维甲酸对胃癌细胞生长抑制及凋亡的诱导作用

目的:研究9-顺-维甲酸(9-cis-RA)对人胃低分化黏液腺癌细胞(MGC80-3)的作用。方法:MTT比色法观察9-cis-RA对MGC80-3细胞株的生长抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,Hoechst33342/PI双荧光染色和DNA凝胶电泳技术分析细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果:9-cis-RA可抑制MGC80-3细胞生长,半数抑制浓度(IC50)为8·07×10-6mol/L;显微镜观察可见细胞凋亡特征性改变;10-5mol/L浓度的9-cis-RA药物作用后96h可明显诱导MGC80-3细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测到DNA梯带;流式细胞仪检测肿瘤细胞出现典型亚二倍体凋亡小峰,G0/G1期细胞百分率明显升高,由对照组的(61·5±2·2)%增加到(74·3±4·7)%,F=149·795,P=0·000;同时处于S期的细胞数减少,由对照组的(26·3±1·3)%减少到(17·2±1·4)%,F=143·936,P=0·000。细胞周期出现G1期阻滞。结论:9-cis-RA对MGC80-3细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。     

Bufalin对MGC-803细胞生长、分化的影响

目的 :以低分化胃腺癌细胞系MGC 80 3为实验对象 ,观察了蟾酥提取物bufalin对其生长、分化的影响。方法 :应用台盼蓝染色法、 76 90 XU荧光染色法和电子显微镜等观察细胞生长、分化。结果 :0 0 1μmol/Lbufalin可显著抑制细胞生长 ,细胞粘附力下降 ,由梭形趋于圆形 ,核质比下降 ,细胞内核糖体和线粒体数目减少 ,内质网不如对照组细胞发达 ;76 90 XU荧光染色显示 ,用药 72h ,约 71%的细胞发生分化。结论 :bufalin能有效诱导胃癌MGC 80 3细胞分化     

鲨鱼软骨制剂诱导人肝癌细胞凋亡及p21WAF1和PCNA表达调控的研究

目的：探讨鲨鱼软骨制剂（ＳＣＰ）能否诱导ＳＭＭＣ７７２１细胞凋亡及其机制。方法：以不同浓度ＳＣＰ加入体外培养的ＳＭＭＣ７７２１细胞中,用ＭＴＴ比色法,荧光显微镜,琼脂糖凝胶电泳和免疫细胞化学方法,观察ＳＭＭＣ７７２１细胞形态学,生化和基因表达的变化。结果：ＳＣＰ明显抑制ＳＭＭＣ７７２１细胞生长,ＩＣ５０值为１ｍｇ／ｍＬ,荧光显微镜下可见典型的凋亡细胞的形态学改变;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带（ＤＮＡ     

哇巴因抑制钠泵阻β1亚单位和VE-cadherin减弱血管内皮细胞连接功能

目的 探讨钠泵抑制剂哇巴因对血管内皮细胞连接的影响及机制.方法 以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为靶细胞,Hoechst33342/PI双荧光染色法观察哇巴因作用后细胞凋亡或坏死特征,透射电镜和光镜观察细胞形态结构变化.应用半定量聚合酶链反应检测钠泵α1亚单位、β1亚单位、VE-cadherin和Snail mRNA的表达.结果 0.1μmol·L-1哇巴因作用HuVECs 24～48 h,细胞死亡以凋亡为主,10μmol·L-1哇巴因作用24 h,引起细胞坏死;对照组细胞间的细胞连接数量多,结构清晰,而经哇巴因作用后,细胞连接丧失,细胞脱落.哇巴因作用HuVEcs后,钠泵α1亚单位和Snail表达上调,β1亚单位和VE-cadherin表达下降,其改变均呈剂量和时间依赖性.结论 哇巴因通过下调血管内皮细胞钠泵β1亚单位和VE-cadherin的表达使细胞连接功能减弱.     

哇巴因对血管内皮细胞ECV304细胞凋亡及胞内游离钙离子和活性氧浓度的影响

目的研究哇巴因(毒毛花苷G)对人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡的诱导作用,并探讨其可能的作用机制。方法哇巴因0.01,0.05,0.1,0.5,1和10μmol·L-1与ECV304细胞作用24,48和72h,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33342/碘化丙锭双荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,激光共聚焦显微镜观察细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)和活性氧(ROS)浓度,逆转录PCR和Western印迹法检测胱天蛋白酶3mRNA和蛋白表达。结果哇巴因在0.01～10μmol·L-1浓度范围内与ECV304细胞分别作用24,48和72h,对细胞存活的抑制率明显增加,且呈浓度和时间依赖性,24,48和72h浓度-效应相关系数分别为0.984,0.994和0.997(P<0.05);哇巴因作用24,48和72h的IC50值分别为0.624,0.184和0.041μmol·L-1,时间-效应相关系数为0.974(P<0.05)。哇巴因0.1μmol·L-1与ECV304细胞作用24h,细胞凋亡百分率由正常对照组的(4.2±0.5)%升高到(26.0±3.2)%,作用48h,细胞凋亡率由(4.7±0.5)%升高到(36.5±5.3)%,差异有统计学意义(n=3,P<0.01);同时细胞出现染色质凝集。哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1分别与ECV304细胞作用12,24和36h,[Ca2+]i和ROS浓度呈浓度和时间依赖性增加,在哇巴因0.5μmol·L-1时[Ca2+]i和ROS浓度的时间-效应相关系数分别为0.912和0.924,作用36h时[Ca2+]i和ROS浓度的浓度-效应相关系数分别为0.889和0.907(P<0.05)。逆转录PCR和Western印迹法分析显示,哇巴因0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24h后,胱天蛋白酶3mRNA表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);哇巴因0.01,0.1和0.5μmol·L-1作用ECV304细胞24h,胱天蛋白酶3蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论哇巴因可诱导人脐静脉血管内皮细胞ECV304凋亡,其机制可能与增加[Ca2+]i和ROS浓度及胱天蛋白酶3表达有关。     

