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钠钾泵抑制剂通过调节细胞周期相关蛋白的生成介导肝癌HepG2细胞周期S期阻滞与凋亡 总被引:4,自引:3,他引:1
目的研究钠泵抑制剂哇巴因(ouabain)和华蟾毒配基(cinobufogenin)对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用及细胞周期的改变,初步分析其机制。方法以人肝癌细胞HepG2为靶细胞,MTT比色法检测哇巴因和华蟾毒配基对HepG2细胞增殖的影响;Hoechst 33342荧光染色检测细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞周期;实时定量PCR和Western blot检测CyclinA1、CDK2、PCNA和p21CIP1表达的变化。结果哇巴因和华蟾毒配基可明显抑制HepG2细胞增殖,抑制作用呈时间-浓度依赖性。荧光染色显示药物处理24h后,细胞呈现典型的凋亡形态特征;细胞周期分析显示,实验组S期细胞比例升高,实时定量PCR和Western blot结果显示:哇巴因和华蟾毒配基可下调CyclinA1、CDK2和PC-NA的表达(P<0.05),上调p21CIP1的表达(P<0.05)。结论钠泵抑制剂可抑制肝癌HepG2细胞的增殖,引起细胞周期S期阻滞,诱导细胞凋亡,这与其调节细胞周期相关蛋白的生成关系密切。 相似文献
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以哇巴因为靶分子,从噬菌体7肽库中筛选与哇巴因特异性结合的短肽.经过3轮淘筛并通过ELISA法鉴定,获得14个阳性克隆,通过对噬菌体ssDNA电泳鉴定和序列分析筛选得到3种短肽:肽A、B和C的筛选一致率分别为64.3%(9/14),28.6%(4/14)和7.14%(1/14).Genbank中蛋白质同源性分析显示,肽A、B、C均不与钠泵蛋白同源.放射性配基受体结合法检测结果表明,合成的肽A能够与哇巴因结合.哇巴因特异性结合短肽的获得将为阻遏内源性哇巴因与钠泵的结合、防治高血压奠定基础. 相似文献
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【目的】脑源性神经营养因子(BDNF)对体外培养大鼠神经干细胞(NSCs)诱导分化的影响。【方法】体外克隆化培养获得的NSCs中分别加入不同浓度的BDNF,采用倒置光显微镜观察细胞克隆形成,透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化,免疫组化的方法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。【结果】在倒置光显微镜下可见细胞接种后5 d形成小细胞球,7 d成为大小不等的细胞克隆。在电镜下可见具有典型的神经干细胞和神经胶质样细胞特征。经BDNF处理7 d后星形胶质样细胞增多,且突起的长度随浓度的增加逐渐延长,尤以40 ng/ml组突起最为显著(P〈0.05)。免疫细胞化学检测GFAP的阳性颗粒位于细胞浆中,经40 ng/mlBDNF诱导后阳性率可达86.1%,与对照组(13.1%)比较有显著性差异。【结论】BDNF可诱导神经干细胞分化为星形胶质细胞。 相似文献
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蟾蜍灵是蟾蜍毒素的主要成分之一,蟾蜍毒素具有强心、麻醉、解毒、止痛、开窍、醒神等药理作用,已被广泛应用于临床。近年来发现,含有蟾蜍毒素的中药制剂在体外能抑制多种肿瘤细胞生长,诱导白血病细胞的分化。临床观察提示,含有蟾蜍毒素的中药制剂对肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、白血病等具有明显的抑制作用。Numazawa[1]研究表明,蟾蜍毒素的各种成分以剂量依赖的方式抑制K562细胞生长。在所有的蟾蜍毒素中,蟾蜍灵是诱导白血病细胞分化最有效的成分,蟾蜍灵在较低浓度(1×10-8~1×10-9mol/L)能够在较宽的范围内(有较宽的白血病细胞谱)引起人… 相似文献
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免加热工艺大蒜提取物对结肠癌THC8908细胞活性的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】研究免加热工艺的大蒜提取物对结肠癌细胞活性的影响,为免加热工艺提取的大蒜用于预防结肠癌提供理论依据。【方法】以结肠癌细胞系THC8908为靶细胞,用MTT比色法检测免加热大蒜提取物对结肠癌细胞活性的影响,在倒置显微镜下观察培养细胞的形态学改变,在荧光显微镜下观察药物干预后细胞的存活、凋亡或坏死。【结果】免加热大蒜提取物浓度在3mg/ml时对肿瘤细胞活性的抑制率为51.9%,浓度为6mg/ml时抑制率82.6%。倒置显微镜观察药物处理后细胞变圆、脱壁,解离成簇状分布的小体。荧光显微镜可观察到药物处理后,染色质凝集,细胞凋亡。【结论】免加热工艺提取的大蒜有较强的抑制结肠癌细胞活性,抑制率与药物浓度具明显的量效关系,且能有效诱导结肠癌细胞凋亡。 相似文献
