替米沙坦对体外培养THP-1源性巨噬细胞MMP-9与CD40/CD40L表达的影响

目的:通过观察替米沙坦对体外培养的THP-1源性巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)及白细胞分化抗原CD40/CD40L表达的影响,揭示替米沙坦抗炎作用的可能机制,同时明确替米沙坦的心血管保护作用。方法:用一定浓度的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)(10 000 nmol/L)诱导体外培养的巨噬细胞,与不同浓度的替米沙坦共同孵育,以MMP-9和CD40/CD40L为指标,应用RT-PCR方法分别检测MMP-9和CD40/CD40L mRNA表达。结果:替米沙坦可同时下调AngⅡ刺激后的MMP-9、CD40和CD40L mRNA的表达,有剂量依赖性。替米沙坦100 nmol/L、1 000 nmol/L、10 000 nmol/L时,MMP-9mRNA的表达与AngⅡ组相比分别下降24%、42%及62%;CD40、CD40LmRNA的表达与AngⅡ组相比分别下降24%、39%、55%、16%、32%及40%。结论:替米沙坦体可下调外培养巨噬细胞MMP-9的表达,从而具有抗炎及稳定斑块作用,其作用机制与抑制CD40/CD40L通路有关。     

替罗非班对人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达的影响

目的观察替罗非班对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响。方法向培养的HUVECs中加入氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)80 mg/L共同孵育12 h,后加入固定浓度的替罗非班(替罗非班用量根据体重计算)分别作用12 h、24 h、36 h,逆转录-聚合酶链反应检测LOX-1mRNA表达,流式细胞仪间接免疫荧光法测定HUVECs LOX-1阳性细胞数。结果与对照组比较,ox-LDL组LOX-1mRNA的表达显著升高(P0.05);替罗非班抑制HUVECs LOX-1mRNA的表达作用呈时间依赖性。与ox-LDL组比较,应用替罗非班后12 h、24 h、36 h LOX-1mRNA表达降低8%、64%和73%,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,ox-LDL组HUVECs LOX-1阳性细胞数明显增加(P0.05);固定浓度的替罗非班作用后HUVECs LOX-1阳性细胞数的表达量随替罗非班的作用时间延长而减低,其作用呈时间依赖性。结论替罗非班可显著抑制ox-LDL诱导的HUVECs LOX-1表达,可通过抑制ox-LDL诱导的HUVECs LOX-1表达从而发挥其血管内皮细胞保护效应。     

急性冠脉综合征患者替罗非班治疗后过氧化物酶体增生激活型受体γ与CD40/CD40L通路表达的变化

目的观察急性冠脉综合征(ACS)患者替罗非班治疗后过氧化物酶体增生激活型受体γ( PPARγ)与CD40/CD40L通路表达的变化。 方法选取2016年12月至2017年7月邯郸市第一医院心内科ACS患者120例,随机数字表法分成4组,为常规治疗组和常规治疗＋替罗非班12 h、24 h、36 h组,每组30人,进行随机对照研究。替罗非班组经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术12 h后、24 h后、36 h后分别抽取患者血液,酶联免疫吸附法(ELISA)测定PPARγ与CD40、CD40L蛋白水平的表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测PPARγ与CD40、CD40L mRNA表达。 结果与常规治疗组比较,替罗非班12 h、24 h、36 h组CD40与CD40L蛋白水平表达逐渐降低,CD40水平分别为(0.86±0.08)μg/L、(0.46±0.05)μg/L、(0.40±0.05)μg/L;CD40L水平分别为(0.92±0.04)μg/L、(0.54±0.04)μg/L和(0.40±0.05)μg/L,均差异有统计学意义(F＝1 977.39,5 071.39;均P<0.01);PPARγ蛋白表达水平上升,分别为(0.94±0.04)μg/L、(1.40±0.01)μg/L和(1.48±0.01)μg/L,差异有统计学意义(F＝4 719.81,P<0.01);替罗非班组CD40和CD40L mRNA表达逐渐降低,分别为0.98±0.07、0.50±0.02、0.41±0.01和1.02±0.06、0.50±0.02、0.40±0.01,均差异有统计学意义(F＝5 781.52,5 935.29;均P<0.01);PPARγ mRNA表达升高,分别为0.74±0.04、1.31±0.01和1.49±0.01,差异有统计学意义(F＝4 683.59,P<0.01)。 结论替罗非班能上调PPARγ表达,同时抑制CD40/CD40L通路的激活,具有抑制炎症、稳定粥样斑块作用。     

