灯盏花素对血小板活化因子致肺微血管内皮细胞损伤的影响

目的　探讨血小板活化因子 (PAF)诱导肺微血管内皮细胞损伤的机制及灯盏花素的干预作用。方法　观察PAF对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞 (RPMVEC)的形态、单层通透性、F 肌动蛋白 (F actin)的影响和灯盏花素干预后的变化 ,F actin用流式细胞仪测定。结果　PAF浓度大于 0 1mg·L-1作用 4 8h内观察到细胞脱落和破裂。 10mg·L-1PAF 12 0min内可使RPMVEC单层通透性增高、F actin解聚 ,灯盏花素可抑制上述变化。结论　①PAF引起RPMVEC脱落和破裂呈时间和剂量依赖性。②PAF引起内皮单层通透性的增高的机制与F actin解聚密切相关。③灯盏花素可抑制PAF引起RPMVEC单层通透性的增高和F actin下降 ,对PAF引起的RPMVEC损伤有一定保护作用。     

血管紧张素Ⅱ对肾小球内皮细胞骨架和单层通透性的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对培养肾小球内皮细胞(GENC)形态、单层通透性、肌动蛋白骨架的影响,探讨AngⅡ对GENC炎性损伤的机制。方法倒置显微镜观察AngⅡ对体外培养大鼠GENC的形态影响;用二室弥散系统检测AngⅡ对GENC单层通透性的影响;用免疫细胞化学的方法观察AngⅡ对GENCF-肌动蛋白(F-actin)分布的影响。结果AngⅡ浓度大于0.1mg·L-1作用48h内观察到细胞脱落和破裂。10mg·L-1AngⅡ6、12h可使GENC单层通透性增高、F-actin解聚。结论AngⅡ引起GENC脱落和破裂呈时间和剂量依赖性;AngⅡ引起内皮单层通透性的增高的机制可能与F-actin解聚相关;     

山莨菪碱对内毒素致肺微血管内皮细胞骨架变化的影响

目的观察内毒素（ＬＰＳ）对肺微血管内皮细胞（ＰＭＶＥＣ）单层通透性和肌动蛋白骨架的影响,探讨与β受体和Ｇｓα蛋白变化的关系及山莨菪碱的干预作用。方法体外培养大鼠ＰＭＶＥＣ,采用放射性配基结合分析法和流式细胞仪技术。结果ＬＰＳ在体外可诱导ＰＭＶＥＣ单层通透性增高和中央Ｆ－肌动蛋白发生解聚、密度明显减低,同时出现β受体下调及Ｇｓα蛋白水平降低;山莨菪碱对上述变化有明显抑制作用。结论ＬＰＳ可直接导致ＰＭＶＥＣ单层通透性增高,并与Ｆ－肌动蛋白重排相关。山莨菪碱可能通过影响ＰＭＶＥＣ膜β受体和Ｇｓα蛋白两个环节,参与调控ＰＭＶＥＣ的肌动蛋白骨架变化,减轻ＬＰＳ所致的大鼠ＰＭＶＥＣ单层通透性增高。     

蛋白激酶Cδ亚型抑制剂对脂多糖诱导肺微血管内皮细胞损伤的影响

目的研究蛋白激酶C(PKC)的亚型PKCδ在大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)中的表达及其抑制剂Rottlerin对脂多糖(LPS)导致RPMVEC单层通透性增高的影响。方法取体外培养的RPMVEC进行PKCδ的W estern b lot和免疫组化检测,用针头式滤器检测LPS及LPS+Rottlerin干预后RPMVEC单层滤过系数(K f)的变化。结果PKCδ在RPMVEC中有广泛的表达,其表达部位主要位于胞质。Rot-tlerin能减低LPS导致的RPMVEC单层通透性增高。结论LPS导致RPMVEC损伤的机制与PKC的激活有关,PKCδ亚型抑制剂可减轻LPS诱导的RPMVEC单层通透性增高。     

