MiR-671-5p通过负向调控SMAD3抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-671-5p影响骨肉瘤的迁移侵袭的相关机制。方法 通过NCBI在线数据库筛选骨肉瘤中差异表达的微小RNA（miRNA）、预测miRNA的靶蛋白并进行功能分析;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）用于检测转染过表达miR-671-5p质粒后con组和miR-671-5p组骨肉瘤细胞中miR-671-5p的表达情况;通过Transwell实验检测转染质粒后骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力;Western blot实验检测相关蛋白在骨肉瘤细胞中的表达情况;荧光素酶报告基因检测重组人SMAD家族成员3（SMAD3）的 3’UTR中是否含有miR-671-5p的结合位点。结果 MiR-671-5p在骨肉瘤组织和细胞中表达下调（P<0.05）。qRT-PCR证明转染过表达miR-671-5p质粒后,细胞转染成功（P<0.05）。过表达骨肉瘤细胞中的miR-671-5p后细胞的迁移和侵袭能力明显降低（P<0.05）,并且miR-671-5p能够抑制骨肉瘤细胞的上皮间质转化（EMT）（P<0.05）;Western blot结果显示SMAD3在骨肉瘤细胞中表达上调（P<0.05）;荧光素酶报告基因检测证实miR-671-5p与SMAD3的3’UTR之间存在结合位点（P<0.05）;Western blot结果显示转染过表达SMAD3质粒后,SMAD3表达明显升高（P<0.05）,而miR-671-5p能明显抑制SMAD3的表达（P< 0.05）;Transwell实验证明SMAD3能够促进骨肉瘤细胞的迁移和侵袭能力（P<0.05）,而miR-671-5p则能够逆转这种促进作用（P<0.05）。结论 MiR-671-5p能够通过负向调控SMAD3抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭能力。     

抑制miR-93-5p表达对人卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨miR-93-5p对人卵巢癌细胞增殖和迁移的影响,并初步探究其作用机制。方法qRT-PCR检测人正常卵巢上皮细胞（IOSE80）与卵巢癌细胞（SKOV3、A2780、ES2）中miR-93-5p的相对表达量;将SKOV3细胞分成抑制物组（inhibitor组）和阴性对照组（NC组）;MTT法检测inhibitor组和NC组细胞的相对存活率;细胞划痕实验检测inhibitor组和NC组细胞的相对迁移率;Westernblot法检测inhibitor组和NC组细胞中RBM24蛋白的相对表达量;生物信息学方法对miR-93-5p进行靶基因预测,并通过荧光素酶报告基因检测验证。结果miR-93-5p在卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2中的表达水平均明显高于正常卵巢上皮细胞IOSE80（均P＜0.05）。Inhibitor组细胞在48和72h的相对存活率较NC组均显著降低（均P＜0.05）。Inhibitor组细胞在12h时的相对迁移率为（40.67±4.21）%,在24h时的相对迁移率为（33.76±3.42）%,与NC组比较差异均有统计学意义（均P＜0.01）。与NC组比较,inhibitor组细胞中RBM24蛋白相对表达量明显升高（P＜0.05）。荧光素酶报告基因实验结果显示,与对照组（miR-NC组）比较,过表达组（miR-93-5pmimics组）中RBM24-MUT表达差异无统计学意义（P＞0.05）,而RBM24-WT表达则显著下调（P＜0.05）。结论miR-93-5p在卵巢癌细胞中呈现高表达,可以通过靶向调控RBM24的表达量进而促进卵巢癌细胞的增殖和迁移。     

