PPARγ和RXRα配体联用对白血病细胞生长作用机制的研究

 目的　研究过氧化物酶体增生物活化受体（PPARγ）和维甲类X受体（RXRα）在人类白血病细胞（HL-60、K562、U937）中的表达及其对配体作用的反应。方法　采用MTT法检测细胞生长;半定量RT-PCR法检测PPARγ和RXRαmRNA的表达。结果　PPARγ和RXRα在HL-60细胞中有较强表达,在K562、U937细胞中表达较弱。PPARγ的配体土槿乙酸（PLAB）能显著抑制3株细胞的生长,PLAB与RXRα的配体9-顺式维甲酸（9-cisRA）联合作用时,与PLAB单独作用比较,对受体高表达的HL-60细胞抑制作用增强较明显（P＜0.05）,但对K562、U937的作用增强不明显（P＞0.05）。PLAB和9-cisRA分别上调HL-60细胞PPARγ和RXRα的表达,且联合作用组显著高于单独作用组（P＜0.05）。结论　在HL-60、K562、U937细胞中,HL-60细胞PPARγ和RXRα表达最强,这对配体发挥作用可能是必需的,配体发挥的抑制细胞生长的效应可能与其介导的信号途径有关。     

细胞核受体RXRα在2,2',4,4'-四溴二苯醚神经毒性中的作用及其机制

目的：探讨视黄醛X受体（RXRs）为核心的多个核受体在2，2'，4，4'-四溴二苯醚（BDE-47）致神经细胞毒性中的相互作用，揭示受体介导的多溴二苯醚（PBDEs）神经毒性效应的分子机制。方法：构建人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH的RXRα基因敲除细胞株及高表达细胞株（分别命名为RXR/KO-SK-N-SH和RXR/OE-SK-N-SH细胞）；CCK-8法分别检测SK-N-SH（野生型）、RXR/KO-SK-N-SH和RXR/OE-SK-N-SH细胞在BDE-47浓度分别为1、5、10、20、50、100、150、200 μmol/L处理12、24、48、72 h时的细胞增殖率；qPCR和Western blot法分别检测上述3种细胞中RXRα、TRα、TRβ、PPARα、PPARγ的mRNA和蛋白表达水平。结果：在染毒时间分别为12、24、48、72 h时，不同浓度BDE-47作用下3种细胞的增殖率比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。BDE-47对RXR/KO-SK-N-SH细胞的IC₅₀是野生型和RXR/OE-SK-N-SH细胞的1/2。BDE-47处理3种细胞后，RXRα的mRNA和蛋白表达水平在野生型和RXR/OE-SK-N-SH细胞中显著升高，SK-N-SH细胞和RXR/OE-SK-N-SH细胞中TRα和PPARα的表达升高，此两种受体在RXR/KO-SK-N-SH细胞中表达降低。在本实验所采用的BDE-47处理浓度下，TRβ和PPARγ表达在3种细胞中均无明显变化。结论：RXRα在提高SK-N-SH细胞生存能力中发挥重要作用。RXRα可以介导TRα和PPARα的表达，而BDE-47并未激活或者抑制SK-N-SH细胞TRβ和PPARγ的表达。说明BDE-47对于SK-N-SH细胞的毒性主要是通过激活RXRα，进一步诱导TRα和PPARα的表达而介导的。     

细胞核受体RXRα在2,2',4,4'-四溴二苯醚神经毒性中的作用及其机制

目的：探讨视黄醛X受体（RXRs）为核心的多个核受体在2，2'，4，4'-四溴二苯醚（BDE-47）致神经细胞毒性中的相互作用，揭示受体介导的多溴二苯醚（PBDEs）神经毒性效应的分子机制。方法：构建人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH的RXRα基因敲除细胞株及高表达细胞株（分别命名为RXR/KO-SK-N-SH和RXR/OE-SK-N-SH细胞）；CCK-8法分别检测SK-N-SH（野生型）、RXR/KO-SK-N-SH和RXR/OE-SK-N-SH细胞在BDE-47浓度分别为1、5、10、20、50、100、150、200 μmol/L处理12、24、48、72 h时的细胞增殖率；qPCR和Western blot法分别检测上述3种细胞中RXRα、TRα、TRβ、PPARα、PPARγ的mRNA和蛋白表达水平。结果：在染毒时间分别为12、24、48、72 h时，不同浓度BDE-47作用下3种细胞的增殖率比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。BDE-47对RXR/KO-SK-N-SH细胞的IC₅₀是野生型和RXR/OE-SK-N-SH细胞的1/2。BDE-47处理3种细胞后，RXRα的mRNA和蛋白表达水平在野生型和RXR/OE-SK-N-SH细胞中显著升高，SK-N-SH细胞和RXR/OE-SK-N-SH细胞中TRα和PPARα的表达升高，此两种受体在RXR/KO-SK-N-SH细胞中表达降低。在本实验所采用的BDE-47处理浓度下，TRβ和PPARγ表达在3种细胞中均无明显变化。结论：RXRα在提高SK-N-SH细胞生存能力中发挥重要作用。RXRα可以介导TRα和PPARα的表达，而BDE-47并未激活或者抑制SK-N-SH细胞TRβ和PPARγ的表达。说明BDE-47对于SK-N-SH细胞的毒性主要是通过激活RXRα，进一步诱导TRα和PPARα的表达而介导的。     

