反义 Bcl -2寡核苷酸对阿霉素诱导的人宫颈癌SiHa 细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨siRNA抑制线粒体Bcl-2基因联合阿霉素对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及相关作用机制。方法将化学合成的靶向Bcl-2基因siRNA序列转染至SiHa细胞中,Western blot验证转染效率后,将SiHa细胞分为5组：空白对照组（不加任何处理）、阴性对照组（转染阴性siRNA序列）、干扰组（转染Bcl-2 siRNA序列）、阿霉素组（5μg／mL阿霉素处理）、联合组（转染siRNA序列＋5μg／mL阿霉素处理）。通过MTT比色法检测细胞增殖水平、流式细胞术检测细胞凋亡水平、分光光度法分别检测半胱氨酸蛋白酶Caspase-3和Caspase-9的活力变化以及细胞色素c（ Cyt-c）释放水平变化。结果 Bcl-2 siRNA转染后,相对于阿霉素组,联合组细胞增殖率明显降低,凋亡水平则明显上升（P＜0.01）;细胞周期各时相重新分布,G0／G1期细胞明显减少（P＜0.01）,S期和G2／M期细胞则明显增多（P＜0.01）;Caspase-3和Caspase-9活力明显升高,Cyt-c释放水平亦显著增加（P＜0.01）。结论 Bcl-2靶向反义siRNA序列联合阿霉素处理能显著促进线粒体依赖性的细胞凋亡, Bcl-2可作为人宫颈癌基因治疗的候选靶点。     

RNAi沉默FAK基因表达对人舌鳞癌细胞CAL-27凋亡和侵袭的影响

目的 应用RNA干扰技术将FAK基因表达沉默后,观察人舌鳞癌细胞株CAL-27凋亡和侵袭能力的变化.方法 使用RNAi技术构建3对FAK siRNA后,瞬时转染细胞.运用实时定量聚合酶链反应(qPCR)法检测FAK mRNA的表达情况,筛选出沉默效率最佳的siRNA用于后续实验.运用蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测细胞FAK蛋白的表达情况,流式细胞仪观察细胞的凋亡情况,Transwell侵袭实验观察细胞体外侵袭能力的变化.结果 qPCR实验结果显示转染siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组FAK mR-NA表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.01),其中以siRNA-3沉默效率最高;Western blot结果显示转染组细胞FAK蛋白表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05);流式细胞仪检测结果显示转染组细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.01);Transwell法实验结果显示转染组细胞穿膜的数量明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).结论 沉默FAK基因表达可诱导舌鳞癌细胞CAL-27的凋亡,有效抑制其侵袭能力.     

下调FoxM1通过激活JNK/线粒体通路增加人鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感性

目的 探讨特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA) 沉默转录因子叉头框M1(FoxM1) 对人鼻咽癌HONE-1细胞增殖、凋亡、紫杉醇敏感性的影响及可能的分子机制.方法 采用siRNA靶向沉默鼻咽癌HONE-1细胞FoxM1表达并通过RT-PCR、实时定量PCR、Western blot检测转染后FoxM1的表达水平.siRNA转染后细胞的增殖和对紫杉醇的敏感性采用MTT法检测,流式细胞仪检测细胞周期分布,Annexin V-FITC /PI双染法检测细胞凋亡率.Western blot检测Ki67、CyclinE1、多药耐药基因1(multidrug resistance 1,MDR1) 及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK) 、p-JNK、 c-Jun、p-c-Jun、凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平.结果 转染后FoxM1 mRNA及蛋白的表达均被下调(P＜0. 01) .siRNA转染组细胞增殖速率减缓(P＜0. 05),Ki67表达降低(P＜0. 05) .siRNA转染组G1期细胞比例增加(P＜0. 01),S期比例减低(P＜0. 05),Cyclin E1低表达(P＜0. 01) .同时, siRNA +紫杉醇组凋亡率明显高于阴性及空白对照+ 紫杉醇组(P＜0. 01) .siRNA转染组细胞MDR1水平下降(P＜0. 05),对紫杉醇的敏感性较两对照组明显增强(P＜0. 01) .siRNA + 紫杉醇组与阴性对照+ 紫杉醇组相比p-JNK1、p-c-Jun、Bax表达上调(P＜0. 01),Bcl-2表达下调(P＜0. 01) .结论 特异性siRNA沉默FoxM1表达可以影响JNK/线粒体通路活性,抑制鼻咽癌HONE-1细胞增殖,促进其凋亡,提高其对紫杉醇的敏感性.     