LncRNA XIST在子宫内膜癌组织中的表达及其靶向microRNA-101-3p对癌细胞生物行为学的影响

目的 探究lncRNA XIST在子宫内膜癌组织中的表达及其靶向microRNA-101-3p（miR-101-3p）对癌细胞生物行为学的影响。方法 选取2019年7月—2021年7月南通市妇幼保健院82例手术切除且经术后病理确诊的子宫内膜癌患者的癌组织及癌旁正常子宫内膜组织标本。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测子宫内膜组织lncRNA XIST、miR-101-3p mRNA的相对表达量;比较不同因素间lncRNA XIST、miR-101-3p mRNA的差异;取Ishikawa细胞随机分为对照组（C组）、空质粒组（NC组）、lncRNA XIST表达抑制组（sh-XIST组）,其中NC组和sh-XIST组分别转染空载质粒与plko-lncRNA XIST-shRNA,C组不进行任何处理;CCK-8法检测细胞增殖活性;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;双荧光素酶报告基因观察lncRNA XIST与miR-101-3p的靶向性。结果 子宫内膜癌组织中lncRNA XIST mRNA相对表达量高于癌旁组织（P <0.05）,miR-101-3p mRNA相对表达量低于癌旁组织（P <0.05）。不同TNM分期和淋巴结是否转移患者的lncRNA XIST、miR-101-3p mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）。C组、NC组、sh-XIST组在不同时间点Ishikawa细胞增殖活性的比较采用重复测量设计的方差分析,结果 ①不同时间点的Ishikawa细胞增殖活性有差异（P <0.05）;②3组的Ishikawa细胞增殖活性有差异（P <0.05）;③3组的Ishikawa细胞增殖活性变化趋势有差异（P <0.05）。sh-XIST组细胞迁移率低于C组和NC组（P <0.05）。sh-XIST组侵袭个数少于C组和NC组（P <0.05）。双荧光素酶报告基因显示,lncRNA XIST可以靶向作用于miR-101-3p。结论 lncRNA XIST和miR-101-3p mRNA在子宫内膜癌组织中异常高表达,并且在不同TNM分期及是否淋巴结转移患者子宫内膜癌组织中的表达有差异。抑制Ishikawa细胞中lncRNA XIST的表达可以抑制癌细胞的恶性细胞生物学行为,其机制可能与靶向调控miR-101-3p有关。     

miR-328-5p靶向SPON2介导FAK/Src信号调控胃癌细胞迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-328-5p对胃癌细胞迁移和侵袭的作用及其分子机制。方法将30只小鼠按照随机数字表法分为胃癌组和正常组,每组15只,采用N-甲基-N-亚硝基脲（MNU）化学诱导法构建小鼠胃癌模型,采用RT-PCR法检测两组小鼠胃组织中miR-328-5p、脊椎蛋白2（SPON2）相对表达量;Westernblot法检测两组小鼠胃组织中酪氨酸蛋白激酶（Src）、磷酸化Src（p-Src）、局部黏着斑激酶（FAK）、磷酸化FAK（p-FAK）蛋白表达水平。将胃癌细胞系SGC7901分为miR-328-5p组、miR-con组、NC组共3组,采用RT-PCR法检测3组细胞miR-328-5p、波形蛋白（Vimentin）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）相对表达量;采用Transwell小室实验检测3组细胞迁移和侵袭数。采用荧光素酶报告基因实验检测胃癌细胞miR-328-5p、miR-con+SPON2基因野生型（WT）和突变型（MUT）的荧光素酶相对活力值。结果与正常组比较,胃癌组胃组织中miR-328-5p相对表达量明显降低,SPON2相对表达量明显升高（均P＜0.05）;与正常组比较,胃癌组胃组织中p-FAK、p-Src蛋白表达水平均明显升高（均P＜0.05）。与NC、miR-con组比较,miR-328-5p组miR-328-5p相对表达量明显升高,同时Vimentin、MMP-9相对表达量均明显降低（均P＜0.05）;与NC、miR-con组比较,miR-328-5p组细胞迁移数和侵袭数均明显降低（均P＜0.05）。与miR-328-5p+SPON2WT组比较,miR-con+SPON2WT组、miR-con+SPON2MUT组、miR-328-5p+SPON2MUT组荧光素酶相对活力值均明显为高（均P＜0.05）。结论miR-328-5p在胃癌组织中呈低表达,过表达miR-328-5p可抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力;miR-328-5p直接靶向SPON2基因3''UTR序列,调控其转录表达,并抑制其下游FAK/Src信号活化及其下游Vimentin、MMP-9的表达。     

miR-26b-3p靶向CREB1调控神经胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨miR-26b-3p靶向调控环磷酸腺苷效应元件结合蛋白1(CREB1)表达水平影响胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的分子机制。方法 运用RT-qPCR和Western blotting检测不同级别胶质瘤中miR-26b-3p和CREB1的表达情况;生物信息学方法分析miR-26b-3p与CREB1结合的靶向序列。采用双荧光素酶报告基因检测miR-26b-3p对CREB1的靶向调控机制;将胶质瘤U251细胞分为对照组、miR-26b-3p mimic组及miR-26b-3p inhibitor组,采用Western blotting检测CREB1的表达变化,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的影响,采用划痕实验检测各组细胞迁移能力的影响,采用Transwell检测各组细胞侵袭能力的影响,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡的影响。结果 miR-26b-3p的表达随着胶质瘤级别的增加而降低（P<0.05）,而CREB1的表达则逐渐增加,差异有统计学意义（P<0.05）;双荧光素酶报告基因结果显示miR-26b-3p可显著影响CREB1 3′UTR表达载体的荧光素酶活性,CR...     