共轭亚油酸单体诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡及其作用机制的研究

目的:研究2种共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)单体--顺9,反11-CLA(cis 9,trans11-CLA, c 9,t11-CLA)和反10,顺12- CLA(trans10,cis12-CLA, t10,c12-CLA) 诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡及其作用机制.方法:采用MTT法检测CLA对MCF-7细胞的生长抑制作用,锥虫蓝染色绘制CLA作用后MCF-7细胞的生长曲线;荧光显微镜观察及FCM检测MCF-7细胞的凋亡和细胞周期的改变;RT-PCR和Western印迹法检测MCF-7细胞PPARγ、Bcl-xL和Bcl-xS mRNA以及PPARγ、Bcl-2、Bax和caspase-3的蛋白表达.结果:2种CLA单体均可抑制MCF-7细胞增殖并诱导细胞凋亡,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR和Western印迹法检测结果显示,2种CLA单体均可以提高PPARγ、Bcl-xS mRNA和PPARγ、Bax、caspase-3蛋白的表达,降低Bcl-xL mRNA和Bcl-2蛋白的表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);且2种CLA单体对PPARγ与凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和caspase-3的表达影响呈剂量和时间依赖性及同步相关性.结论:c 9,t11-CLA和t10,c12-CLA对乳腺癌MCF-7细胞具有抑制生长和促凋亡的作用,CLA可能作为PPARγ的配体通过激活PPARγ-Bcl-2-caspase-3细胞凋亡信号通路而实现抑制肿瘤细胞生长的作用.     

PPARγ活化诱导细胞凋亡和周期阻滞来抑制结肠癌细胞生长

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ)在结肠癌细胞株HT-29中的表达及其活化后对结肠癌细胞生长的影响。方法通过RT-PCR和Western blot检测HT-29中PPARγmRNA及蛋白质的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法检测PPARγ配体罗格列酮(rosiglitazone,Rosi)和15d-PGJ2对HT-29细胞生长的影响,荧光显微镜、TUNEL法观察Rosi和15d-PGJ2激活PPARγ后诱导HT-29细胞凋亡形态和生化改变,流式细胞仪(FCM)以碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期。结果RT-PCR及Western blot检测结果表明结肠癌细胞HT-29中存在PPARγmRNA及蛋白质的表达。MTT结果显示Rosi和15d-PGJ2可抑制HT-29细胞生长,且具有时间、剂量依赖效应。荧光显微镜、TUNEL检测显示PPARγ活化后HT-29细胞出现典型的凋亡现象,10μmol/L Rosi或15d-PGJ2作用48h后的细胞凋亡率分别为(17.3±1.9)%及(20.8±2.9)%,与对照组(3.86±0.49)%相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。FCM结果显示Rosi和15d-PGJ2激活PPARγ后诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论结肠癌细胞HT-29表达PPARγ,其活化可通过诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞,抑制结肠癌细胞增长。因此,PPARγ可能为结肠癌治疗的一个新靶点。     

罗格列酮对U937细胞生长抑制作用及其机制的探讨

目的:探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARγ)配体罗格列酮(ROS)对人急性单核细胞白血病U937细胞生长抑制作用及其作用机制.方法:体外培养人急性单核细胞白血病U937细胞,应用不同浓度的罗格列酮处理人急性单核细胞白血病U937细胞,采用MTT比色法测定药物对细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术、AnnexinV/PI双染色法现察细胞凋亡率;并分析细胞周期改变;RT-PCR法分析PPARγ/mRNA表达.结果:ROS浓度>80#mol/L时,对U937细胞产生明显的增殖抑制作用,P<0.05;AnrlexinV/PI双染色法观察细胞凋亡率>50%,并将细胞周期阻滞在G1期,P<0.05;RT-PCR检测U937细胞中PPAR7 mRNA表达无明显变化.结论:ROS浓度>80 μmol/L时,对U937细胞产生明显的增殖抑制作用及诱导凋亡作用,同时将细胞周期阻滞在G1期,但是PPARγ mRNA表达无明显变化,推测可能与激活PPARγ表迭无明显相关,可能存在另外的信号转导途径.     

