血清丙肝病毒RNA二种提取方法的比较

２４例抗－ＨＣＶ阳性的血清标本，同时以硫氰胍半字符热酚变性方法和蛋白酶ＫＩ肖化法裂解提取丙肝病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ），并应用反转录半字符多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和套式多聚酶链反应（Ｎｅｓｔ－ＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ。结果表明，硫氰胍半字符热酚法明显优于蛋白酶Ｋ消化法。前者处理标本的阳性检出率为５８．３％，后者处理标本的阳性检出率为３３．３％（Ｐ＜０．０５）；前者操作步骤简便，在试剂的保存等方面优于后者，故前者更适于临床ＨＣＶＲＮＡ的检测     

应用RT-PCR快速检测病毒性心肌炎患者血清中CVB-RNA

目的：探讨ＲＴ－ＰＣＲ在病毒性心肌炎中的诊断价值。方法：选用柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＶＢ）保守区５′－非编码区的组特异性引物,对４２例临床拟诊为病毒性心肌炎的患者血清行ＲＴ－ＰＣＲ,以检测ＣＶＢ－ＲＮＡ,同时采用间接ＥＬＩＳＡ检测血清中ＣＶＢ－ＩｇＭ。结果：心肌炎患者血清中ＣＶＢ－ＲＮＡ的检出率为６６７％（２８／４２）,而ＩｇＭ的检出率为５２４％（２２／４２）。结论：ＲＴ－ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ都是特异、敏感的诊断方法,并且ＲＴ－ＰＣＲ比ＥＬＩＳＡ敏感（Ｐ＜００５）     

广西原发性肝癌与丙型肝炎病毒感染关系探讨

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）法检测３０例原发性肝癌（ＰＨＣ）患者和３０例非肝病患者血清中的丙型肝炎病毒（Ｈｃｖ）ＲＮＡ和乙型肝炎病毒标志物（ＨＢＶ－Ｍ）。结果：ＰＨＣ组Ｈｃｖ－ＲＮＡ（＋）为２７％明显高于对照组（７％）（Ｐ＜０．０５），而ＰＨＣ组ＨＢｖＭ（＋）为８７％，明显高于对照组（２３％）（Ｐ＜０．０１）；ＰＨＣ组ＨＢＶ－Ｍ（＋）和ＨＢＶＭ（一）时ＨＣＶ－ＲＮＡ结果无差异（Ｐ＞０．０５）．提示广西ＰＨＣ发病与ＨＣＶ感染有一定关系。     

肝细胞癌和癌旁肝组织中HCVRNA正,负链的检测

用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了４２例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者肝癌及癌旁肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的正，负链，结果显示，肝组织中ＨＣＶＲＮＡ正，负链的检出率分别为５４．８％和３５．７％，ＨＣＶＲＮＡ的正链和负链在肝癌和癌旁肝组织中，同时阳性的患者分别占４５．２％和３１．０％，血清ＨＣＶＲＮＡ和抗ＨＣＶ阴性埂肝组织中ＨＣＶＲＮＡ的检出率仍有５１．３％，肝组织ＨＣＶＲＮＡ与乙型肝炎     

肝细胞癌患者GB病毒C感染状况及其相关性研究

为了解ＧＢ病毒Ｃ（ＧＢＶ－Ｃ）感染与肝细胞癌（下称肝癌）之间可能的相关性,采用一步法逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对１２４ 例肝癌患者进行了ＧＢＶ－ＣＲＮＡ 检测。结果：ＧＢＶ－ＣＲＮＡ 总检出率高达２６．６％ （３３／１２４）,３３ 例ＧＢＶ－ＣＲＮＡ 检出阳性者中,９０．９％ 合并有ＨＢＶ、ＨＣＶ感染;３３ 例非Ｂ非Ｃ型肝癌中,ＧＢＶ－ＣＲＮＡ检出率为９．１％ （３／３３）。３３ 例ＧＢＶ－Ｃ感染阳性肝癌患者中,９０．０％ （３０／３３）有既往输血史,高于ＧＢＶ－Ｃ感染阴性组（４８／９１）。上述结果提示,我国肝癌患者中ＧＢＶ－Ｃ感染的检出率高于美、欧、日等地同类患者的检出率,其在肝细胞癌及输血后肝炎发生中的病因学意义值得注意。     

