cAMP反应元件结合蛋白在LPS致肺微血管内皮细胞损伤过程中的作用

目的探讨cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致大鼠肺微血管内皮细胞(rat pulmonary microvascular endothelial cell,RPMVEC)炎症损伤过程中的作用。方法体外分离、培养RPMVEC基础上,Western blot法检测CREB磷酸化CREB水平,伊文思蓝-白蛋白法检测RPMVEC通透性。结果 LPS刺激RPMVEC后,CREB中Ser133位点磷酸化水平呈时间依赖性地增加,30 min时达到峰值,120 min仍未降至正常水平,加入10μmol·L-1V5681(PKA通路特异性抑制剂)共孵育后,CREB磷酸化几乎被完全抑制,RPMVEC单层通透性明显增加。结论 LPS能诱导RPMVEC中CREB快速磷酸化,PKA通路介导上述过程,CREB在LPS致RPMVEC炎症损伤过程中可能起到保护作用。     

灯盏花素对血小板活化因子致肺微血管内皮细胞损伤的影响

目的　探讨血小板活化因子 (PAF)诱导肺微血管内皮细胞损伤的机制及灯盏花素的干预作用。方法　观察PAF对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞 (RPMVEC)的形态、单层通透性、F 肌动蛋白 (F actin)的影响和灯盏花素干预后的变化 ,F actin用流式细胞仪测定。结果　PAF浓度大于 0 1mg·L-1作用 4 8h内观察到细胞脱落和破裂。 10mg·L-1PAF 12 0min内可使RPMVEC单层通透性增高、F actin解聚 ,灯盏花素可抑制上述变化。结论　①PAF引起RPMVEC脱落和破裂呈时间和剂量依赖性。②PAF引起内皮单层通透性的增高的机制与F actin解聚密切相关。③灯盏花素可抑制PAF引起RPMVEC单层通透性的增高和F actin下降 ,对PAF引起的RPMVEC损伤有一定保护作用。     

乌司他丁对脂多糖诱发的单层人脐静脉内皮细胞高通透性的影响及其机制

目的 探讨乌司他丁对脂多糖(LPS)诱发的单层人脐静脉内皮细胞(HUVECs)高通透性的影响及其可能机制.方法 体外培养的单层 HUVECs被分为对照组、LPS组(LPS 1μg/ml刺激4 h)、乌司他丁复合LPS组(乌司他丁3000 U/ml孵育1 h+LPS 1μg/ml刺激4 h)和血管内皮钙黏蛋白单克隆抗体(VE-cadherin mAb)组(VE-cadherin mAb 50μg/ml孵育6 h+乌司他丁3000 U/ml孵育1 h+LPS 1μg/ml刺激4 h).采用双腔系统Transwell法检测单层 HUVECs的通透性 , Western blot法检测HUVECs中VE-cadherin的表达水平.结果 与对照组相比,LPS组单层HUVECs渗透性增高 ,VE-cadherin表达降低(P＜0 .01).与LPS组相比 ,乌司他丁复合LPS组单层HUVECs渗透性降低 ,VE-cadherin表达增高(P＜0 .01).与乌司他丁复合LPS组相比 ,VE-cadherin mAb组单层HUVECs渗透性增高 ,VE-cadherin表达降低(P＜0 .01).结论 乌司他丁预处理可改善LPS引起的单层HUVECs高通透性状况 ;其可能机制与VE-cadherin表达增多有关.     

过氧化氢诱导肺微血管内皮损伤的实验研究

目的　探讨H2 O2 诱导培养肺微血管内皮细胞损伤的机制。方法　观察H2 O2 对大鼠肺微血管内皮细胞 (RP MVEC)的形态、单层通透性、F 肌动蛋白和 β AR的影响。结果　H2 O2 浓度大于 1mmol·L-1作用 48h内观察到细胞脱落和破裂。 10mmol·L-1H2 O2 90min内可使RPMVEC单层通透性增高、F 肌动蛋白发生明显解聚和 β AR显著下调 ;FOR、山莨菪碱和CTX可抑制上述变化。结论　H2 O2引起的RPMVEC脱落与破裂呈浓度和时间依赖性。H2 O2引起RPMVEC单层通透性增高的机制与F 肌动蛋白解聚密切相关 ;β AR参与内皮通透性调节。FOR、山莨菪碱和CTX对H2 O2 引起RPMVEC单层通透性增高有一定的保护作用。     