cAMP反应元件结合蛋白在LPS致肺微血管内皮细胞损伤过程中的作用

目的探讨cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致大鼠肺微血管内皮细胞(rat pulmonary microvascular endothelial cell,RPMVEC)炎症损伤过程中的作用。方法体外分离、培养RPMVEC基础上,Western blot法检测CREB磷酸化CREB水平,伊文思蓝-白蛋白法检测RPMVEC通透性。结果 LPS刺激RPMVEC后,CREB中Ser133位点磷酸化水平呈时间依赖性地增加,30 min时达到峰值,120 min仍未降至正常水平,加入10μmol·L-1V5681(PKA通路特异性抑制剂)共孵育后,CREB磷酸化几乎被完全抑制,RPMVEC单层通透性明显增加。结论 LPS能诱导RPMVEC中CREB快速磷酸化,PKA通路介导上述过程,CREB在LPS致RPMVEC炎症损伤过程中可能起到保护作用。     

1-磷酸鞘氨醇对过氧化氢所致微血管通透性增高的影响

目的研究1-磷酸鞘氨醇(S1P)对氧化应激状态下过氧化氢引起的大鼠微血管通透性增高的影响。方法应用大鼠在体肠系膜微血管灌注的方法,通过外源性给予过氧化氢模拟病理条件下氧化应激状态,并通过测定微静脉的静水传导性(hydraulic conductivity,Lp),观察S1P对过氧化氢引起的微血管通透性增高的影响;并利用在体免疫荧光组织化学技术,观察S1P对过氧化氢引起的内皮细胞粘附连接主要成分钙粘蛋白(VE-Cadherin)、F-肌动蛋白变化的影响。结果过氧化氢可增加微血管Lp至正常对照的6.13±0.87倍(P<0.01);微血管经S1P预处理后,再给予过氧化氢未出现Lp的明显变化,与对照值比较无显著性差异。免疫荧光组织化学检测结果显示:过氧化氢可改变内皮细胞F-肌动蛋白形态及分布,细胞F-肌动蛋白分布紊乱不规则,细胞内部有密集的应力纤维形成。过氧化氢也可影响VE-Cadherin正常结构,导致粘附连接断裂,细胞间隙形成。而S1P预处理可抑制过氧化氢对VE-Cadherin和F-肌动蛋白的影响。结论 S1P可抑制过氧化氢引起的血管通透性增高,其机制可能与S1P抑制应力纤维形成、加强内皮细胞间粘附连接,抑制细胞间隙形成有关。     

三七总皂苷对抗H_2O_2所致大鼠脑微血管内皮细胞损伤的物质基础研究

目的研究三七总皂苷对H2O2致大鼠脑微血管内皮细胞损伤产生保护作用的物质基础。方法分离并培养大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC),以MTT和LDH的释放为指标,观察三七总皂苷(TPNS)、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rd、Re和Rb1对RBMEC损伤的保护作用。结果500μmol·L-1的H2O2对原代培养的RBMEC产生明显的损伤。20～200mg·L-1的TPNS,16·0μmol·L-1的R1,37·5～75·0μmol·L-1的Rg1,8·0～16·0μmol·L-1的Rd及5·4～54·0μmol·L-1的Rb1对H2O2致RBMEC的损伤具有明显的保护作用(P<0·05或P<0·01),Re则无此作用。结论TPNS对H2O2所致原代培养的RBMEC损伤具有明显的保护作用,产生这一作用的主要物质基础可能为Rb1、Rg1和Rd。     

总丹酚酸对过氧化氢诱导内皮细胞损伤的抑制作用(英文)