PCR法检测尿毒症病人血清HCV—RNA结果分析

应用ＰＣＲ技术检测尿毒症病人血清ＨＣＶ—ＲＮＡ１６５例，结果显示：ＥＩＡ检测病人血清抗ＨＣＶ阳性率为６３．０％；抗ＨＣＶ阳性病人ＨＣＶ—ＲＮＡＰＣＲ检出阳性率为６５．３％；抗ＨＣＶ阴性病人检出率为９．８％；ＰＣＲ总阳性检出率为７５．１％。提示：ＣＲＦ病人抗ＨＣＶ和ＨＣＶ—ＲＮＡ检出率与输血呈正相关。ＣＲＦ病人接受透析与输血次数愈多，感染ＨＣＶ的机会就愈大。在血清中单独出现抗ＨＣＶ或同时检出抗ＨＣＶ和ＨＣＶ—ＲＮＡ者，表明与早期输血感染ＨＣＶ者已产生抗ＨＣＶ，ＨＣＶ—ＲＮＡ阳性与近期输血再次感染者关系极为密切。用ＰＣＲ法直接检测病毒毒粒要早于ＥＩＡ检出抗ＨＣＶ的阳性结果，有利于早期诊断。     

应用RT—PCR检测丙肝病毒246例分析

用ＲＴ－ＰＣＲ（逆转录聚合酶链反应）扩增丙型肝炎病毒５’端非编码（５’ＮＣＲ）序列，２４６例肝炎患者中ＨＣＶ ＲＮＡ（丙型肝炎病毒核糖核酸）阳性者４５例，阳性率１８．３％（４５／２４６），凡阳性者用酶联免疫法测定－ＨＣＶ（抗丙型肝炎病毒抗体），其中２４例测到抗－ＨＣＶ，阳性重叠率５３．３％（２４／４５），和ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＣＶ ＲＮＡ，能在抗－ＨＣＶ转阳以前检出ＨＣＶ ＲＮＡ，更早地确诊丙型肝     

肝细胞癌患者GB病毒C感染状况及其相关性研究

为了解ＧＢ病毒Ｃ（ＧＢＶ－Ｃ）感染与肝细胞癌（下称肝癌）之间可能的相关性,采用一步法逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对１２４例肝癌患者进行了ＧＢＶ－Ｃ ＲＮＡ检测。结果：ＧＢＶ－Ｃ ＲＮＡ总检出率高达２６．６％（３３／１２４）,３３例ＧＢＶ－Ｃ ＲＮＡ检出阳性者中,９０．９％合并有ＨＢＶ、ＨＣＶ感染;３３例非Ｂ非Ｃ型肝癌中,ＧＢＶ－Ｃ ＲＮＡ检出率为９．１％（３／３３）。３３例ＧＢＶ－Ｃ感染阳性     

应用RT－PCR检测丙肝病毒246例分析

用ＲＴ－ＰＣＲ（逆转录聚合酶链反应）扩增丙型肝炎病毒５′端非编码（５′ＮＣＲ）序列，２４６例肝炎患者中ＨＣＶＲＮＡ（丙型肝炎病毒核糖核酸）阳性者４５例，阳性率１８．３％（４５／２４６），凡阳性者用酶联免疫法测抗－ＨＣＶ（抗丙型肝炎病毒抗体），其中２４例测到抗－ＨＣＶ，阳性重叠率５３．３％（２４／４５），用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＣＶＲＮＡ，能在抗－ＨＣＶ转阳以前检出ＨＣＶＲＮＡ，更早地确诊丙型肝炎。     