miR-99b-5p通过靶向TRIB1基因调控乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨miR-99b-5p靶向Tribbles同源蛋白1(Tribbles pseudokinase 1,TRIB1)基因调控人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡。方法采用RT-PCR检测人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达水平,采用Western blotting检测人乳腺上皮细胞HBL-100和乳腺癌MCF-7细胞中TRIB1蛋白表达量。在MCF-7细胞中转染miR-99b-5p mimics或mimics对照,分别记为miR-99b-5p组和miR-NC组,RT-PCR检测细胞中miR-99b-5p表达变化,Western blotting检测TRIB1蛋白表达量,MTT法检测细胞增殖能力,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-99b-5p和TRIB1的靶向关系。结果与人乳腺上皮细胞HBL-100比较,乳腺癌MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达量明显降低(P < 0.01),而TRIB1蛋白的表达明显升高(P < 0.01)。与miR-NC组比较,miR-99b-5p组MCF-7细胞中miR-99b-5p的表达量升高(P < 0.05),TRIB1蛋白表达水平降低(P < 0.05),细胞增殖能力减弱(P < 0.05),细胞凋亡率升高(P < 0.05)。双荧光素酶报告基因检测实验结果显示,miR-99b-5p能够明显降低TRIB1-Wt MCF-7细胞相对荧光素酶活性(P < 0.01),而对TRIB1-Mut MCF-7细胞相对荧光素酶活性无明显影响(P>0.05)。结论miR-99b-5p在乳腺癌MCF-7细胞中呈低表达,TRIB1蛋白呈高表达,过表达miR-99b-5p能够靶向抑制TRIB1阻碍MCF-7细胞增殖并促进细胞凋亡。     

lncRNA TTN-AS1通过靶向miR-204-3p调控胃癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化

目的：探讨长链非编码RNA肌联蛋白反义RNA 1（lncRNA TTN-AS1）是否可通过靶向微小RNA-204-3p（miR-204-3p）调控胃癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化（EMT）。方法：采用qRT-PCR法检测胃癌组织、癌旁组织中TTN-AS1、miR-204-3p的表达量;体外培养人胃癌细胞AGS,分别将si-NC、si-TTN-AS1、miR-NC、miR-204-3p mimics、si-TTN-AS1与anti-miR-NC、si-TTN-AS1与anti-miR-204-3p转染至AGS细胞;采用qRTPCR法检测AGS细胞中TTN-AS1、miR-204-3p的表达量;采用Transwell小室实验检测迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测TTN-AS1、miR-204-3p的靶向关系。结果：胃癌组织中TTN-AS1的表达水平比癌旁组织增加约2.90倍（P ＜0.05）,miR-204-3p的表达水平比癌旁组织减少约0.57倍（P ＜0.05）;转染si-TTN-AS1或转染miR-204-3p mimics可明显减少迁移及侵袭细胞数（P ＜0.05）;双荧光素酶报告实验证实TTN-AS1可靶向结合miR-204-3p;共转染si-TTN-AS1与anti-miR-204-3p可明显增加迁移及侵袭细胞数（P ＜0.05）。结论：抑制TTN-AS1表达可通过上调miR-204-3p的表达从而抑制胃癌细胞迁移、侵袭及EMT。     

miR-431-5p通过调控AKT1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡研究

目的研究miR-431-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测人正常胰腺上皮细胞hTERT-HPNE和胰腺癌细胞CFPAC-1和PANC-1中miR-431-5p表达水平。转染miR-431-5p模拟物至胰腺癌CFPAC-1细胞中过表达miR-431-5p后,MTT法测定细胞增殖活性,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测细胞中Cyclin D1、p21、Bax、Bcl-2、E-cadherin、MMP-2和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-431-5p与AKT1的调控关系。结果与hTERT-HPNE细胞相比,胰腺癌细胞PANC-1和CFPAC-1中miR-431-5p表达量降低（P < 0.05）。过表达miR-431-5p后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数降低,凋亡率升高,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-431-5p在CFPAC-1细胞中靶向负调控AKT1表达。同时过表达miR-431-5p和AKT1后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数升高,凋亡率降低,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论miR-431-5p通过靶向抑制AKT1降低胰腺癌CFPAC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡,可能是胰腺癌的潜在分子治疗靶点。     