粗糠柴毒素上调微小 RNA-204-5p对脂多糖所致心肌损伤的保护机制研究

目的探讨粗糠柴毒素对脂多糖( LPS)所致心肌损伤的影响及其保护机制。方法该研究自 2018年 9月至 2019年 4月,用终浓度为 10 mg/L的 LPS刺激 HCM、AC16心肌细胞 6h,分别加入终浓度为 0.5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.5 μmol/L、2.0 μmol/L粗糠柴毒素( Rottlerin)再处理 12 h后分别记为 LPS+0.5 μmol/L Rottlerin组、 LPS+1.0 μmol/L Rottlerin组、 LPS+1.5 μmol/L Rottler. in组、 LPS+2.0 μmol/L Rottlerin组,以单纯 10 mg/L LPS处理的为 LPS组,以未经粗糠柴毒素和 LPS处理的为对照组。将模拟物阴性对照( miR-NC)、微小 RNA-204-5p模拟物( miR-204-5p)、抑制剂阴性对照( anti-miR-NC)、 miR-204-5p抑制剂( anti-miR-204-5p)分别转染至未经任何处理的 HCM细胞中,记为 miR-NC组、 miR-204-5p组、 anti-miR-NC组、 anti-miR-204-5p组。将 miR-NC, miR-204-5p转染至单纯 10 mg/L LPS处理的 HCM细胞中,记为 LPS+miR-NC组, LPS+miR-204-5p组。将 anti-miR-NC、anti-miR-204-5p、过表达空载体( pcDNA3.1)、高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)过表达载体( pcDNA3.1-HMGB1)转染至 2.0 μmol/L粗糠柴毒素和 10 mg/L LPS处理 HCM细胞中,记为 LPS+Rottlerin+anti-miR-NC组、 LPS+Rottlerin+anti-miR-204-5p组、 LPS+Rottlerin+pcD. NA3.1组、 LPS+Rottlerin+pcDNA3.1-HMGB1组。 MTT法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测 miR-204-5p和 HMGB1 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与对照组相比, LPS组心肌细胞 HCM、AC16抑制率显著升高, HCM细胞中 miR-204-5p(0.30±0.03比 1.99±0.08)和 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)表达显著下降, Bax、HMGB1(1.04±0.10比 0.26±0.02)表达和凋亡率［( 27.79±2.23)%比(5.61±0.05)%］显著升高;相较于 LPS组, LPS+0.5、1.0、1.5、2.0 μmol/L Rottlerin组 HCM、AC16细胞抑制率显著降低, HCM细胞中 miR-204-5p(0.46±0.04、0.54±0.05、0.76±0.04、0.88±0.07比 0.30±0.03)和 Bcl-2表达显著升高, Bax、HMGB1(0.93±0.09、0.80±0.08、0.62±0.06、0.53±0.05比 1.04±0.10)表达和凋亡率［( 22.61±2.14)%、(20.06±1.94)%、(11.71±1.01)%、(9.16±1.00)%比(27.79±2.23)%］显著降低,呈浓度依赖型。与 LPS+miR-NC组相比, LPS+miR-204-5p组 HCM细胞中 miR-204-5p(0.86±0.07比 0.42±0.03)和 Bcl-2表达升高, Bax表达及细胞抑制率和凋亡率［( 15.76±1.32)%比( 27.26±2.25)%］降低。 miR-204-5p可靶向调控 HMGB1;抑制 miR-204-5p表达、过表达 HMGB1均能逆转 Rottlerin对 LPS作用的心肌细胞 HCM的保护作用。结论粗糠柴毒素对 LPS所致的心肌细胞损伤有保护作用,其机制主要是通过上调 miR-204-5p表达,进而抑制 HMGB1的表达发挥作用。     

