后肝癌细胞的迁移能力增强(P0.05),ECadherin降低,N-Cadherin增高,EMT作用增强,而Control培养时无此现象;HSF1基因回补(shRES)后肝癌细胞EMT及迁移能力再次被抑制。结论 LG可下调HSF1,抑制肝癌细胞的EMT及迁移能力,为肝癌治疗提供新的策略。     

子宫内膜整合素蛋白β_3亚基在妊娠中的变化

为探讨整合素蛋白 β3亚基在胚胎着床期的作用 ,本实验应用特异性抗整合素蛋白 β3抗体 ,采用免疫和 Western印迹法 ,二氨基联苯胺显色 ,VDS扫描等技术 ,检测妊娠 d3、5、7、1 5小鼠子宫内膜及人分泌期子宫内膜和妊娠早期中整合素β3亚基的表达量。结果 :小鼠子宫内膜整合素蛋白 β3亚基表达量在妊娠 d5明显上升 ,至 d7时达高峰 (与对照组比较 ,P<0 .0 1 )。此后下降 ,d1 5时 ,整合素蛋白 β3的表达量与对照组相比 ,无明显差异。人蜕膜组织和分泌期子宫内膜均有整合素蛋白β3的表达。蜕膜整合素蛋白β3的表达量与胚囊大小无关 ,但比分泌期子宫内膜高 4～ 5倍 (P<0 .0 0 0 1 )。这些结果提示 :整合蛋白 β3亚基在子宫内膜中的特异性变化 ,可能启动、促进胚胎的粘附和着床 ,在着床过程中起重要作用。