吡格列酮对胃癌细胞生长的影响及其机制

 目的研究过氧化物酶体激活物活化受体γ(PPARγ)在人胃癌MGC803中的表达及其配体吡格列酮(PGZ)对胃癌细胞生长的影响。方法用不同浓度的吡格列酮处理人胃癌MGC803细胞,采用RT-PCR法检测MGC803中PPARγ的表达变化;MTT法观察细胞增殖抑制作用;Hoechst33342/PI双荧光活细胞染色法和DNA凝胶电泳技术分析细胞凋亡。结果MGC803中存在PPARγ表达;PGZ能显著抑制MGC803生长(P<0.05),IC50值为9.01×10-6μmol/L,且作用呈剂量依赖性;高浓度PGZ能明显诱导凋亡产生;PGZ作用MGC803细胞后PPARγ表达呈剂量依赖性上调趋势(P<0.05)。结论吡格列酮依赖激活PPARγ能在体外抑制肿瘤细胞生长并诱导其凋亡,提示PPARγ可能是胃癌治疗的一个新的分子靶点。     

HoxB1质粒转染对视黄酸诱导的 HL-60细胞凋亡的影响

目的:探讨细胞内HoxB1表达、视黄酸(RA)代谢与细胞凋亡的相互关系.方法:采用脂质体介导的质粒转染和反转录-PCR等实验技术方法做有关分析检测.结果:2.5×10-7mol/L全反式RA(ATRA)处理HL-60细胞3天,HPLC分析显示,HoxB1的高表达可明显抑制HL-60细胞ATAR代谢;使ATRA增殖抑制作用减弱;野生型HL-60细胞有较强bcl-2表达,ATRA处理抑制未转染细胞bcl-2表达,但单纯HoxB1转染、HoxB1转染+IFNα均能增强bcl-2表达.结论:HoxB1转染HL-60细胞ATRA代谢明显受抑,ATRA增殖抑制作用及凋亡诱导作用减弱.     

全反式维甲酸对HL-60细胞VEGF表达与分泌影响的分子机制研究

目的 探讨人髓系白血病细胞株HL-60在诱导分化过程中血管内皮生长因子(VEGF)表达及分泌水平变化的分子机制.方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HL-60细胞被全反式维甲酸(ATRA)诱导分化后的增殖水平变化,流式细胞术测定HL-60细胞CD11b表达和细胞周期的改变,半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HL-60细胞VEGF、c-myc、缺氧诱导因子(HIF)-1α、基质金属蛋白酶(MMP)-9和MMP-2 mRNA表达水平,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测药物作用前后HL-60细胞培养上清液中VEGF蛋白的含量.结果 经ATRA诱导分化后,HL-60细胞增殖水平明显降低,CD11b表达水平明显升高,出现粒系定向分化趋势,且分化程度明显升高(P<0.05),c-myc与VEGFmRNA表达水平均明显下调(P<0.05),HIF-1α mRNA表达水平则明显升高(P<0.05).用MMP-2及MMP-9抑制因子Ⅰ阻断HL-60细胞MMP-9和MMP-2表达后,细胞培养上清中VEGF蛋白分泌量明显降低(P<0.05).结论 HL-60细胞被诱导分化过程中VEGF的表达与c-myc表达正相关,与HIF-1α表达负相关.MMP-9、MMP-2可能是调控HL-60细胞分泌VEGF的主要原因之一.     