目的　研究总丹酚酸对过氧化氢 (H2 O2 )诱导血管内皮细胞损伤的影响。方法　培养的人脐静脉内皮细胞 ,用MTT法测定内皮细胞的存活率。用碘化丙啶 (PI)染色和TUNEL法测定H2 O2 诱导内皮细胞的凋亡作用。用荧光法测定半胱天冬酶 (cas pase) 3的活性。用Fura 2 /AM测定内皮细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ] i)。结果　 1 0 0 μmol·L-1 H2 O2可使内皮细胞的存活率下降 40 .2 % ,提前 1h给予总丹酚酸 1 0和 1 0 0mg·L-1 使存活率分别增加8.4%和2 8.6 %。 1 0 0 μmol·L-1 H2 O2 还可引起内皮细胞的凋亡 ,PI染色的结果显示 ,H2 O2 处理内皮细胞 1 8h后 ,凋亡率从 (7.1 %± 0 .7) %升至 (38.1±4.0 ) %。总丹酚酸 1 0 0mg·L-1 提前处理内皮细胞1h,可使内皮细胞凋亡率降至 (1 3 .6± 0 .8) %。TUNEL方法检测结果显示 ,H2 O2 处理内皮细胞后 ,TUNEL染色阳性的细胞从 (3 .0± 0 .8) %升至 (30 .5±2 .9) % ,总丹酚酸 1 0 0mg·L-1 可使TUNEL阳性细胞率降至 (1 9.0± 3 .7) %。此外 ,H2 O2 处理细胞后 ,内皮细胞半胱天冬酶 3的活性增加 1 76% ,[Ca2 + ] i 升高 1 0 1 % ,而总丹酚酸可以抑制H2 O2 引起的半胱天冬酶 3活性的增加和 [Ca2 + ] i 升高。结论　总丹酚酸对H2 O2 引起的内皮细胞损伤具有明显的抑制作     

阿魏酸钠对组胺引起的血管内皮细胞单层通透性增高的作用

目的　本实验观察阿魏酸钠对炎症介质组胺引起的血管内皮通透性增加的作用。方法　从新生牛主动脉分离获得单个内皮细胞 ,培养于微孔滤膜上直至形成致密单层。通过灌流Hanks液或含 5g·L-1白蛋白的Hanks液后 ,测定经 1× 10 -4 mol·L-1组胺溶液加 1× 10 -5mol·L-1阿魏酸钠处理的液体滤过系数 (Kf)、液体滤过流量 (Jv)和蛋白质渗透压反射系数 (σ)。结果　内皮单层经组胺处理后 ,Kf和Jv降低 ,σ升高 ;而阿魏酸钠能够抑制因组胺造成的Kf和Jv降低 ,以及σ升高。结论　组胺能够引起血管内皮单层通透性的增加 ,而阿魏酸钠能够减轻组胺造成的内皮单层通透性的增加 ;其作用机制需要进一步地研究。     

川芎嗪对血管内皮细胞损伤的保护作用

用 H2 O2 (75μmol· L-1,4h)诱导人胎儿脐静脉内皮细胞 (HUVECs)损伤 ,研究川芎嗪对血管内皮细胞损伤的保护作用 .噻唑蓝 (MTT)比色法检测细胞活性 ,放射免疫法测定细胞培养液中的内皮素样免疫反应物 (ir- ET)水平及前列环素代谢物6-酮前列腺素 1α(6- keto- PGF1α)含量 ,硫代巴比妥酸法测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量 ,生化自动分析仪测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性 .结果显示川芎嗪 0 .3- 1 .2 mmol·L-1对正常 HUVECs具有促进增殖作用 ,并浓度依赖性拮抗 H2 O2 抑制增殖作用 .川芎嗪 0 .3和 0 .6mmol· L-1使细胞培养液中 6- keto- PGF1α含量升高 ,ir- ET含量降低 ,说明增加前列环素释放 ,减少内皮素基础释放量 ,并部分拮抗 H2 O2 损伤HUVECs所致 LDH,内皮素释放增加 ,前列环素释放减少和 MDA生成增加的作用 .提示川芎嗪具有保护 H2 O2 致血管内皮细胞损伤的作用 ,其机理可能与其抗脂质过氧化作用有关     

Tetramethylpyrazine inhibits hypoxia-induced pulmonary vascular leakage in rats via the ROS-HIF-VEGF pathway