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目的观察过氧化物酶体激活物活化受体γ (PPARγ)的配体土槿乙酸(PLAB)联合维甲类X受体α (RXRα)的配体9-顺式维甲酸(9-cis RA)对白血病细胞生长的影响。方法应用MTT 法检测细胞生长抑制率,流式细胞术和Hoechst33342/PI染色分析HL-60细胞凋亡及细胞周期变化,RT-PCR检测PPARγ和RXRα mRNA表达。结果HL-60细胞系上有PPARγ和RXRα的表达,经配体联合作用后能明显抑制细胞生长,呈剂量依赖关系;细胞出现明显凋亡形态学改变和亚G1峰;PPARγ和RXRα mRNA表达明显增强。结论PLAB能显著增强9-cis RA对HL-60细胞的生长抑制作用,其机制与凋亡诱导效应有关。 相似文献
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目的探讨极光激酶(AURK)在肝癌中的作用,以及蟾酥活性成分华蟾毒配基和蟾蜍灵下调AURK表达和抑制肝癌Hep G2细胞增殖的机制。方法 Kaplan-Meier生存函数法分析极光激酶A(AURKA)和极光激酶B(AURKB)m RNA表达水平与肝癌患者生存期的关系;MTT法检测Hep G2细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期变化,蛋白免疫印迹法检测AURKA、AURKB、Xklp2靶向蛋白(TPX2)、染色体结构维持蛋白2(SMC2)、DNA拓扑异构酶2(TOP2A)和细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)的表达水平。结果 Kaplan-Meier生存分析显示AURKA和AURKB m RNA表达水平与肝癌患者生存期呈现显著负相关;华蟾毒配基和蟾蜍灵可抑制Hep G2细胞生长,抑制效应呈现时间和浓度依赖性;华蟾毒配基和蟾蜍灵均引起细胞周期G2/M期阻滞,下调AURKA、AURKB、TPX2、SMC2、TOP2A和CDK1蛋白表达(P0.05)。结论 AURKA和AURKB m RNA表达水平与患者生存期呈现显著负相关。华蟾毒配基和蟾蜍灵能有效促使AURKA和AURKB表达下调,调控有丝分裂相关分子,引起Hep G2细胞周期阻滞,从而抑制其增殖。 相似文献
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目的 观察过氧化物酶体激活物活化受体γ(PPARγ)的配体土槿乙酸 (PLAB) 联合维甲类X受体α(RXRα)的配体9-顺式维甲酸 (9-cis RA) 促进白血病细胞凋亡的作用,探讨其作用机制。 方法 应用透射电子显微镜、琼脂糖凝胶电泳分析 H-60 细胞凋亡,RT-PCR 检测 HL-60 细胞 Cyclin D1 和 CDK4 mRNA 表达。 结果HL-60细胞经配体联合作用后,电镜下可见明显细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳出现 DNA Ladder,Cyclin D1 及 CDK4 mRNA 的表达均降低,且联合用药组下降程度明显较单独作用组大 (P<0.05)。结论PLAB 联合 9-cis RA 抑制 HL-60 细胞生长,其机制与凋亡诱导效应相关。 相似文献
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在细胞生物学课程“分子与细胞”模块中蛋白质的空间结构既是教学重点,也是教学难点,学生常常无法准确理解蛋白质从低级到高级结构的空间排列组合。将实验性的蛋白质折叠电子游戏Foldit运用于教学活动中,大大激发学生的学习兴趣,同时培养了学生空间想像能力、模型构建能力,使教学难点得以成功地化解,取得了较好的教学效果。 相似文献
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目的:通过检测钠钾泵(Na+/K+-ATPase)抑制剂哇巴因和华蟾毒配基对肿瘤细胞存活的影响,研究其通过调节ERK信号通路诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法:以人肝癌细胞HepG2为靶细胞,检测Na+/K+-ATPase的活性变化,Hochest33342荧光染色检测细胞形态学变化;单细胞电泳检测细胞DNA损伤程度,钙离子荧光探针检测Ca2+浓度变化;Westernblot检测Caspase-3、ERK的表达变化。结果:哇巴因和华蟾毒配基可抑制Na+/K+-ATPase的活性;可使HepG2细胞呈典型的凋亡形态特征;单细胞电泳显示其可损伤HepG2细胞DNA双链;Fluo-3AM检测显示哇巴因和华蟾毒配基促进了Ca2+浓度增高;Western blot显示其可促进Caspase-3的活化,上调ERK磷酸化水平。结论:Na+/K+-ATPase抑制剂可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,导致细胞DNA损伤,诱导细胞内游离Ca2+浓度增高,促进细胞凋亡途径中主要蛋白Caspase-3的活化。而ERK信号通路在哇巴因和华蟾毒配基诱导的HepG2细胞凋亡过程中发挥着关键调控作用。 相似文献