用套式RT-PCR法检测肝细胞癌中丙型肝炎病毒基因型

目的　检测人肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型。方法　用ＲＴＰＣＲ法常规检测ＨＣＣ组织和部分患者血清ＨＣＶ,再以巢式ＲＴＰＣＲ法对ＨＣＶ阳性标本中５种ＨＣＶ基因型进行鉴别。对多数标本中ＨＢｓＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ也进行了免疫组化和原位杂交检测。结果　ＨＣＣ组织中ＨＣＶ阳性率为５０％（３９／７８）,与ＨＢＶ者（６４．４％）差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）,两者重叠感染率３４％（２０／５９）。在１０例血清ＨＣＶ阴性ＨＣＣ患者中,３例ＨＣＣ冰冻组织检出ＨＣＶＲＮＡ。在ＨＣＣ组织中共检出３种ＨＣＶ基因型,其中２ａ、１ｂ、３ａ和混合型分别为１７例（４３．６％）、９例（２３．１％）、４例（１０．３％）和２例（５．１％）,各基因型间差异有极显著性意义（Ｐ＜０．０１）,但２ａ型与１ｂ型间差异无显著性（Ｐ＞０．０５）,２ａ型与ＨＢＶ的重叠感染明显较其他ＨＣＶ基因型者常见（Ｐ＜０．０５）。结论　２ａ型ＨＣＶ是ＨＣＣ组织中最常见的基因型并易与ＨＢＶ重叠感染率,ＨＣＣ患者血清ＨＣＶ检测不一定能准确反映ＨＣＣ组织中的ＨＣＶ感染率,其所示基因型也有所不同。     

定量PCR与EIA法检测血液透析患者HCV比较

目的 探讨血液透析患丙型肝炎病毒（HCV）的检测方法。方法 对79例尿毒症长期血液透析患,采用荧光定量PCR法测定血清HCV-RNA水平,及第二代酶免疫试验（EIA）检测丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）。结果 血液透析患抗-HCV阳性率22.8%(18/79),荧光定量PCR法HCV-RNA检出率39.2%(31/79）。在抗HCV阴性的患中,HCV-RNA的检出率为42.6%(26/61)。两种方法检测结果的符合率为50.6%(40/79)。结论 荧光定量PCR技术可弥补EIA检测的不足,在抗-HCV阴性的血液透析患中检测HCVRNA具有重要意义。     

HCV-cAg与HCV-Ab、HCV-RNA及肝功能之间的关系探讨

目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原（hepatitis C virus core antigen,HCV-cAg）与丙型肝炎病毒RNA（hepatitis C virus RNA,HCV-RNA）关系以及丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酰转肽酶（GGT）水平与HCV-RNA病毒载量之间的相关性。方法选取78例HCV抗体检测阳性的丙型肝炎或疑似丙型肝炎病人作为观察组,另选取同期健康体检者20名作为对照组。采用ELISA法和荧光定量PCR法等对2组血清样本进行HCV-cAg、HCV-RNA和ALT、AST、GGT水平测定,并比较各参数之间的关系。结果观察组HCV-cAg阳性检出率为41.0%（32/78）,HCV-RNA阳性检出率为53.8%（42/78）,差异有统计学意义（P < 0.01）,且二者之间具有较好一致性（κ=0.747）。观察组ALT、AST和GGT水平均明显高于对照组（P < 0.01）,但与HCV-RNA病毒载量均无明显相关性（P>0.05）。结论HCV-cAg和HCV-RNA在检测丙型肝炎方面有较好一致性和相关性,可为丙型肝炎的临床诊断提供有价值的依据。     

套式PCR法检测慢性丙肝患者PBMC及血清中HCV-RNA的意义

目的 探讨慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）内HCV－RNA与血清中HCV－RNA的相互关系及其在慢性丙肝发病机制中的作用。方法 用套式PCR（RT－nested-PCR)对124例抗－HCV（＋）慢性丙肝患者的PBMC及血清中HCV－RNA进行检测。结果 124例抗－HCV（＋）慢性丙肝患者中,PBMC及血清中HCV－RNA阳性率分别为53．23％（66／124）和64．52％（80／124）,经χ^2检验,两者差异无显著性（P＞0．05）。各慢肝组PBMC与血清HCV－RNA阳性率相比,差异均无显著性（P＞0．05）。结论 HCV可隐匿于患者PBMC中;PBMC中HCV－RNA与血清中HCV－RNA似有一致性倾向。PBMC中HCV－RNA检测不仅是对常规血清检测的重要补充,而且是HCV肝外感染的直接证据,是导致丙型病毒性肝炎患者易于慢性化的重要原因之一。     

