SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法

目的建立一种操作简便、快速、灵敏度高、无毒的蛋白质电泳染色方法。方法利用考马斯亮蓝G-250(CBB G-250)在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后对蛋白质条带进行染色,对不同染色条件进行探讨,并与考马斯亮蓝R-250(CBB R-250)染色法进行比较。结果 CBB G-250染色法试剂无毒,背景浅,经改良其灵敏度与CBB R-250染色法相当,达到0.1～0.5μg。结论 CBB G-250染色方法简单经济,灵敏度能够满足一般要求,适用于蛋白质电泳结果的快速分析。     

用高效毛细管电泳法鉴别冬虫夏草及其伪品

目的:应用高效毛细管电泳法鉴别冬虫夏草及其伪品。方法:石英毛细管70μm×60 cm,电解缓冲液30mmol/L硼酸盐溶液(pH 8.5)、电压20 kV,检测波长200 nm。结果:在该分离条件下,15 min可获得冬虫夏草及其伪品的特征性电泳图谱,经电泳图谱解析可鉴别两者。结论:该法简便、快速、准确,可作为中药冬虫夏草及其伪品的有效鉴别方法。     

粘蛋白快速测定

长期以来,血清粘蛋白测定,均采用酚试剂显色法,该法操作繁杂,时间长,标本用量大,难以满足临床需要。近年来报道了利用考马斯亮蓝G250(Coomassie Brilliant Blue G 250)测定脑脊液和尿液中的微量蛋白的方法,我们现设计了用考马斯亮蓝G250测定血清粘蛋白的方法,并进行了一些探索。实验结果证明该法具有操作简便快速,标本用量少、显色稳定,结果重     

响应面法优化考马斯亮蓝G-250溶液的配制

试验研究了各组分磷酸、乙醇、考马斯亮蓝G-250在考马斯亮蓝G-250溶液中的作用及其对测定蛋白质浓度灵敏度和准确度的影响,结合全波长扫描光谱法分析了溶液配制过程中的变色机理。在此基础上,以一系列牛血清白蛋白溶液标准浓度和测定值之间的差值平方和的均方(S值)为响应值,采用单因素试验和响应面分析法优化考马斯亮蓝G-250溶液的配制条件。结果表明,乙醇是用来降低水溶液的极性环境,促进考马斯亮蓝G-250的溶解;磷酸是为考马斯亮蓝G-250表面电荷发生变化的促进剂;两者构成了影响变色灵敏度的主要因素,考马斯亮蓝G-250分子在溶液中不同的存在形式使反应体系呈现出从蓝色→绿色→棕红色等颜色变化;响应面优化配制条件为:60 mg/L考马斯亮蓝G-250、50 mL/L 95%乙醇、130 mL/L 85%磷酸时,S值最小值为2.07,即在此配制条件下的牛血清白蛋白测定值与标准值最接近。同时以不同标准蛋白质为试样对所配制的溶液进行准确度和灵敏度试验,结果表明对牛血红蛋白、γ-球蛋白测定准确度和灵敏度较好,对胰蛋白酶、胃蛋白酶灵敏度较差,主要原因是由于蛋白质组成差异所引起的。     

牛血清白蛋白脂质体包封率的测定方法研究

在较温和的实验条件下，制备粒径约100 nm包载模型药牛血清白蛋白(BSA)脂质体，将双波长考马斯亮蓝G-250染料结合法用于测定BSA脂质体包封率时游离蛋白质含量。BSA包封率测定运用凝胶柱色谱法，考察不同型号的葡聚糖凝胶对游离药物和脂质体的分离性能；对于游离BSA的测定，比较了双波长紫外分光光度法、考马斯亮蓝G-250染料法(Bradford法)、双波长考马斯亮蓝G-250染料法3种测定方法。在吸收度和线性均良好的情况下，双波长考马斯亮蓝G-250染料法的检测范围为0.25～32 μg·mL^-1,与Bradford法的检测范围(5～80 μg·mL^-1)相比，检测灵敏度提高了20倍，检测范围更宽。由此可见，双波长考马斯亮蓝G-250染料法测定蛋白质含量时，检测限较低，线性良好，检测线性范围更宽，可作为测定BSA脂质体包封率时蛋白质含量的测定手段。     

