单核细胞增生李斯特菌L型对小鼠脾脏树突状细胞免疫调节作用影响的研究

  目的  研究单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)感染对树突状细胞(dendritic cell, DC)免疫功能的影响,探讨细菌型(WT)和L型(L-form)LM对DC的免疫活化能力差异。  方法  将C57BL/6小鼠随机分为对照组、WT组、L-form组,3组小鼠分别经尾静脉感染PBS液、细菌型LM和L型LM,电镜观察脾脏DC超微结构特征;流式细胞术检测小鼠脾脏DC的数量、共刺激分子表达、胞内细胞因子分泌、脾脏T细胞亚群及其活化程度。  结果  透射电镜可观察到对照组小鼠脾脏DC表面有大量丝状伪足,胞浆均匀,细胞核大而偏于一侧;吞噬细菌后,表面丝状伪足减少,胞质内空泡增多;小鼠感染后第1天脾脏中DC绝对值无明显升高或降低(P>0.05),但成熟表型特征性分子表达上调(P < 0.05),L-form感染组DC表面CD80和CD86分子均高于WT组(P < 0.05);小鼠感染LM后TNF-α+DC比例明显升高,L-form感染组分泌TNF-α的DC高于WT组(P < 0.05);感染LM后第7天,3组小鼠脾脏CD4+T细胞和CD8+T细胞在淋巴细胞中所占比例差异均无统计学意义(P>0.05),但L-form组CD69+ T细胞比例高于WT组(P < 0.05)。  结论  L型LM可介导相对高水平的TNF-α,促进DC成熟以增强其抗原递呈的能力。     

幽门螺杆菌感染对同型半胱氨酸及血脂的影响探讨

目的探讨幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,HP）感染对同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）及血脂的影响。方法选取102例住院病人,根据有无HP感染情况将其分为HP感染组和HP未感染组,分别测定2组Hcy水平、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的水平,分析HP感染对Hcy及血脂水平的影响以及相关性。结果HP感染组高同型半胱氨酸血症（HHcy）检出率为19.61%（10/51）,高于HP未感染组的5.88%（3/51）（P < 0.05）;HP感染组的TC、HDL-C、LDL-C异常检测率均高于HP未感染组（P < 0.05~P < 0.01）。HP感染组病人血清TC、TG的水平均高于HP未感染组,但差异无统计学意义（P>0.05）;HP感染组的Hcy和LDL-C水平均高于HP未感染组（P < 0.05）,而HDL-C水平低于HP未感染组（P < 0.05）。HP抗体水平与病人体内的Hcy、TC、LDL-C水平呈正相关关系（r=0.248、0.243和0.272,P < 0.05）。结论HP感染与HHcy的发生及血脂水平的异常密切相关,并能增加心血管疾病的风险。     

结核分枝杆菌感染对THP-1细胞CD14表达的影响

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染THP-1细胞后对细胞表面白细胞分化抗原14(CD14)表达的影响.方法:Mtb以10:1感染佛波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,建立Mtb感染THP-1细胞的模型.采用流式细胞术检测THP-1细胞、PMA分化的THP-1细胞及Mtb感染THP-1细胞CD14的表达.结果:THP-1细胞和PMA分化的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率分别为5.5%和21.6%,对Mtb的吞噬率分别为7.7%和93.0%;Mtb感染的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率为27.5%.结论:PMA分化后的THP-1细胞表面CD14的表达增加,Mtb感染后CD14的表达进一步增加,对Mtb的吞噬率增加.     