丙型肝炎患者外周血单个核细胞中HCV-RNA含量检测的临床意义

目的:了解丙型肝炎(丙肝)患者外周血单个核细胞(PBMC)中丙肝病毒核酸(HCV-RNA)的存在情况并探讨其临床意义。方法:应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,对65例丙肝患者的血清和PBMC中HCV-RNA进行检测。结果:65例丙肝患者血清和PBMC中HCV-RNA阳性分别为41例(63.1%)和35例(53.8%),其中34例急性丙肝患者血清、PBMC中HCV-RNA阳性分别为21例(61.8%)、13例(38.2%),31例慢性丙肝患者血清、PBMC中HCV-RNA阳性分别为20例(64.5%)、22例(71.0%),慢性丙肝患者PBMC中HCV-RNA检出率与急性相比,差异有统计学意义(2χ=5.74,P<0.05)。3例(2例慢性、1例急性)丙肝患者PBMC中HCV-RNA阳性,但血清HCV-RNA阴性。9例(全为急性)丙肝患者PBMC中HCV-RNA阴性,但血清HCV-RNA阳性。32例(12例急性、20例慢性)丙肝患者血清和PBMC中HCV-RNA均阳性,且PBMC中HCV-RNA的含量均低于血清,两者含量呈正相关。结论:PBMC为HCV肝外贮存场所,其HCV含量依赖血清中HCV的含量;PBMC中HCV在丙肝患者的病情慢性化过程中可能起一定作用;实验室可以通过浓聚血液中PBMC的浓度来提高其HCV-RNA的检出率,故临床医生在对丙肝患者进行血清HCV-RNA定量检测的同时开展PBMC中HCV-RNA检测可以减少漏诊,可作为慢性丙肝患者的选择治疗及预后判断的重要指标。     

Hepatitis G viral RNA co-infection in plasma and peripheral blood mononuclear cells in patients with hepatitis C

Hepatitis G virus( HGV) is identified as a mem-ber of Flaviviridae family and is a single chain( )RNA virus.The transmission route of HGV is sameas that of hepatitis C virus( HCV) ,mainly thoughthe approaches of blood product use and intravenousinjection.Thus,HCV- HGV co- infection becomespossible.There has been domestic report about de-tecting HGV RNA in serum of hepatitis C,but notdetecting it in peripheral blood mononuclear cells( PBMCs) simultaneously.Therefore,some patients…     

荧光定量巢式逆转录PCR(FQ-nRT-PCR)在检测HCV-RNA中的意义

目的:采用荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)检测丙型肝炎患者外周血清HCV-RNA,探讨HCV-RNA的临床应用价值。方法:用FQ-nRT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测192例HCV感染患者血清,比较HCV-RNA和抗-HCV的临床意义。结果:192例丙型肝炎患者血清标本中,HCV-RNA检出率为75.53%(145/192),抗-HCV检出率为91.66%(176/192)。急性丙型肝炎患者HCV-RNA定量均值达5.21×106拷贝/ml,慢性肝炎次之,肝硬化相对偏低,为5.14×103拷贝/ml。结论:192例丙型肝炎患者抗-HCV检出率高于HCV-RNA检出率,但HCV-RNA对丙型肝炎的早期诊断具有灵敏度高、定量准、假阳性率低等优点,此外在病毒复制水平及抗病毒治疗的疗效评估方面具有重要的临床价值。     