Tetramethylpyrazine (TMP) is a reactive oxygen species (ROS) antagonist that has potent properties for the treatment of a variety of vascular diseases, such as ischemic stroke and pulmonary hypertension secondary to chronic obstructive pulmonary diseases. However, there are few data about the role of TMP in hypoxia-induced pulmonary vascular leakage. This study examined the effect of TMP on hypoxia-induced pulmonary vascular leakage and the underlying mechanisms. Rat pulmonary microvascular endothelial cells (RPMVECs) treated with TMP or not were subjected to hypoxic or normoxic conditions for 24 h, and the monolayer permeability, intracellular ROS, hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α) and vascular endothelial growth factor (VEGF) proteins levels were determined. Additionally, rats administrated TMP were exposed to hypobaric hypoxia to evaluate the effect of TMP in vivo by measuring lung water content, pulmonary vascular leakage into the lungs and immunohistochemistry for HIF-1α and VEGF. Hypoxia was found to cause a significant increase in RPMVEC monolayer permeability and intracellular ROS, HIF-1α and VEGF protein levels. Treatment with TMP decreased the hypoxia-induced RPMVEC monolayer permeability and attenuated the elevation of ROS, HIF-1α and VEGF protein levels. TMP-treated animals showed less pulmonary vascular leakage and HIF-1α and VEGF expression compared with those exposed to hypoxia alone. These observations supported that TMP inhibited the increase in pulmonary vascular permeability induced by hypoxia. The underlying mechanisms may be related to the scavenging of intracellular ROS and the suppression of hypoxia-induced upregulation of HIF-1α and VEGF proteins.     

长期饮用普萘洛尔对大鼠心脏和血淋巴细胞β肾上腺素受体效应及亚型的影响

采用放射配体结合实验，离体左心房收缩功能实验，逆转录聚合酶链反应及高效液相色谱等方法研究长期饮用普萘洛尔（７０ｍｇｋｇ－１ｄ－１，８ｗｋ）对大鼠心脏β肾上腺素受体（β－ＡＲ）及其亚型，外周血淋巴细胞β２－ＡＲ和血浆儿茶酚胺水平的影响．结果表明长期饮用普萘洛尔后：（１）心脏β－ＡＲ密度从对照组的４１±８ｐｍｏｌｇ－１蛋白上调到６１±９ｐｍｏｌｇ－１蛋白，ＣＧＰ２０７１２Ａ竞争抑制曲线２位点分析结果显示为β１和β２－ＡＲ同等程度上调；（２）心脏β１－ＡＲｍＲ－ＮＡ水平不变而β２－ＡＲｍＲＮＡ水平显著增加；（３）β－ＡＲ及其亚型介导的离体左心房正性变力效应增强，以β２－ＡＲ的功能改变更为显著；（４）血淋巴细胞β２－ＡＲ数目从对照组的１９±７ｐｍｏｌｇ－１蛋白上调至３２±８ｐｍｏｌｇ－１蛋白；（５）血浆去甲肾上腺素水平（０．２１±０．１２μｇＬ－１）明显低于对照组（０．３８±０．１５μｇＬ－１）．     

大鼠左心耳三种亚型α_1肾上腺素受体对β肾上腺素受体正性变力效应的不同影响

采用电驱动离体大鼠左心耳收缩功能实验研究三种亚型α１－肾上腺素受体（ＡＲ）激动时对β－ＡＲ介导正性变力效应的影响． 结果发现,ＲＳ１７０５３（选择性拮抗α１Ａ－ＡＲ）或ＷＢ４１０１（选择性拮抗α１Ａ－和α１Ｄ－ＡＲ）可使去甲肾上腺素（ＮＥ）的累积浓度－收缩效应曲线（ＣＲＣ）显著左移;在ＢＭＹ ７３７８（选择性拮抗α１Ｄ－ＡＲ）和ＲＳ１７０５３ 存在下,ＮＥ仅激动α１Ｂ－和β－ＡＲ,其ＣＲＣ较单独激动β－ＡＲ 时显著左移;在ＷＢ４１０１ 和去氧肾上腺素（Ｐｈｅ）同时存在下（仅激动α１Ｂ－ＡＲ）,异丙肾上腺素（Ｉｓｏ）的ＣＲＣ较对照显著左移;用ＢＭＹ ７３７８ 阻断α１Ｄ－ＡＲ后,ＮＥ的ＣＲＣ不发生明显的偏移;用ＲＳ１７０５３ 和螺哌隆阻断α１Ａ－和α１Ｂ－ＡＲ,用Ｐｈｅ 仅激动α１Ｄ－ＡＲ 时,对Ｉｓｏ 的ＣＲＣ也无影响． 结果说明在大鼠左心耳α１Ａ－ＡＲ抑制,α１Ｂ－ＡＲ 增强,而α１Ｄ－ＡＲ则不参与对β－ＡＲ 介导正性变力效应的调节．