去甲泽拉木醛通过抑制AKT/CREB信号通路抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨去甲泽拉木醛抑制非小细胞肺癌细胞A549和H1299增殖、迁移和侵袭并诱导细胞凋亡的作用机制。方法 镜下初步观察不同浓度的去甲泽拉木醛（0、1、3、10、30μmol/L）对A549和H1299细胞形态及细胞数量的影响。通过克隆形成、CCK-8、细胞划痕、Transwell和流式细胞实验检测去甲泽拉木醛对A549和H1299细胞增殖、细胞活力、细胞迁移和侵袭、细胞凋亡的影响以及SC79处理后对细胞凋亡的影响。通过Western blotting检测不同浓度的去甲泽拉木醛对A549和H1299细胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Bax、Bcl-2、cleaved-caspase 3表达和AKT/CREB磷酸化水平变化的影响,SC79处理后对凋亡蛋白表达的影响。结果 镜下观察药物作用后,细胞形态由饱满变为细长,细胞间隙增宽。CCK-8实验和克隆形成实验结果显示去甲泽拉木醛能抑制A549和H1299细胞活力并且抑制细胞的增殖（P<0.05）。流式细胞术结果表明,去甲泽拉木醛诱导A549和H1299细胞的凋亡,而SC79处理后逆转了促凋亡作用（P&...     

沙门菌外膜囊泡对小鼠髓源树突状细胞的免疫调控作用

  目的   研究鼠伤寒沙门菌（Salmonellatyphimurium, ST）外膜囊泡（outer membrane vesicles, OMVs）对树突状细胞（dendritic cells, DC）超微结构及免疫功能的影响。   方法   无菌取小鼠骨髓细胞,体外经重组鼠源粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子（recombinant mouse granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, rm GM-CSF）和重组鼠源白细胞介素-4（recombinant mouse interleukin-4, rm IL-4）联合诱导扩增出DC,倒置相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞术鉴定表型;超速离心分离获取ST-OMVs,CCK-8法测其对DC存活情况的影响,确定OMVs刺激浓度;透射电镜观察细胞负载OMVs后超微结构特征;流式细胞术检测DC细胞因子分泌、表面分子表达、吞噬能力。   结果   体外诱导和扩增的DC具有典型的细胞形态,纯度达85%以上,透射电镜可见DC表面有大量丝状伪足;OMVs负载后,可见DC表面树突状结构减少,胞浆内有大量囊泡状结构,线粒体增多,肿胀以及细胞凋亡;OMVs 5 μg/mL和10 μg/mL 处理后,DC吞噬能力下降（P<0.05）,成熟表型特征性分子表达上调（P<0.05）,肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）和白细胞介素-1β（interleukin-1β, IL-1β）表达升高（P<0.05）。   结论   ST-OMVs可诱导DC分泌TNF-α和IL-1β,具有促进DC成熟和抗原提呈的能力。      

Th1型和Th2型细胞因子对人中性粒细胞吞噬结核杆菌活性的影响

Objective To establish a flowcytometry method for detecting phagocysis of Mycobacterium tuberculosis(Mth) by the human peripheral blood neutrophils( PMNs), and to explore the effects of Thl and Th2 cytokine on phagocytotic activity of PMNs. Methods By using acid-fast staining the phagocytosis of Mtb by human neutrophil was observed by microscopy, and the phagocytosis of FTTC labeled Mtb by human neutrophils was detected under confocal microscope. The whole fresh peripheral blood of healthy adults was incubated with FTTC labeled Mtb and the phagocytosis were measured by flow cytometry. The altered phagocytosis of FTTC-Mtb by neutrophils pretreated with IL-2, IFN-γ, GM-CSF or IL-4 were measured. Results Human peripheral blood neutrophils activity of Mtb phagocytosis was observed by acid-fast staining and confocal microscope. The percentage of phagocytosis of Mtb was dependent on the time of incubation with Mtb. The percentages were 47% at 5 min and reached plateau about 66% ～72% at 15 min to 20 min.Pretreatment with different concentrations of IL-2 or IFN-γincreased the phagocytosis of Mtb by 76.7% and 75.2%, respectively; but pretreatment with IL-4 decreased the phagocytosis by 31.7%. Conclusion IL-2and IFN-γcan increase phagocytosis of Mth by neutrophils; while IL-4 can reduced neutrophil activity of phagocytosis of Mtb by human neutrophils, and demonstrate that Th1/Th2 type cytokins involve in regulating the acitvities of neutrophils anti-Mtb infection.     

