督脉电针联合康复训练对脊髓损伤大鼠NGF、bFGF、BDNF表达的影响

目的 研究督脉电针联合康复训练对脊髓损伤大鼠神经营养因子如神经生长因子（NGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响，观察两种方法的协同效应。方法 将64只成年健康大鼠随机平均分成对照组、督脉电针组、康复训练组、督脉电针联合康复训练组，每组再分成4周组、8周组两个亚组，共8组，每组8只。建立大鼠脊髓损伤模型，各治疗组给予不同方案干预，对各组大鼠分别采用Basso,Beattie and Bresnahan行为评分法（BBB）评分，采用蛋白免疫印迹法（WB）测定NGF、bFGF、BDNF的表达。结果BBB评分：4周亚组中，督脉电针组、督脉电针联合康复训练组BBB评分较对照组明显升高[（13.26±0.38）、（15.35±0.42）比（6.48±0.37），P均<0.05]，康复训练组与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。8周亚组中，督脉电针组、康复训练组、督脉电针联合康复训练组BBB评分较对照组明显升高[（16.41±0.75）、（13.53±1.20）、（18.94±0.92）比（9.21±0.51），P均<0.05]，且督脉电针联合康复训练组高于督脉电针组、康复训练组[（18.94±0.92）比（16.41±0.75）、（13.53±1.20），P均<0.05]；与督脉电针联合康复训练4周组相比，督脉电针联合康复训练8周组BBB评分升高更显著[（18.94±0.92）比（15.35±0.42），P<0.05]。NGF、bFGF、BDNF的表达：4周亚组中，督脉电针组、督脉电针联合康复训练组显著高于对照组 [NGF：（0.45±0.04）、（0.60±0.01）比（0.26±0.05）；bFGF：（0.52±0.04）、（0.59±0.02）比（0.31±0.03）；BDNF：（0.47±0.07）、（0.61±0.07）比（0.23±0.04）；P均<0.05]；康复训练组与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。8周亚组中，督脉电针组、康复训练组、督脉电针联合康复训练组表达明显高于对照组 [NGF：（0.67±0.09）、（0.59±0.02）、（0.85±0.10）比（0.31±0.01）；bFGF：（0.64±0.05）、（0.53±0.02）、（0.77±0.06）比（0.30±0.05）；BDNF：（0.66±0.01）、（0.58±0.05）、（0.75±0.05）比（0.24±0.06）；P均<0.05]，且督脉电针联合康复训练组高于督脉电针组、康复训练组[NGF：（0.85±0.10）比（0.67±0.09）、（0.59±0.02）；bFGF：（0.77±0.06）比（0.64±0.05）、（0.53±0.02）；BDNF：（0.75±0.05）比（0.66±0.01）、（0.58±0.05）；P均<0.05]。结论 对脊髓损伤大鼠，督脉电针、康复训练通过增加受损脊髓神经营养因子的表达促进其功能恢复,且督脉电针及康复训练二者联合存在协同性。     

兰州市居民疾病谱分析及控制对策探讨

目的了解甘肃省兰州市疾病的构成和发生状况,为疾病的控制干预提供依据。方法按国际疾病标准编码(ICD-10)统计分析2013年兰州市疾病的构成、发生情况和就医情况。结果 2013年门诊前五位的疾病排序及构成是:上呼吸道感染(4.25%)、女性不育不孕症(3.52%)、乳房疾患(3.44%)、糖尿病(3.10%)、腹痛(2.20%);住院疾病是:糖尿病(2.37%)、非胰岛素依赖型糖尿病(2.01%)、脑动脉供血不足(1.37%)、冠状动脉狭窄(1.30%)、高血压(1.13%)。结论病例就诊分布中省级以上医院门诊、住院医疗工作量过大,区级医院、卫生服务中心医疗服务工作量不足;多发病、常见病已成为影响人群健康的主要因素,医疗卫生资源的分布不合理。     