MicroRNA-212-3p与靶基因转化生长因子-β2基因3'UTR的关系研究*

目的?构建转化生长因子-β2（TGF-β2）基因3''UTR双荧光素酶报告质粒,分析microRNA-212-3p（miR-212-3p）与其潜在靶基因TGF-β2的靶向关系。方法?将TGF-β2 3''UTR片段构建至双荧光素酶报告载体pYr-MirTarget上,随后将重组质粒与miR-212-3p核苷类、无核苷类及其抑制剂共同转染Saos-2细胞（人成骨肉瘤细胞）,通过双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性,RT-PCR检测Hsa-miR-212及TGF-β2基因的mRNA相对表达量,Western blotting检测TGF-β2蛋白相对表达量。结果?miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组荧光素酶活性较对照组低（P?<0.05）。miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组Has-miR-212 mRNA相对表达量最高,miR-212-3p-inhibitor+TGF-β2 3''UTR共转染组最低（P?<0.05）。miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组TGF-β2 mRNA相对表达量最低,miR-212-3p-inhibitor+TGF-β2 3''UTR共转染组最高（P?<0.05）。miR-212-3p-inhibitor+TGF-β2 3''UTR共转染组TGF-β2蛋白相对表达量最高,miR-212-3p-mimics+TGF-β2 3''UTR共转染组最低（P?<0.05）。结论?该实验成功构建了TGF-β2基因3''UTR荧光素酶重组质粒,而且miR-212-3p可以与TGF-β2基因的3''UTR结合,抑制荧光素酶活性,由此推断TGF-β2是miR-212-3p的靶基因。     

miR-145对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究miR-145对人宫颈癌细胞系SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法体外培养子宫颈癌细胞和正常宫颈上皮细胞,检测细胞中miR-145表达水平;将SiHa细胞分为miR-145过表达(mimics)组和阴性对照(NC)组,转染48 h后,CKK-8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;应用TargetScan数据库预测miR-145的靶基因并用荧光素酶报告基因实验验证,蛋白免疫印记(WB)检测miR-145过表达对肌球蛋白Ⅵ(MY06)蛋白表达的影响。结果 SiHa、Hela、MS751人子宫颈癌细胞中miR-145表达水平均显著低于正常子宫颈上皮细胞,差异有统计学意义(P0.05)。转染miR-145 mimics后,SiHa细胞中miR-145表达水平显著上调(P0.05);与NC组比较,mimics组SiHa细胞的增殖、迁移、侵袭能力均显著下降(P0.05)。TargetScan数据库预测显示MY06是miR-145潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系。WB结果显示miR-145过表达后,MY06蛋白表达水平显著下调。结论 miR-145能通过下调MY06表达抑制人宫颈癌细胞系SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭。     

造血干细胞移植后免疫重建及其意义的研究进展

本文对造血干细胞移植后的免疫重建及其意义的研究进展作一综述,着重介绍移植后宿主体内T细胞、自然杀伤(NK)细胞及树突细胞(DC)数量和功能的变化。     

细胞培养技术的研究进展

随着现代科学的发展,体外细胞培养技术已成为多个领域必不可少的研究工具,并且其新技术和方法也在不断涌现。本文就细胞培养技术的发展、支架材料以及细胞培养的影响因素作一综述。     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞，并进行传代培养，采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达，同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力，并表达神经巢蛋白，分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原，为中枢神经系统的干细胞。     

EPCs在MSCs向肝样细胞转化中作用的初步探讨

目的：探讨内皮前体细胞(endothelial precursor cells, EPCs)在间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向肝样细胞转化中的作用。方法：分离培养SD大鼠MSCs和EPCs,取第3代MSCs向肝样细胞转化培养,培养过EPCs的无血清及因子的培养基(endothelial progenitor cell-conditioned medium, EPCs-CM)、无血清的α-最低必需培养基(alpha minimal essential medium, α-MEM)分别与肝细胞转化培养基按1∶1比例配置,作为实验组和模型对照组,正常α-MEM培养基为空白对照组,分别观察细胞形态及数量变化;在培养3、5、7、9 d时应用免疫荧光检测甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)、清蛋白(albumin, ALB)的表达。结果：空白对照组MSCs形态无明显变化;实验组与模型对照组细胞均出现肝样细胞形态。空白对照组未见AFP、ALB表达,模型对照组和实验组在3、5、7、9 d AFP、ALB表达水平均增高,其中实验组比模型对照组AFP、ALB水平增高明显。结论：EPCs在MSCs向肝样细胞转化中可能起一定的促进作用。     

Culture and Identification of Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells

Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells （hAMSCs）. Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase digestion, and cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medinm/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Phenotypic characteristics of these cells were analyzed by means of immunocytochemistry and flow cytometry. Results The cells successfully isolated from human amniotic membrane expressed representative mesenchymal cell surface markers CD44, CD90, and vimentin, but not CD45. Conclusions This study establishes a potential method for isolation of hAMSCs from human amnion, in vitro culture, and identification. The isolated cells show phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells.     