亚砷酸联合阿米福汀对HL-60细胞中Survivin表达的影响

 目的　探讨亚砷酸（As2O3）联合阿米福汀（AMI）诱导人髓系白血病细胞HL-60凋亡的可能机制。方法　不同浓度As2O3单用和联合AMI对HL-60细胞进行不同时间干预,用MTT比色法检测细胞的生长抑制作用,用半定量RT-PCR法检测抑凋亡基因Survivin mRNA的表达水平。结果　As2O3组和联合组均可显著抑制HL-60细胞的增生,呈浓度依赖性,联合组对其抑制作用明显大于As2O3组。联合组降低Survivin的表达作用比As2O3组更明显。结论　As2O3通过下调抑凋亡基因Survivin的表达诱导HL-60凋亡;AMI可增强As2O3对Survivin的下调作用,增强HL-60细胞对As2O3的敏感性,发挥促凋亡效应。     

Combinational effect of PPARγ agonist and RXR agonist on the growth of SGC7901 gastric carcinoma cells in vitro

In order to investigate the inhibitory effects and mechanisms of troglitazone (TGZ), a peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) agonist, and retinoid X receptor (RXR) agonist (9-cis-retinoic acid (RA)) on gastric carcinoma cells SGC7901, SGC7901 cells were treated with TGZ and 9-cis-RA, respectively, or in combination. Then, the cell growth, apoptosis, morphological changes, and the expression of PPARγ, RXRγ, Bcl-2, and Bax were detected by MTT assay, flow cytometry, HE staining, immunocytochemistry staining, and Western blot assay, respectively. Our results showed that the growth of SGC7901 cells was inhibited and the cells got sparser at the concentrations of 50 μmol/L TGZ, 20 μmol/L 9-cis-RA, or combination of TGZ (25 μmol/L) and 9-cis-RA (10 μmol/L). Immunocytochemistry and Western blot showed that after 72 h, the expression of PPARγ, RXRγ, and Bax were upregulated; Bcl-2 was downregulated compared with the negative control group. These data indicated that PPARγ agonist and RXR agonist could inhibit the proliferation of SGC7901 cells via inducing the apoptosis, which involved the increase in the level of Bax/Bcl-2. The combination of RXR agonist and PPARγ agonist could induce the maximal inhibitory effects on tumor growth and apoptosis via promoting the formation of RXR/PPARγ heterodimer.     

Retinoid X receptor alpha is highly phosphorylated in retinoic acid-resistant HL-60R cells and the combination of 9-cis retinoic acid plus MEK inhibitor induces apoptosis in the cells

We examined the effects of 9-cis retinoic acid (RA) on the expression levels of retinoid X receptor alpha (RXR alpha) and its phosphorylated form (p-RXR alpha) in HL-60 and HL-60R cells. 9-cis RA reduced both RXR alpha and p-RXR alpha in HL-60 cells, but did neither in HL-60R cells. However, when the HL-60R cells were treated with the combination of 9-cis RA plus PD98059, MEK inhibitor, the p-RXR alpha and RXR alpha proteins all markedly decreased. Moreover, the combination of those agents induced apoptosis in HL-60R cells. Phosphorylation of RXR alpha might be associated with RA-resistance in HL-60R cells.     

Nuclear receptor agonists as potential differentiation therapy agents for human osteosarcoma.

PURPOSE: This study was designed to investigate whether nuclear receptor agonists can be used as potential differentiation therapy agents for human osteosarcoma. EXPERIMENTAL DESIGN: Four osteosarcoma cell lines (143B, MNNG/HOS, MG-63, and TE-85) were treated with proliferator-activated receptor (PPAR)gamma agonists, troglitazone and ciglitazone, and a retinoid X receptor (RXR) ligand, 9-cis retinoic acid. The proliferation and induction of apoptosis in the treated cells were assessed, as was the induction of alkaline phosphatase, a differentiation marker of osteoblasts. RESULTS: The expression of PPARgamma was readily detected in all tested osteosarcoma lines. On treatment with the PPARgamma and RXR ligands, all four osteosarcoma lines exhibited a significantly reduced proliferation rate and cell viability. Among the four lines, 143B and MNNG/HOS were shown to be more sensitive to ligand-induced apoptosis, as demonstrated by the Crystal Violet and Hoechst staining assays. Of the three tested ligands, troglitazone was shown to be the most effective in inducing cell death, followed by 9-cis retinoic acid. Moreover, a strong synergistic effect on the induction of cell death was observed when both troglitazone and 9-cis retinoic acid or ciglitazone and 9-cis retinoic acid were administered to osteosarcoma cells. Troglitazone was shown to effectively induce alkaline phosphatase activity, a well-characterized hallmark for osteoblastic differentiation. CONCLUSIONS: Our findings suggest that PPARgamma and/or RXR ligands may be used as efficacious adjuvant therapeutic agents for primary osteosarcoma, as well as potential chemopreventive agents for preventing the recurrence and metastasis of osteosarcoma after the surgical removal of the primary tumors.