抑制剂Rottlerin对巨噬细胞在结核分枝杆菌刺激下NO和TNF分泌的影响

目的 研究蛋白激酶C-δ在巨噬细胞识别结核分枝杆菌后产生免疫应答过程中的作用,探讨固有免疫抗结核的分子机制。方法 用蛋白酶抑制剂预处理体外培养的小鼠巨噬细胞,通过Western Blot分析相关蛋白的表达及磷酸化水平,利用Griess法和ELISA方法检测巨噬细胞在结核分枝杆菌索状因子合成类似物TDB的刺激下释放一氧化氮（NO）和分泌肿瘤坏死因子（TNF）的水平。结果 Syk抑制剂Piceatannol能抑制TDB诱导的PKC-δ磷酸化;经过蛋白激酶C-δ抑制剂Rottlerin的处理,巨噬细胞受TDB诱导释放的NO浓度由对照组的30μM降至5μM,分泌的TNF浓度为对照组的10%。结论 蛋白激酶C-δ抑制剂Rottlerin抑制TDB诱导的巨噬细胞释放NO和分泌TNF,提示PKC-δ在抗结核固有免疫中发挥重要的作用。     

血管加压素1a与血管加压素2受体在精氨加压素调节缺氧血管平滑肌细胞蛋白激酶C表达中的作用

目的观察血管加压素1a(V1a)受体与V2受体拮抗剂对精氨加压素(AVP)调节缺氧血管平滑肌细胞(VSMC)蛋白激酶C(PKC)α,δ和ε亚型表达的影响,以及磷脂酶C(PLC)、磷脂酶D(PLD)和磷脂酶A2(PLA2)活性的变化。方法缺氧培养大鼠肠系膜上动脉VSMC,采用Western蛋白印迹法检测PKCα,δ和ε亚型蛋白表达;采用酶偶联荧光分析法测定PLC和PLD的活性,酸碱滴定法检测PLA2的活性。结果缺氧处理1.5h,VSMC胞膜PKC-α和ε亚型蛋白表达量明显升高,AVP进一步升高胞膜PKC-α和ε的表达。V1a受体拮抗剂d(CH2)5[Tyr2(Me)]AVP预处理可明显拮抗AVP诱导的胞膜PKCα和ε亚型蛋白表达升高,同时也明显拮抗AVP诱导的缺氧VSMC中PLC和PLD活性升高。而V2受体拮抗剂d(CH2)[d-Ile2Abu4]AVP对缺氧诱导的胞膜PKC-α和ε表达增加和VSMC中PLC和PLD活性升高无明显作用。结论AVP诱导PKC激活的机制可能与V1a受体介导的PLC/PLD途径有关,而V2受体在这一信号传导途径中可能并不起主要作用。     

异氟烷对离体大鼠心脏缺血后能量代谢的影响及其机制

目的研究异氟烷对心肌缺血/再灌注期间能量代谢和功能的影响及其可能机制。方法实验采用离体大鼠心脏Langendorff灌注模型,分为未处理组、异氟烷组、cheleryth-rine(蛋白激酶C抑制剂)+异氟烷组、chelerythrine组。药物处理(或未处理)后,所有心脏均缺血30min,复灌60min。以Maclab生理实验系统记录心脏的血流动力学指标,HPLC方法测定心肌能量物质含量,免疫印迹方法分析蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)亚型在细胞内的分布和活性。结果异氟烷明显延缓心肌缺血15min时心肌ATP的耗竭,改善再灌注后的心肌收缩功能以及能量代谢障碍的恢复,增加PKC-δ和-ε亚型的膜转位。PKC抑制剂chelerythrine减少异氟烷诱导的PKC-δ和-ε亚型的膜转位以及心肌功能和ATP的恢复。结论异氟烷延缓心肌缺血期间ATP的耗竭及改善复灌后心肌功能和能量代谢,该保护作用是由PKC介导的。     