海藻及其混伪品性状显微比较研究

目的：研究海藻及其混伪品的性状、显微特征,以便准确鉴别海藻药材。方法：采用性状和显微鉴别方法对海藻及其混伪品进行形态组织对比研究。结果：海藻及其混伪品在药材性状和组织结构上存在差异。结论：采用形态和显微鉴别方法可准确鉴定海藻药材基原。     

明胶和吸收性明胶海绵的总蛋白质含量测定

目的:测定明胶和吸收性明胶海绵的总蛋白质含量,为控制和提高产品质量提供依据。方法:分别用双缩脲法、联喹啉二羧酸法和考马斯亮蓝法测定了明胶和吸收性明胶海绵的总蛋白质含量。结果:考马斯亮蓝G250与明胶溶液的显色反应不够灵敏,而与吸收性明胶海绵的水解液不显色。双缩脲法和2,2′-联喹啉-4,4′二羧酸法的测定结果分别为70%～78%和51%～64%。采用上述同一种方法分别测定明胶和吸收性明胶海绵的总蛋白质含量,结果无显著性差异。结论:考马斯亮蓝法不适用于明胶和吸收性明胶海绵的总蛋白质含量测定,而双缩脲法和2,2′-联喹啉-4,4′二羧酸法的测定结果具有参考价值。     

白术与菊科混伪品的鉴别研究

目的：对白术及几种菊科混伪品进行比较研究,为白术鉴别与质量控制提供有效方法。方法：采用性状及显微鉴别方法对白术及混伪品进行观察,并建立高效液相色谱指纹图谱方法,使用Agilent Eclipse Plus C18（4.6 × 250 mm,5 μm）色谱柱;以0.05%磷酸-乙腈为流动相,梯度洗脱;柱温25 ℃;检测波长232 nm;流速1 mL·min-1;进样体积：10 μL,对药材进行分析;采用液质联用技术对共有峰进行鉴定,结合相似度评价区分白术及混伪品。结果：白术和混伪品被成功鉴别,所建指纹图谱可正确区分白术与混伪品。结论：综合传统鉴别手段与建立的指纹图谱方法,可直观、多层次地甄别白术与混伪品间的差异,为白术的准确鉴定和质量控制提供可靠方法。     

桃仁、苦杏仁及其混伪品微性状鉴别研究

目的：对桃仁、苦杏仁药材及其混伪品进行微性状鉴别区分。方法通过用微性状鉴别法区分桃仁、苦杏仁正品和混伪品。结果微性状鉴别法可以准确的鉴别出桃仁、杏仁及其混伪品。结论通过中药微性状可以清楚的看出桃仁、苦杏仁的微性状特征,为药材鉴定提供直接依据。     

中药天龙及其伪品蜥蜴的凝胶电泳鉴别

目的目前中药天龙以假充真现象较多.为了探求更便捷、精准的壁虎及其伪品蜥蜴的鉴定方法,探讨其古方中分部位用药的相关实验依据进行该试验.方法利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(SDS-PAGE),观察天龙及其伪品蜥蜴的电泳迁移率,并且对比其躯干、头、足及尾部等部位蛋白电泳区带的差异.结果经实验鉴别,天龙与蜥蜴的电泳图谱差异显著,各有其特有谱带;且同一样品的不同部位之间谱带亦有区别.结论SDS-PAGE图谱可以作为天龙及其伪品蜥蝎的有效鉴别依据,在古方中将动物分成各部位来用药的机理有进一步探究的必要.     

决明子的应用研究进展

目的 了解决明子药理作用、临床应用及其作为保健食品等应用方面的国内外研究状况,为决明子的研究开发提供参考.方法 查阅有关决明子研究的文献,了解上述几个方面的基本情况.结果 与结论决明子在降血脂、降压、保肝、抑菌等方面显示了较好的活性;在治疗高血脂、高血压、便秘、口腔溃疡等方面有较好的疗效;还可用一些保健食品和饮料的生产.     