替罗非班对体外培养THP-1源性巨噬细胞CD40及其配体表达的影响

目的探讨替罗非班对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激下THP-1源性巨噬细胞CD40和CD40配体(CD40L)表达的影响,探讨该类药物的抗炎及稳定斑块的作用机制。方法向体外培养的THP-1细胞中加入ox-LDL(80mg/L)共同孵育24h,然后与替罗非班共同孵育不同时间(分别为12、24、48h),应用流式细胞技术检测CD40和CD40L在细胞上的表达。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD40和CD40L mRNA表达。结果替罗非班既可下调细胞表面CD40和CD40L的表达,又能使CD40和CD40LmRNA表达下降,其阻断作用呈时间依赖性(P<0.05)。结论替罗非班可以拮抗巨噬细胞CD40和CD40L表达,并呈时间依赖性,这种作用可能是其减轻动脉粥样斑块炎症及稳定斑块的机制之一。     

急性肺损伤时间隙连接通道调控肺血管通透性的机制研究

目的探讨间隙连接通道(GJC)是否通过调节胞内钙离子浓度,进而调控肺血管通透性,最终导致急性肺损伤的发病。方法应用小口径步枪致伤制造急性肺损伤动物模型,检测肺含水量、伊文思蓝漏出率,并应用免疫组织化学方法检测肺血管内皮Cx40表达;培养肺微血管内皮细胞,分别给予达氏修正伊氏培养基(DMEM)、伤后动物血清和GJC通道阻滞剂,应用染料划痕实验检测GJC功能、伊文思蓝漏出实验检测单层内皮细胞通透性、Fluo-3AM钙离子荧光探针检测胞内钙离子浓度。结果动物实验中,伤后Cx40表达随时间延长逐渐降低,肺血管通透性则呈递增趋势,二者呈负相关(r=-0.934,P<0.05)。离体实验中,伤后动物血清降低GJC功能,Cx40表达降低,当应用通道阻断剂后,GJC功能和Cx40表达降低程度更甚;此时肺微血管内皮细胞单层通透性增加,胞内钙离子浓度增加,应用GJC通道阻断剂后,这种效应更加明显。结论肺血管内皮细胞GJC对肺血管通透性有调节作用,胸部枪弹伤后,肺血管内皮Cx40表达降低,引起GJC功能下降,导致胞内钙超载,最终导致肺血管通透性增加和急性肺损伤的发病。     

替罗非班对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉成形术后基质金属蛋白酶-9与可溶性CD40配体表达的影响

目的 观察替罗非班对急性冠状动脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉成形术(PCI)术后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与可溶性CD40配体(sCD40L)的影响.探讨该药抗炎及稳定斑块的作用机制.方法 选择ACS患者86例,随机分为对照组和不同时间段替罗非班组,PCI术后6、12、24、36 h分别抽取患者血液,应用夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测患者MMP9和sCD40L浓度的变化.结果 应用替罗非班后6、12、24、36 h MMP-9的表达从(228.25±0.02)μg/L降至(53.56±0.02)μg/L;sCD40L的表达从(321.12±0.02)ng/L降至(123.32±0.02)ng/L,与对照组[MMP-9:(319.66±0.02)μg/L;sCD40L:(392.33±0.02)μg/L]比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 替罗非班能抑制sCD40L以及MMP-9的表达,替罗非班对MMP-9的抑制作用与CD40/CD40L信号通路相关,此作用可能是其减轻动脉粥样斑块炎症,防止斑块破裂的机制之一.