Bcl-2 siRNA增强HepG2细胞对5-氟尿嘧啶敏感性

目的 观察Bcl-2 siRNA对人类肝癌细胞HepG2 5-氟尿嘧啶（5-FU）敏感性的影响。方法 Bcl-2 siRNA表达载体构建并稳定转染至肝癌细胞HepG2中,用G418筛选稳定的阳性细胞克隆。用RT-PCR检测Bcl-2 mRNA水平,免疫荧光检测目的基因Bcl-2蛋白水平的表达。用131、30、1300和13 000 mg/L 5-FU处理稳定转染细胞,用MTT观察细胞对药物敏感性的影响,用流式细胞术观察细胞凋亡情况。Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白水平。结果 5-FU处理细胞24 h,Bcl-2 siRNA转染组的细胞生长抑制率明显高于阴性载体转染组和正常细胞;Bcl-2 siRNA转染组细胞凋亡率高于正常细胞和阴性载体转染组;在Bcl-2表达下调时,Bax蛋白表达水平不变。结论 siRNA下调目的基因Bcl-2能增强人类肝癌细胞HepG2对5-FU的敏感性;HepG2细胞对5-FU的敏感性增强与Bax/Bcl-2的比例增高有关。     

DNA-PKcs影响肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU耐药性的机制

目的利用RNA干扰技术探讨DNA-PKcs基因沉默影响肝癌细胞BEl7402/5-FU耐药性的机制。方法将靶向DNA-PKcs的干扰质粒shDNA-PKcs转染肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU,利用实时荧光定量PCR及Western blot法检测转染干扰质粒后DNA-PKcs基因的沉默效率;Western blot检测Artemis、磷酸化Artemis蛋白水平的表达。结果实时荧光定量PCR及Western blot检测结果显示转染shDNA-PKcs后,DNA-PKcs mRNA及蛋白水平表达均下调（P〈0.05）;Western blot检测结果显示shDNA-PKcs转染组Artemis蛋白表达水平与对照组相比均有所降低（P〈0.05）,磷酸化Artemis蛋白表达水平在转染前后无明显变化（P〉0.05）。结论 ShDNA-PKs干扰质粒能抑制Bel-7402/5FU细胞中DNAPKcs、Artemis蛋白的表达、但对P-Artemis的表达无影响。     

IRAK-4基因沉默对人成骨样细胞凋亡的影响

【目的】研究siRNA沉默白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)基因对人成骨样细胞株MG63凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响。【方法】 以Lipofectamine 2000为载体将IRAK-4-siRNA转染入MG63细胞(CON组:不加入任何转染试剂;SC组:以scrambled siRNA序列进行转染;KD组:以特异性IRAK-4-siRNA序列进行转染),应用流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡水平,western blotting检测Bcl-2、Bax基因的表达。【结果】 与对照组相比,靶基因沉默组(KD组)细胞的IRAK-4 mRNA及蛋白表达水平显著降低;转染48h后,KD组细胞增殖变缓,凋亡增加,Bcl-2蛋白的表达明显下调且Bcl-2/BaxSC>Bcl-2/BaxKD; Spearman等级相关分析显示MG63细胞凋亡比例与Bcl-2/Bax的比值间有显著的相关性。 【结论】 siRNA沉默IRAK-4基因能够诱导人成骨样细胞株MG63凋亡,且靶细胞凋亡水平与Bcl-2、Bax基因表达水平的比值相关.     