慢性丙型肝炎患者采用α2b干扰素治疗前后PBMC内HCV-RNA的变化

目的:探讨α 2b干扰素对慢性丙型肝炎(丙肝)患者的治疗效果.方法:采用国产α 2b干扰素(300 MU/d)治疗,3个月为一疗程,共2个疗程,并设常规治疗组(Vit C、门冬氨酸)为对照.于疗程结束后分别检测患者PBMC内HCV-RNA和血清内HCV-RNA、抗-HCV.结果:α 2b干扰素治疗组2个疗程后慢性丙肝患者PBMC、血清内HCV-RNA和抗-HCV转阴率分别为42.31%、57.69%、65.38%，常规治疗组慢性丙肝患者PBMC、血清内HCV-RNA和抗-HCV转阴率分别为13.64%、22.73%、27.27%.两组差异均有显著性(P＜0.05～P＜0.01).结论:α 2b干扰素对血清及PBMC内HCV-RNA具有肯定的治疗作用，其疗效优于常规治疗组，但对PBMC内HCV-RNA的疗效似有比抗血清内HCV-RNA和抗-HCV疗效弱的趋势.     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞HCV-RNA检测

目的 :了解丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞 (PBMC)中HCV RNA存在情况及其意义。方法 :采用套式PCR检测 38例急性丙型肝炎和 36例慢性丙型肝炎患者血清和外周血PBMC中HCV RNA。结果 :74例丙型肝炎患者血清HCV RNA阳性 6 8例 ,PBMC阳性 44例 ;急性丙型肝炎患者PBMC中HCV RNA阳性 15例 (39.5 % ) ,慢性丙型肝炎患者PBMC中阳性 2 9例 (80 .6 % )。慢性丙型肝炎患者PBMC中HCV RNA检出率显著高于急性丙型肝炎患者 (P <0 .0 1)。 3例血清HCV RNA阴性 ,而PBMC中HCV RNA均阳性 ;8例患者血清抗 HCV阴性 ,而血清HCV RNA均阳性。结论 :PBMC可能为HCV肝外贮存和复制场所 ,PBMC中的HCV感染在丙型肝炎慢性化和慢性肝损害中可能起一定作用 ;血清HCV RNA检测有助于抗 HCV阴性丙型肝炎的诊断。     

慢性病毒性肝炎患者外周血单个核细胞TGF-β1和IFN-γ mRNA的表达与肝纤维化的关系

目的:探讨慢性病毒性肝炎外周血单个核细胞(PBMC)中转化生长因子β_1(TGF-β_1)和干扰素γ(IFN-γ_1)mRNAR的表达与肝纤维化的关系。方法:用RT-PCR加Dotblot法检测慢性病毒性肝炎PBMC中TGF-β_1 mRNA和IFN-γ mRNA,用放免法测定肝纤维化血清指标Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)、Ⅲ型前胶原(PC Ⅲ)、层粘蛋白(LN)和透明质酸(HA)。结果:慢性病毒性肝炎PBMC中TGF-β_1 mRNA和IFN-γ mRNA均高于正常(P<0.05)。将患者按肝纤维化血清指标测定值分为增高>2项和增高≤2项两组。增高≤2项患者组PBMC中TGF-β_1 mRNA/IFN-γmRNA比值(T/I)(1.32±0.46)与正常组(1.34±0.42)差异无显著性(P>0.10),增高>2项患者组T/I比值(1.77±0.76)则高于正常组和增高≤2项患者组(P<0.05)。结论:慢性病毒性肝炎肝纤维化患者PBMC中TGF-β_1 mRNA表达增高的同时,IFN-γ mRNA表达水平相对较低,表明促进/抑制肝纤维化因子表达失调,可促进肝纤维化发生。     

Detection of Replicative Form of HCV RNA in Peripheral Blood Leukocytes and Its Clinical Significance

ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＲｅｐｌｉｃａｔｉｖｅＦｏｒｍｏｆＨＣＶＲＮＡｉｎＰｅｒｉｐｈｅｒａｌＢｌｏｏｄＬｅｕｋｏｃｙｔｅｓａｎｄＩｔｓＣｌｉｎｉｃａｌＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅＨＥＹｏｎｇ－ｗｅｎ（贺永文）；ＦｅｒｅｎｃｉｋＳ；ＬＵＯＤｕａｎ－ｄｅ（罗...