中介素通过激活AMPK信号通路对脂多糖诱导巨噬细胞极化的影响

目的探讨中介素(intermedin,IMD)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW 264.7极化的影响及其作用机制。方法RAW 264.7细胞随机分为对照组、LPS组、LPS+IMD组、LPS+IMD+CC(AMPK抑制剂Compound C)组。Real time-PCR法检测TNF-α、CD86、iNOS、Arg^-1、CD206 mRNA表达,Western blot法检测p-AMPK、AMPK、TNF-α、IL-6和IL^-10蛋白表达,流式细胞术检测巨噬细胞亚型,ELISA法检测培养基上清IL-6和TNF-α浓度。结果与对照组及LPS组比较,IMD处理可增加AMPK磷酸化水平,增加p-AMPK/AMPK比值;与对照组相比,LPS诱导可导致巨噬细胞发生M1极化,M1型标志分子CD86、TNF-α及iNOS mRNA表达升高,M2型标志分子CD206、Arg^-1 mRNA表达降低,上调促炎因子TNF-α、IL-6表达,降低抑炎因子IL^-10表达,使M1型细胞数量增加,细胞上清中TNF-α、IL-6分泌增加;而IMD处理可抑制LPS诱导的M1极化,AMPK抑制剂Compound C组处理可在一定程度上拮抗这一作用。结论IMD通过激活AMPK信号通路抑制LPS诱导的巨噬细胞M1型极化。     

急性肺损伤时间隙连接通道调控肺血管通透性的机制研究

目的探讨间隙连接通道(GJC)是否通过调节胞内钙离子浓度,进而调控肺血管通透性,最终导致急性肺损伤的发病。方法应用小口径步枪致伤制造急性肺损伤动物模型,检测肺含水量、伊文思蓝漏出率,并应用免疫组织化学方法检测肺血管内皮Cx40表达;培养肺微血管内皮细胞,分别给予达氏修正伊氏培养基(DMEM)、伤后动物血清和GJC通道阻滞剂,应用染料划痕实验检测GJC功能、伊文思蓝漏出实验检测单层内皮细胞通透性、Fluo-3AM钙离子荧光探针检测胞内钙离子浓度。结果动物实验中,伤后Cx40表达随时间延长逐渐降低,肺血管通透性则呈递增趋势,二者呈负相关(r=-0.934,P<0.05)。离体实验中,伤后动物血清降低GJC功能,Cx40表达降低,当应用通道阻断剂后,GJC功能和Cx40表达降低程度更甚;此时肺微血管内皮细胞单层通透性增加,胞内钙离子浓度增加,应用GJC通道阻断剂后,这种效应更加明显。结论肺血管内皮细胞GJC对肺血管通透性有调节作用,胸部枪弹伤后,肺血管内皮Cx40表达降低,引起GJC功能下降,导致胞内钙超载,最终导致肺血管通透性增加和急性肺损伤的发病。     