siRNA沉默PTP4A1表达对人舌鳞癌细胞系TCA8113体内外生物学行为的影响

目的 探讨特异性沉默人舌鳞癌细胞系TCA8113中PTP4A1基因的表达,并研究沉默该基因表达后对TCA8113细胞体内外生物学行为的影响.方法 采用siRNA的慢病毒载体siRNA-PTP4A1作为阳性干扰组(KD),空病毒载体作为阴性对照组(NC),未作任何处理的TCA8113细胞作为空白对照组(CON).Real-time PCR和Westem blot检测PTP4A1基因的干扰效果,MTT法检测3组细胞的增殖能力,流式细胞技术分析3组细胞凋亡和细胞周期情况,平板克隆形成实验检测体外克隆形成能力,Western blot分别检测3组细胞抑制凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax的表达情况,3组细胞分别裸鼠成瘤后观察移植瘤的生长情况.结果 siRNA-PTPA1转染TCA8113细胞成功,Real-time PCR和Western blot 检测PTP4A1基因的抑制率达到55％和60％以上(P ＜0.05);MTT结果显示KD组细胞增殖能力小于NC、CON组;细胞凋亡率也明显增加,KD组早期凋亡为(17.48 ±0.70)％,而NC、CON组的早期细胞凋亡率为(7.34±0.70)％和(4.86±0.25)％ (P ＜0.01);KD组细胞周期阻滞在G1/G0和S期(P＜0.05);Western blot结果显示Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.01),Bax蛋白表达增高(P＜0.01);KD组体外克隆形成数小于NC、CON组(P＜0.01);KD组裸鼠移植瘤的生长速度缓慢,质量和体积均小于NC、CON组(P＜0.0l).结论 siRNA PTP4A1在体内外均能有效抑制舌鳞癌TCA8113细胞的恶性生物学行为,PTP4A1基因可能与舌鳞癌的发生、发展相关.     

沉默 Fas和 PKCδ表达对游离脂肪酸诱导的 HUVEC 凋亡的影响

目的：探讨Fas与PKCδ在游离脂肪酸（ FFA）诱导的人脐静脉内皮细胞（ HUVEC）凋亡中的作用。方法：①取对数生长期HUVEC,分为空白组,对照组,50、75、100μmol／L FFA组及相应FFA＋PKCδsiRNA转染组,采用比色法检测细胞增殖情况,Western blot检测p-PKCδ蛋白的表达。②将HUVEC分为空白组,对照组,FFA组（100μmol／L FFA处理）和FFA＋PKCδsiRNA组,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。③取100μmol／L FFA干预后的HUVEC分别转染无关序列siRNA和Fas siRNA,以未转染细胞作空白对照,Western blot法检测p-PKCδ和Fas蛋白的表达。结果：①各组细胞增殖水平差异有统计学意义（F＝20．863,P＜0．001）,FFA可抑制细胞增殖（P＜0．05）,而PKCδ siRNA能减弱FFA对细胞增殖的抑制（P＜0．05）。各组细胞p-PKCδ蛋白的表达差异有统计学意义（F＝229．072,P＜0．001）,FFA能提高p-PKCδ蛋白的表达水平（P＜0．05）,而PKCδ siRNA可抑制FFA引起p-PKCδ蛋白的表达（P＜0．05）。②各组细胞凋亡率差异有统计学意义（F＝86．973,P＜0．001）,FFA可增加细胞凋亡（P＜0．05）,而PKCδ siR-NA能降低FFA所致的凋亡（P＜0．05）。③各组细胞Fas蛋白表达差异有统计学意义（F＝122．162,P＜0．001）,Fas siRNA可减低HUVECFas蛋白的表达（P＜0．05）。结论：FFA诱导的HUVEC凋亡可能由PKCδ涉及的Fas通路介导。     

siRNA沉默CAPN1基因对人骨肉瘤细胞MG-63增殖、侵袭及Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨小干扰RNA（siRNA）沉默钙蛋白酶1（CAPN1）基因对人骨肉瘤细胞MG-63增殖、侵袭及B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响。方法将siRNA序列、CAPN1siRNA序列分别转染MG-63细胞,分为CAPN1siRNA组与siRNA组,以未转染的细胞作为对照组。采用qRT-PCR法检测细胞中CAPN1mRNA表达水平;采用四唑盐比色法检测细胞增殖率;采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭率;采用Westernblot法检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果CAPN1siRNA组细胞CAPN1mRNA表达水平、在培养12、24、36和48h的增殖率、侵袭率、Bcl-2蛋白表达水平均低于对照组和siRNA组,而Bax蛋白表达水平高于对照组和siRNA组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;对照组和siRNA组细胞上述指标比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论siRNA沉默CAPN1表达抑制了MG-63细胞增殖和侵袭能力,并促进其凋亡,其机制可能与调控Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