维甲类X受体RXRα蛋白在结直肠癌组织中的表达及意义

【目的】探讨RXRα基因蛋白在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。【方法】选取结直肠癌标本53例,良性腺瘤标本31例;以正常结直肠粘膜标本37例作为对照组,用免疫组织化学ABC法检测RXRα的表达变化。【结果】RXRα在正常粘膜、良性腺瘤和结直肠癌组阳性表达率分别为89.2%、70.9%和49.1%,与正常粘膜组和良性腺瘤组比较,结直肠癌组RXRα表达率下降,差异有显著性(P<0.05);RXRα蛋白表达与肿瘤分化程度无相关性(P<0.05),而与肿瘤淋巴结转移和临床病理分期密切相关(P<0.05)。【结论】结直肠癌组织中RXRα蛋白表达显著低于良性腺瘤和正常粘膜组织,提示RXRα蛋白在结直肠癌演变中具有重要意义。     

维生素K2抑制MGC—3细胞生长的实验研究

目的探讨维生素K2(VK2)抑制肿瘤细胞生长的机制.方法以人低分化胃腺癌细胞系MGC80-3为靶细胞,应用MTT法检测VK2的生长抑制作用,并以流式细胞仪、荧光显微镜、电镜和DNA凝胶电泳技术等研究细胞调亡形态学改变和凋亡率.结果10μmol/L及以上浓度的VK2处理48h可显著抑制MGC80-3细胞生长(P＜0.01),细胞呈明显的形态学改变细胞皱缩,染色质凝集,分布于核膜内缘,凋亡小体形成,基因组DNA片段化,胞内RNA含量下降,凋亡细胞百分率呈药物浓度依赖性.结论VK2能有效地抑制MGC80-3细胞生长,诱导凋亡是其重要机制之一.     

鲨鱼软骨制剂诱导人肝癌细胞凋亡及p21WAF1和PCNA表达调控的研究

目的：探讨鲨鱼软骨制剂（ＳＣＰ）能否诱导ＳＭＭＣ７７２１细胞凋亡及其机制。方法：以不同浓度ＳＣＰ加入体外培养的ＳＭＭＣ７７２１细胞中,用ＭＴＴ比色法,荧光显微镜,琼脂糖凝胶电泳和免疫细胞化学方法,观察ＳＭＭＣ７７２１细胞形态学,生化和基因表达的变化。结果：ＳＣＰ明显抑制ＳＭＭＣ７７２１细胞生长,ＩＣ５０值为１ｍｇ／ｍＬ,荧光显微镜下可见典型的凋亡细胞的形态学改变;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带（ＤＮＡ     

鲨鱼软骨抽提物诱导人胃癌细胞凋亡并下调Bcl-2表达

目的：探讨鲨鱼软骨抽提物(SCP)诱导人胃癌MGC80—3细胞调亡的作用机制。方法：以不同浓度SCP加入体外培养的MGC80—3细胞中，用MTT比色法检测细胞存活率；Hoeehst33342／PI荧光染色，荧光显微镜分析凋亡细胞百分率；流式细胞术进行细胞凋亡定量；琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带；免疫细胞化学染色法检测Bel-2蛋白的表达。结果：SCP明显抑制(MGC80—3细胞生长，IC50值为1mg／ml；荧光显微镜下可见60％以上细胞为凋亡细胞的形态学改变；琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带(DNA ladder)；免疫细胞化学检测显示Bcl-2表达明显降低。结论：SCP诱导人胃癌MGC80—3细胞凋亡，其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白的表达水平有关。     

蟾蜍灵诱导白血病HL-60细胞分化及相关基因表达

目的：研究中药蟾酥中蟾毒成分蟾蜍灵(bufalin)的抗癌机制。方法：以早幼粒白血病HL－60细胞为靶细胞，应用电镜技术观察bufalin诱导的细胞分化，免疫组化方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子p21^WAF1的表达。结果：0．001μmol/L bufalin作用HL－60细胞，细胞向粒细胞方向分化，p21^WAF1表达显著升高，而PCNA表达显著下降，二者显著负相关（P＜0．01）。结论：bufalin诱导HL－60细胞分化，与其上调p21^WAF1的表达、下调PCNA表达有关。