中药菟丝子的高效毛细管电泳法鉴别

提取菟丝子种子植物蛋白用高效毛细管电泳法进行生药鉴定。实验表明,同属不同种菟丝子的碱溶性或酸溶性蛋白在成分和含量上均存在显著差异。根据其种子植物蛋白的电泳谱图,可有效地鉴别菟丝子的来源。运用此法对13个生药样品进行了鉴定,结果与扫描电镜和显微鉴别的结果一致。     

高效液相色谱法测定决明子4种成分含量

目的建立同时测定决明子中4种成分含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法色谱柱为迪马Dimonsil柱(150 mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液(49∶7∶44,V/V/V),等度洗脱,柱温为30℃,检测波长为222 nm,流速为1.0 mL/min,进样量为10μL。结果进样量线性范围橙黄决明素为0.02464~0.2464μg(r=0.99999),大黄素为0.0174~0.174μg(r=0.99999),大黄酚为0.02956~0.2956μg(r=0.99999),大黄素甲醚为0.016~0.16μg(r=0.99998);平均回收率橙黄决明素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别为99.41%,99.51%,99.48%和99.24%,RSD分别为0.58%,0.82%,0.95%和0.90%(n=6)。结论该方法可用于决明子质量的综合评价。     

决明子不同清炒品中蒽醌类成分的含量测定

目的研究不同清炒品中蒽醌的含量变化,为决明子的基础研究提供了实验依据。方法醋酸镁显色,紫外分光光度法测定。结果决明子不同清炒品中游离蒽醌和结合蒽醌的含量有显著差异。结论清炒温度越高,决明子中游离蒽醌含量越高,结合蒽醌含量越低。     

决明子中蒽醌类化学成分及其生物活性研究进展

目的 研究决明子中蒽醌类物质的构效关系，以推动新药开发。方法 综述了近几年来中药决明子中蒽醌类活性成分的提取与分离、定性与定量分析、化学成分、生物活性及其机理，以及利用生物技术培养决明生产蒽醌类物质等研究状况。结果与结论 决明子中含丰富的蒽醌类物质，可以筛选出高效的先导物用于开发抗癌、抗菌、明目等新型药。     

均匀设计法优选决明子中蒽醌类物质的提取工艺

目的：优选决明子中蒽醌类成分的最佳提取方法和提取工艺。方法：以决明子中总蒽醌、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量为指标,考察超声法、加热回流法和索氏提取法提取决明子中蒽醌类成分优劣,确定索氏提取法为最佳提取方法。通过均匀设计法研究总蒽醌、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的提取工艺,其中总蒽醌含量用紫外分光光度法测定,5种蒽醌类化合物含量用HPLC法测定。结果：最佳提取工艺：提取时间61min,提取次数1次,甲醇浓度95度．蒽醌类成分综合评分可达0．1751。结论：该工艺简便合理,稳定准确,适用于决明子中蒽醌类物质的提取。     

维药肉桂子含量测定方法的建立

目的建立HPLC测定维药肉桂子中桂皮醛含量的方法,并定性定量测定肉桂子中的挥发油,合理制定肉桂子的含量测定方法。方法采用依利特C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm);以甲醇-水(45∶55)为流动相;流速:1mL·min~(-1);柱温:35℃;检测波长:285nm。肉桂子挥发油定性定量测定参照2010年版《中国药典》和日本药典(JP16)。结果桂皮醛质量浓度在2.45~34.24μg·mL~(-1)范围内(r=0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率为104.10%(RSD=1.44%)。肉桂子挥发油含量(mL·g~(-1))为1.00%~2.88%,平均含量为1.62%;肉桂子挥发油的折光率(20℃)为1.50~1.55。肉桂子挥发油的鉴别实验和纯度实验结果均符合日本药典规定。结论建立的HPLC方法简便易行,准确性、重复性好,可作为测定肉桂子中桂皮醛的定量测定方法。肉桂子挥发油含量可纳入肉桂子质量标准含量测定起草项。     

冬瓜子配方颗粒的提取工艺研究

目的:研究冬瓜子配方颗粒提取的最佳工艺条件。方法:采用L9(34)正交试验表安排试验,以出膏率和醇溶性浸出物为考察指标,对提取次数、加水量、提取时间等因素进行了优选。结果:冬瓜子配方颗粒的提取工艺为:10倍加水量,煎煮3次,每次煎煮0.5h。结论:冬瓜子最佳提取工艺稳定,且适于工业化大生产,可作为冬瓜子配方颗粒的提取工艺。     

浙江省天南星族药用植物新鲜块茎的等电聚焦电泳分析

目的为天南星族药用植物的分类和鉴定提供依据.方法以聚丙烯酰胺/凝胶等电聚焦电泳(IEF)方法对天南星族植物7种4变种1变型18个样品蛋白质进行分析.结果不同属植物的电泳谱之间有明显差异.结论利用IEF谱带差异可准确地区分犁头尖属、半夏属和天南星属.