PKC及缝隙连接蛋白Cx43改变在吗啡和舒芬太尼预处理缺氧复氧损伤心肌中的作用

目的：探讨蛋白激酶C（PKC）信号通路及心肌缝隙连接蛋白Cx43改变在阿片药物预处理中的作用。方法：原代心肌细胞分离培养。将培养5 d的心肌细胞分成8组。正常对照组（C组）不给予任何处理,建立培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型（I/R组）,吗啡组（MF组）加入吗啡至终浓度0.3 μmol·L^-1,舒芬太尼组（SF组）加入舒芬太尼至终浓度0.000 3 μmol·L^-1,PKC激动剂PMA+吗啡组（PMA+MF组）加入PMA至终浓度0.02 μmol·L^-1,再进行吗啡预处理;PKC抑制剂Rottlerin+吗啡组（ROT+MF组）加入Rottlerin至终浓度5 μmol·L^-1,再进行吗啡预处理;PKC激动剂PMA+舒芬太尼组（PMA+SF组）加入PMA至终浓度0.02 μmol·L^-1,再进行舒芬太尼预处理;PKC抑制剂Rottlerin+舒芬太尼组（ROT+SF组）加入Rottlerin至终浓度5 μmol·L^-1,再进行舒芬太尼预处理。各组做上述相应处理后取材检测细胞存活率。免疫荧光共聚焦技术检测缝隙连接蛋白Connexin 43（Cx43）的平均光密度（AOD）,用Western-blot检测细胞Cx43总蛋白及其磷酸化水平（P-Cx43）的表达量。结果：与C组比较,其余各组心肌细胞存活率、Cx43 AOD值、心肌细胞Cx43总蛋白表达及P-Cx43表达降低（P<0.05）;与I/R组比较,MF组、SF组、ROT+MF组、ROT+SF组、PMA+MF组、PMA+SF组心肌细胞存活率、Cx43 AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达增高（P<0.05）;与MF组比较,ROT+MF组心肌细胞存活率、Cx43 AOD值、Cx43总蛋白及P-Cx43表达降低（P<0.05）,SF组心肌细胞存活率、Cx43 AOD值和Cx43总蛋白降低（P<0.05）,而P-Cx43表达增高（P<0.05）,PMA+MF组心肌细胞存活率、Cx43 AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达均增高（P<0.05）;ROT+SF组较SF组心肌细胞Cx43 AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达低（P<0.05）,而PMA+SF组较SF组心肌细胞存活率、心肌细胞Cx43 AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达高（P<0.05）。结论：吗啡和舒芬太尼预处理可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,且吗啡对心肌细胞的保护作用较舒芬太尼强,这种心肌细胞保护作用可能与PKC信号通路的激活有关。     

血管紧张素Ⅱ对肾小球内皮细胞骨架和单层通透性的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对培养肾小球内皮细胞(GENC)形态、单层通透性、肌动蛋白骨架的影响,探讨AngⅡ对GENC炎性损伤的机制。方法倒置显微镜观察AngⅡ对体外培养大鼠GENC的形态影响;用二室弥散系统检测AngⅡ对GENC单层通透性的影响;用免疫细胞化学的方法观察AngⅡ对GENCF-肌动蛋白(F-actin)分布的影响。结果AngⅡ浓度大于0.1mg·L-1作用48h内观察到细胞脱落和破裂。10mg·L-1AngⅡ6、12h可使GENC单层通透性增高、F-actin解聚。结论AngⅡ引起GENC脱落和破裂呈时间和剂量依赖性;AngⅡ引起内皮单层通透性的增高的机制可能与F-actin解聚相关;     

δ阿片受体激活诱导心肌细胞增殖的信号转导途径

目的研究δ阿片受体激活剂D-丙(2)-D-亮(5)脑啡肽(DADLE)诱导心肌细胞增殖的可能信号途径。方法体外培养乳大鼠心肌细胞,采用结晶紫法和[3H]TdR检测心肌细胞的增殖;Western印迹法测心肌细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化水平。结果DADLE1μmol.L-1增强心肌细胞ERK磷酸化,促进心肌细胞增殖,δ阿片受体抑制剂纳曲吲哚10μmol.L-1,蛋白激酶C(PKC)特异性抑制剂星形孢菌素1μmol.L-1和ERK特异性抑制剂U012610nmo.lL-1明显降低ERK磷酸化水平,抑制DADLE的促心肌细胞增殖作用。结论DADLE可能通过δ阿片受体活化PKC,进而激活有丝分裂原激活蛋白激酶ERK通路诱导心肌细胞增殖。     