人成纤维细胞产生的抑制因子对肿瘤和转化细胞增殖与分化的影响

对人成纤维细胞产生的抑制因子(HFDI)的细胞生长抑制效应进行研究,发现HFDI对肿瘤细胞~3H—TdR掺入抑制是由于使细胞变性坏死或促使细胞有限分化所致;并证明HFDI对PHA刺激的淋巴细胞转化的抑制,也是由于使转化细胞变性坏死或促使细胞向成熟方向发展所致。     

新生豚鼠神经干细胞的分离培养、鉴定及标记

目的 从新生豚鼠海马中分离培养神经干细胞，为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋的实验研究创造条件。方法 分离新生豚鼠海马组织，用含碱性成纤维生长因子（bFGF）和表皮生长因子（EGF）无血清培养技术培养神经干细胞，免疫组化技术检测其巢蛋白（Nestin）的表达。采用荧光染料DAPI标记神经干细胞。结果 从新生豚鼠海马组织分离出的细胞中可获得呈集落样生长的神经干细胞团，并能表达Nestin；荧光染料的标记效率可达93．4％，细胞传代8次后荧光亮度仍无明显衰减。结论 从新生豚鼠海马分离的细胞具有明显的增殖能力，荧光染料的标记可获得较高的标记效率，可作为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋实验研究的供体细胞。     

睾丸支持细胞与骨髓间充质干细胞共培养的初步研究

目的 观察睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)共培养时SCs对MSCs扩增的影响. 方法 取雄性SD大鼠睾丸,分离出SCs,取SD大鼠,分离出骨髓MSCs,将两种细胞用"三明治"式的方法共培养7 d. 结果 共培养组的MSCs前四天生长较对照组快,第5天无明显差异,第6和第7天细胞数量迅速减少. 结论 在体外共培养的早期,SCs可以显著促进MSCs的生长,但在后期则反而抑制MSCs的生长,具体原因有待进一步研究.     

大鼠胃壁细胞的分离及培养

目的　完成胃壁细胞分离及纯化 ,建立原代培养胃壁细胞的方法 .方法　制备大鼠翻转的胃囊用含链霉蛋白酶E的消化液注入胃囊内孵育 ,并用磁力搅拌器轻轻搅拌而制备单个的胃底腺细胞 ,Percoll梯度离心富集胃壁细胞 ,用含10 0 m L· L- 1 血清的 PBS或培养液 ,时差贴壁去除成纤维细胞 ,然后 ,将壁细胞接种于培养板中 ,培养液用无血清的 1∶ 1Harm's F- 12 / DMEM培养 ,内含胰岛素 5 mg· L- 1 ,氢化可地松 4μg· L- 1 ,转铁蛋白 5 mg· L- 1 ,硒酸钠 5μg· L- 1 ,牛血清白蛋白 2 g· L- 1 ,表皮生长因子 2 5 μg· L- 1 ,葡萄糖 1.98g· L- 1持续培养可达 1wk以上 .结果　获得的壁细胞经吖啶橙 (acridine orange,AO)鉴定纯度达 80 %以上 ,原代培养经HE染色可见壁细胞呈分散小组式生长 ,且生长状态良好 .结论　此方法适宜于大鼠胃壁细胞的分离及体外培养 ,为体外进一步研究壁细胞的功能打下基础 .     

成人血源性间充质干细胞的分离和鉴定

目的建立一种分离、培养扩增成人血源性间充质干细胞(MSCs)的方法进行鉴定,并与骨髓源性MSCs比较生物学特性。方法30名成年志愿者随机平分为二组,一组直接抽静脉血,并细分为全血细胞法组和外周血密度梯度离心法组,同时抽骨髓为骨髓密度梯度离心法组;另一组为血细胞分离机法组。各组进行细胞存活率、集落形成率、形态学、流式表型分析、胶原染色等研究。结果外周血密度梯度离心法分离成人静脉血后培养,贴壁细胞呈梭形,集落形成率为(0.12±0.08)/106单个核细胞,传代扩增到第5代时每份平均细胞数达51.4674×106,表达CD44、CD54、CD105和CD166,不表达CD14、CD34、CD45和CD31,细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原。全血细胞法和血细胞分离机法获得的细胞不能连续多次传代。结论外周血密度梯度离心法比全血细胞法和血细胞分离机法简单,贴壁细胞培养扩增容易,获得的血源性MSCs与骨髓源性MSCs的生物学特性相似。