lncRNA MIAT 在巨噬细胞炎症反应中的作用

目的:探索长链非编码RNA心肌梗死转录本(lncRNA MIAT)在巨噬细胞炎症反应中的作用及其可能参与的炎症通路。方法:脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞J774A.1制备炎症反应细胞模型(LPS组),以等体积PBS刺激的J774A.1细胞为PBS对照组(PBS组),实时定量PCR(RT-qPCR)及ELISA法检测两组IL-1β、TNF-α的mRNA及蛋白表达水平,RT-qPCR检测lncRNA MIAT在两组的表达量及亚细胞定位;shRNA敲低lncRNA MIAT,分为shMIAT敲低(KD)组、shNC阴性对照(NC)组,RT-qPCR检测lncRNA MIAT敲低效率及两组IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量;Western blot检测KD、NC组的NF-κB、ERK5等多种转录因子磷酸化水平;在LPS刺激J774A.1细胞分别加入ERK5特异性抑制剂(ERK5-IN-2)、ERK5-IN-2溶解液二甲基亚砜(DMSO),分为抑制剂组、DMSO对照组,Western blot检测ERK5磷酸化水平,RT-qPCR检测两组IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量。结果:LPS组IL-1β、TNF-αmRNA相对表达水平及蛋白表达水平均高于PBS组(P0.05);lncRNA MIAT在LPS组相对表达量显著高于PBS组,且主要表达于细胞核;lncRNA MIAT在KD组显著低于NC组,其在J774A.1细胞的敲低效率为43%。KD组IL-1β、TNF-αmRNA相对表达量显著高于NC组;KD组ERK5磷酸化程度显著高于NC组,而NF-κB、STAT3、ERK1/2磷酸化水平差异无统计学意义;抑制剂组EKR5磷酸化显著低于DMSO对照组,且抑制剂组的IL-1β、TNF-αmRNA相对表达水平显著低于DMSO对照组。结论:lncRNA MIAT可能通过抑制ERK5磷酸化减少IL-1β、TNF-α合成,从而抑制巨噬细胞炎症反应。     

小儿感冒颗粒的质量标准研究

目的:建立小儿感冒颗粒的质量标准。方法:用TLC法鉴别了小儿感冒颗粒中广藿香、菊花、连翘和用HPLC法测定了小儿感冒颗粒中连翘苷的含量;色谱柱为DiamonsilTMC18柱(5μm,4.6 mm×250 mm),柱温为30℃,以乙腈-水(24∶76)为流动相,检测波长为202 nm,流速1.0 m L/min。结果:在TLC色谱中均能检出百秋李醇、菊花、连翘苷;且特征斑点明显,阴性无干扰;连翘苷在0.023 62μg~0.590 5μg范围内呈良好的线性关系,r=0.99999(n=6),平均回收率为99.06%,RSD=1.5%.结论:方法简便、准确、重现性好;可用于小儿感冒颗粒的质量控制。     

Survivin、TGFβ3和TIMP1基因重组慢病毒多表达载体构建及其表达活性检测

目的应用Gateway技术构建生存素(Survivin)、人转化生长因子β3(TGFβ3)和基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)慢病毒多表达质粒,并检测其表达活性。方法应用Gateway技术,以自剪切多肽2A串联Survivin、TGFβ3、TIMP1的3段外源基因,并克隆到慢病毒多表达质粒上,通过RT-PCR和Western-blot技术分别检测质粒转染293T细胞后目的基因mRNA和蛋白质表达水平。结果 RT-PCR和Western-blot检测结果显示,慢病毒多表达质粒成功表达了3种目的基因,且其mRNA和蛋白质表达水平较空载体对照组、PBS对照组明显升高,差异有显著性(F=17.87~69.11,q=6.94~15.47,P<0.05)。结论成功构建了慢病毒多表达质粒pLenti6.3-Survivin-P2A-TGFβ3-T2A-TIMP1,为下一步病毒的制备以及体内实验提供了基础。     

PCNL联合URL与RLU治疗复杂性上尿路结石的疗效分析

目的 探讨输尿管软镜碎石术联合经皮肾镜取石术(简称双镜联合手术)与后腹腔镜输尿管切开取石术(RLU)治疗复杂性上尿路结石的疗效.方法 选取2016年1月至2019年12月在该院就诊的80例复杂性上尿路结石患者为研究对象,分为对照组和观察组,每组40例.对照组采用RLU治疗,观察组采用双镜联合手术.观察并记录两组患者术中出血量、手术时间、住院时间,术后结石清除率及术后并发症情况;ELISA检测两组患者术前及术后的C反应蛋白(CPR)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)和前列腺素F2α(PGF2α)水平.结果 观察组患者术中出血量、手术时间和住院时间均明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).两组患者术后第1、3天的CRP、TNF-α、IL-6、PGE2和PGF2α水平均明显高于术前,观察组术后第1、3天的CRP、TNF-α、IL-6、PGE2和PGF2α水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).两组患者结石清除率、术后并发症发生率和术后第5天的炎性因子表达水平比较无明显差异(P>0.05).结论 双镜联合手术不仅可以有效清除结石,还能缩短治疗和康复时间.     