蛋白激酶C对内毒素休克大鼠肝损伤诱导型一氧化氮合成酶表达的调控

目的　探讨蛋白激酶C(PKC)对内毒素休克大鼠肝损伤诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)表达的调控。方法　将大鼠随机分为 6组 ,分别为正常对照组、脂多糖 (LPS)组、LPS +琼脂糖 (AG) (10 0mg/kg)组、LPS +H7小剂量 (12 .5mg/kg)组、LPS +1(5 异喹啉磺酰基 ) 2 甲基哌嗪 (H7)大剂量 (2 5mg/kg)组、LPS +H7+佛波醇乙酯 (PMA) (3mg/kg)组。注射药物后观察其血压及血清学、苏木素 伊红 (HE)染色、免疫组织化学染色、iNOS蛋白活性检测、WesternBlotting免疫印迹法检测iNOS等指标。 结果　①血压及血清学 :AG升压迅速且持续 ;H7也有升压作用。②组织学 :LPS可致肝组织呈弥漫性病变 ,H7能改善LPS所致的肝损伤。③iNOS免疫组织化学 :正常组iNOS染色阴性 ,LPS组iNOS强阳性表达 ;H7能抑制iNOS表达 ,但不如AG明显。④iNOS蛋白活性检测 :LPS可致iNOS活性显著增强 (P <0 .0 1) ,H7可抑制iNOS ,与剂量相关 ,并可被PMA逆转 ,但AG抑制作用最强。⑤iNOSWesternBlotting免疫印迹观察 :正常组iNOS条带缺如 ,H7对iNOS表达有抑制作用 ,而AG组对iNOS抑制作用最强。结论　PKC可能参与内毒素诱导的iNOS表达 ,但不同于AG的是 ,H7能改善肝功能。故抑制PKC活性可更广泛地减轻内毒素条件下炎症所致的肝损伤 ,从而对内毒素所致的脏器衰?     

脊髓背角PKC在慢性炎性疼痛中的作用及其机制

目的探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的抑制剂和激动剂对痛觉超敏的影响及其分子机制。方法小鼠后趾皮下注射完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)建立炎性疼痛模型;鞘内给予PKC抑制剂白屈菜赤碱(chelerythrine,CHE)或激动剂Phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)前后,测定小鼠缩足阈值;随后立即分离脊髓背角,免疫印迹法检测NMDA(N-methyl-D-aspartate)型谷氨酸受体的突触表达。结果 PKC抑制剂CHE在缓解炎性痛觉超敏的同时,明显翻转脊髓NMDA受体NR2B亚基的突触表达亢进;而正常小鼠鞘内给予PKC激动剂PMA,可模拟CFA的效应,即:诱发痛觉超敏,并特异性增加NR2B亚基的突触含量。结论 PKC通过调节脊髓NMDA受体NR2B亚基的突触表达,参与炎性疼痛的形成。     

阿霉素减轻坐骨神经慢性缩窄性损伤大鼠的神经病理性疼痛及其机制

目的观察阿霉素(DOX)对坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)模型大鼠的镇痛作用,并从形态学及组织凋亡蛋白的角度对其机制进行分析。方法将SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham)、CCI模型组(Model)、假手术+阿霉素5 mg·kg^-1组(Sham+DOX)、CCI模型+阿霉素5 mg·kg^-1组(Model+DOX)。造模成功后,各组采用尾静脉注射的方式给药,Sham组和Model组给予等量生理盐水,检测各组大鼠机械痛阈值和热痛阈值。在行为学检测结束后,即手术后d 15取大鼠右侧L4-5DRG,观察DRG细胞形态、超微结构及DOX的分布情况,采用Western blot法测定DRG组织中Bax、Bcl-2、PKCɑ、PKCδ及PKCε的蛋白表达。结果静脉注射DOX可在DRG组织检测到其自发荧光表达。与Sham组相比,Sham+DOX组痛阈值在整个观察期未见差别,而Model组在术后d 7痛阈值明显降低。与Model组相比,Model+DOX组的痛阈值在给药后明显回升,并表现出DRG细胞明显损伤,Bax/Bcl-2升高以及PKCδ、PKCε的蛋白表达量降低等现象。结论 DOX静脉注射可以到达并蓄积于DRG组织,明显减轻CCI大鼠的疼痛反应,这一作用与其降低PKCδ和PKCε的蛋白表达,诱导DRG的凋亡有关。     