SIRT1基因沉默对鼻咽癌CNE-1细胞放射敏感性的影响

目的 探究SIRT1基因沉默对人鼻咽癌细胞CNE-1放射敏感性的影响,为鼻咽癌临床治疗提供新的思路.方法 通过Western blot检测鼻咽癌组织及鼻咽癌细胞中SIRT1蛋白的表达情况.通过脂质体转染SIRT1 siRNA至CNE-1细胞;利用CCK-8法和流式细胞术检测不同剂量(0、2、4、6、8 Gy)的X射线放射处理对CNE-1细胞增殖和凋亡的影响.采用Western blot检测SIRT1沉默后,X射线放射对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Cleaved-Caspase3表达的影响.结果 鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞中SIRT1蛋白的表达量高于癌旁组织及鼻咽正常上皮细胞NP69中的表达量(P<0.05).靶向SIRT1基因的siRNA转染能特异性的抑制细胞中SIRT1的表达(P<0.05);4、6、8 Gy剂量的X射线放射处理能降低SIRT1 siRNA组CNE-1细胞增殖率,并增加凋亡率(P<0.01).用X射线照射SIRT1基因沉默的CNE-1细胞,能增加促凋亡蛋白Bax和Cleaved-Caspase3表达量,降低抑凋亡蛋白Bcl-2的表达量(P<0.05).结论 SIRT1基因沉默可能通过抑制CNE-1细胞增殖,并诱导细胞发生凋亡,从而增强CNE-1细胞对放疗的敏感性,SIRT1基因有望成为鼻咽癌治疗的新靶点.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

87株幽门螺旋杆菌VacA等位基因的分析

目的以研究方法LiPA（Line Probe Assay）分析VacA等位基因的表达,了解幽门螺旋杆菌致病机理的理解。方法从三个不同城市87位进行胃镜检查患者的胃粘膜中培养出幽门螺旋杆菌,提取DNA,用LiPA方法分析VacA等位基因。结果（1）87位患者以sic（88．5％）和m2a（63．2％）分布为主,未发现s1b和s2;（2）混合菌株感染率为41．4％,远远高于西方国家,其中上海的混合感染率最高（62．5％）,与北京（41．0％）和南宁（20．8％）相比具有显著性差异,P〈0．01;（3）北京、海、南京三个不同城市s1、m等位基因亚型分布率存在差异;（4）溃疡病和非溃疡病患者m1和m2的分布率没有显著性差异。结论我国幽门螺旋杆菌多重菌株感染率较高,不同的m基因型与消化性溃疡的发生无显著性相关。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

扩张兔皮肤超微结构的变化

目的：动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法：选用2--3kg新西兰大白兔64只，分为2大组，快速扩张组和常规扩张组，每组32只，每大组再分为4组，为扩张完成后即时、1周、12周、24周组。每组8只，其中4只为实验组，另4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果：表皮扩张后经历--由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生，功能由静止转向活跃，胶原纤维碎裂成片，弹力纤维部分断裂，炎症细胞浸润；扩张后1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复。显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后12周、24周，成纤维细胞趋于稳定、形态狭长，部分胶原排列紊乱，部分有似癜痕样改变。结论：扩张刺激可致兔皮肤创伤。扩张后真皮不可完全修复。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用

目的观察芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用。方法30只Long-Evans大鼠用动脉结扎法造成视网膜缺血模型,其中治疗组20只腹腔注射芹黄素,对照组10只注射溶媒二甲基亚酚。用视觉电生理仪检查视网膜功能恢复情况。结果芹黄素治疗组视网膜功能恢复明显好于对照组(P<0.05)。结论芹黄素能促进大鼠缺血视网膜的功能恢复。      

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

人体寄生虫学多媒体教学效果的初步评估

通过分析多媒体辅助教学方法与传统教学方法在人体寄生虫学教学中的应用,指出多媒体辅助教学对于提高教学质量效果显著,受到了绝大部分同学的赞同和欢迎.     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。