靶向多药耐药基因mdr1 RNA干扰载体的构建及鉴定

目的 构建靶向人多药耐药基因mdr1的microRNA(miRNA)干扰表达载体并进行鉴定. 方法 设计并合成4对编码mdr1 pre-miRNA的单链寡核苷酸,退火成双链后将其连接入miRNA干扰载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR,构建成重组质粒,酶切并测序鉴定其正确性. 结果 获得的重组质粒经酶切测序证实其插入片段大小与预期相符,序列完全正确. 结论 成功构建了4个靶向mdr1的miRNA干扰载体.     

彩色多普勒超声诊断胎儿先天性心脏异常的价值探讨

目的探讨彩色多普勒超声诊断胎儿先天性心脏异常的价值。方法对2011年1月—2013年6月在我院进行产前检查的孕妇中出现胎儿心脏异常66例,均采取彩色多普勒超声诊断。随访终止妊娠的引产者,尸检产后的死婴。存活婴儿在产后需定期实行心脏彩超复查。结果经彩色多普勒超声诊断出来的胎儿先天性心脏病的66例中,引产34例,病理解剖22例,均与诊断符合;产后心脏彩超复查32例,与诊断符合的20例,漏诊2例,误诊4例。胎儿先天性心脏病的类型中,以室间隔缺损为主,占46.67%,其次以卵圆孔直径增大最多,占20%;在22例病理解剖的胎儿中,尸解结果与胎儿先天性心脏病的超声表现比照,只有2例左心发育不良被超声诊断为完全性心内膜垫缺损,其余皆符合。结论彩色多普勒超声在胎儿先天性心脏异常的诊断中,可防止或降低胎儿出生缺陷的发生率和死亡率,提高胎儿的生存质量。     

RhoA、RhoC串联RNA干扰载体的构建及在结直肠癌细胞中的表达

目的 探讨RhoA、RhoC串联RNA干扰载体的构建及在结直肠癌细胞中的表达.方法 设计合成4对靶向RhoA与RhoC基因的各两对寡核苷酸序列,退火后分别克隆入shRNA表达载体;通过一系列的酶切与连接,将该4段干扰片段串联起来,构建一个同时表达4个shRNA的重组质粒.经酶切和测序鉴定重组质粒.脂质体法转染HCT116,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各细胞中RhoA、RhoC mRNA的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖活性.结果　经酶切和测序证实重组质粒pGenesil2.7-A1+A2+C1+C2构建成功.转染该重组质粒后细胞中RhoA、RhoC mRNA的表达水平分别为(0.78±0.11)和(0.90±0.21),明显低于空白对照组(0±0.15、0±0.09)和阴性对照组(-0.05±0.12、0.11±0.10,P＜0.05),且细胞的生长增殖率(63.8±12.5)%也显著低于对照组和质粒对照组(101.6±13.7)%(P＜0.05).结论　成功构建4个shRNA串联的重组表达载体,该载体可在体外高效表达.

Abstract：

Objective To construct and identify recombinant RhoA and RhoC shRNAs Tandem expression vector pGenesil2. 7-A1 + A2 + C1 + C2 and observe its expression in human colorectal carcinoma cells HCT116. Methods Four pairs of hairpin-like oligonucleotide sequences special for human RhoA or RhoC gene were designed and synthesized. The annealed oligonucleotide fragments were subcloned into four plasmids each with a different promotor. Then the four oligonucleotide fragments were series connected to construct an efficient multiple shRNAs expression system. The tandem array multiple shRNAs expression vector was confirmed by enzyme digestion and DNA sequencing and then was transfected into HCT 116 usingLipofectamneTM 2000. The expression of RhoA or RhoC mRNA was detected by fluorescence quantitative polymerase chain reaction (FQ-PCR). Cellular proliferation inhibitory activity was determined by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay. Results Enzyme digestion and DNA sequencing showed that the oligonucleotide fragments were correctly inserted into pGenesil2. 7-A1 + A2 + C1 + C2 plasmid. After transfection, the expression of RhoA or RhoC mRNA was (0.78 ±0. 11)or (0.90 ±0.21) ,significantly lower than that in control group (0 ±0. 15、0 ±0. 09) and plasmid control group ( -0. 05 ±0. 12、0. 11 ±0. 10)(P＜0. 05) ,and the proliferation rate (63. 8 ± 12. 5)% was also lower as compared with control group and plasmid control group ( 101.6 ± 13.7 ) % ( P ＜ 0. 05 ). Conclusion The recombinant tandem array multiple shRNAs expressing vectors can effectively silence the expression of RhoA or RhoC in human colorectal carcinoma cells.