DATS通过p38MAPK通路抑制LPS诱导的小鼠MH-S细胞TNF-α及IL-1β表达

目的探讨p38MAPK在二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞促炎细胞因子表达中的作用。方法体外培养MH-S细胞,用DATS和(或)LPS进行干预,Western blot检测细胞p38及磷酸化p38(p-p38)的表达;用LPS和(或)SB203580孵育细胞,反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1βmRNA表达,Western blot检测细胞磷酸化(p-IκB)及非磷酸化IκB的表达。结果 LPS刺激MH-S细胞可导致p-p38表达增加,呈时间依赖性;用DATS(0.1、0.5、2.5、5.0 mg.L-1)预处理细胞30 min后再给予LPS刺激,p-p38表达呈剂量依赖性下降;单独DATS对p-p38表达无明显影响。p38特异性抑制剂SB203580可剂量依赖性地抑制LPS诱导的p-IκB蛋白、TNF-α及IL-1βmR-NA表达。结论 DATS可通过抑制p38MAPK通路抑制IκB磷酸化及NF-κB活化,进而下调LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达。     

蛋白激酶C抑制剂对血小板激活因子活性的抑制作用

本文观察了蛋白激酶C（PKC）抑制1－（5－异喹啉磺酰基）－2－甲基哌嗪（H－7）和槲皮素对血小板激活因子（PAF）体内作用的影响，结果发现：特异性PAF受体拮抗剂WEB2086可有效抑制内毒素（LPS）的致死毒性，进一步说明PAF是内毒素休克的重要介质；ivPAF可诱导小鼠腹腔毛细血管通透性增高（1．0μg／Kg）或死亡（25μg／Kg），PKC抑制剂H－7、槲皮素对二者都具有显著的抑制作用，且显著相关，提示H－7刊槲皮素抑制PAF毒性与保护内皮细胞有关；PAF在体内对小鼠的毒性和对微血管的损伤．可能与PKC有关。     

脂多糖介导人牙周膜成纤维细胞损伤过程中热休克蛋白27表达的研究

目的观察在不同浓度脂多糖(LPS)干预下,热休克蛋白(HSP)27在人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)损伤过程中的表达情况。方法取原代培养至3～8代的HPLFs,以LPS梯度浓度干预,采用免疫组织化学方法检测HSP27在HPLFs中的表达。结果 HSP27在正常HPLFs中呈阴性表达,LPS干预后的HPLFs中HSP27呈胞质阳性表达,且随干预浓度增高表达量有逐渐增高的趋势。结论 HSP27在LPS介导的HPLFs炎症损伤中发挥重要的作用,其发生机制有待进一步研究。     

δ阿片受体激活对依赖于PKC路径的血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的探讨δ阿片受体激活对血清饥饿诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用及机制。方法新生大鼠心肌细胞分为对照、模型、D-丙(2)-D-亮(5)脑啡肽DADLE 0.1μmol.L-1;DADLE 0.1μmol.L-1+naltrindole(δ阿片受体拮抗剂)10μmol.L-1、DADLE 0.1μmol.L-1+GF109203X 10μmol.L-1、DADLE 0.1μmol.L-1+staurosporine 1μmol.L-1组;分组给药48 h后,MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪测心肌细胞的凋亡指数;流式细胞仪检测细胞周期。Western blot法检测心肌细胞的胞质内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)表达及蛋白激酶C(PKC)的表达。结果δ阿片受体激动剂DADLE能明显抑制由血清饥饿引起的心肌细胞的凋亡,表现为细胞存活率升高,凋亡率下降,G0/G1百分比降低,G2/M百分比增加;caspase-3蛋白表达明显下降;PKC蛋白表达明显升高;加入naltrindole可以阻断DA-DLE对心肌细胞凋亡的抑制作用,加入GF109203X和stau-rosporine可明显拮抗DADLE抑制由血清饥饿引起的心肌细胞的凋亡的作用,表现为细胞存活率降低,凋亡率升高;G0/G1百分比增加,G2/M百分比降低;caspase-3的蛋白表达明显升高;PKC表达明显降低。结论δ阿片受体激活后通过活化PKC通路抑制血清饥饿所致的心肌细胞凋亡。