Th1型和Th2型细胞因子对人中性粒细胞吞噬结核杆菌活性的影响

Objective To establish a flowcytometry method for detecting phagocysis of Mycobacterium tuberculosis(Mth) by the human peripheral blood neutrophils( PMNs), and to explore the effects of Thl and Th2 cytokine on phagocytotic activity of PMNs. Methods By using acid-fast staining the phagocytosis of Mtb by human neutrophil was observed by microscopy, and the phagocytosis of FTTC labeled Mtb by human neutrophils was detected under confocal microscope. The whole fresh peripheral blood of healthy adults was incubated with FTTC labeled Mtb and the phagocytosis were measured by flow cytometry. The altered phagocytosis of FTTC-Mtb by neutrophils pretreated with IL-2, IFN-γ, GM-CSF or IL-4 were measured. Results Human peripheral blood neutrophils activity of Mtb phagocytosis was observed by acid-fast staining and confocal microscope. The percentage of phagocytosis of Mtb was dependent on the time of incubation with Mtb. The percentages were 47% at 5 min and reached plateau about 66% ～72% at 15 min to 20 min.Pretreatment with different concentrations of IL-2 or IFN-γincreased the phagocytosis of Mtb by 76.7% and 75.2%, respectively; but pretreatment with IL-4 decreased the phagocytosis by 31.7%. Conclusion IL-2and IFN-γcan increase phagocytosis of Mth by neutrophils; while IL-4 can reduced neutrophil activity of phagocytosis of Mtb by human neutrophils, and demonstrate that Th1/Th2 type cytokins involve in regulating the acitvities of neutrophils anti-Mtb infection.     

空腹血糖和糖化血红蛋白联合检测在健康体检中的应用研究

目的:探讨空腹血糖(FPG)和糖化血红蛋白(HbA1c)水平联合检测在健康体检中的应用价值。方法:选择263名健康体检者作为研究对象, 分别检测其FPG和HbA1c水平, 对两者进行相关性分析。结果:263例中HbA1c<5.5%者139例, 5.5%~6.5%者88例, >6.5%者36例。HbA1c>6.5%体检者FPG均明显高于HbA1c<5.5%和5.5%~6.5者(P<0.01)。相关分析显示, 263名研究对象的HbA1c水平与FPG之间呈正相关关系(P<0.01)。结论:FPG和HbA1c联合检测在健康体检中对糖尿病的筛查有重要价值, 适宜在实际工作中推广应用。     

IL-15对人γδT细胞杀伤结核杆菌感染THP-1细胞的影响

目的建立结核杆菌(Mtb)感染单核细胞THP-1细胞系模型;用流式细胞术检测人γδT细胞对Mtb感染THP-1细胞的细胞毒活性;并观察IL-15对人γδT细胞杀伤Mtb感染THP-1细胞的细胞毒活性的影响。方法 Mtb以10∶1的比例感染佛波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,建立Mtb感染细胞模型。人外周血单个核细胞用Mtb耐热性低分子多肽类抗原刺激优势扩增γδT细胞,作为效应细胞用于细胞毒活性实验。用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记Mtb感染THP-1细胞,作为靶细胞。效应细胞和靶细胞以不同比例孵育4 h,用碘化丙啶(PI)染色后在流式细胞仪上检测,CSFE和PI双阳性细胞为被杀伤靶细胞。IL-15作用于γδT细胞24 h后,再检测γδT细胞对Mtb感染THP-1细胞的细胞毒活性。结果人γδT细胞与Mtb感染THP-1细胞以1∶1至50∶1的比例作用4 h后,人γδT细胞对结核杆菌感染的THP-1细胞的细胞毒活性从22.5%增加至80.7%;而γδT细胞与未感染Mtb的THP-1细胞的细胞毒活性为16.1%至47.2%。IL-15作用γδT细胞后的细胞毒活性(64.06%)与对照组(46.81%)相比明显增加(P0.05)。结论人γδT细胞对Mtb感染THP-1细胞的杀伤活性明显高于对未感染Mtb的THP-1细胞的作用,杀伤活性随效靶比的增加而增加。IL-15可以增强人γδT细胞对Mtb感染巨噬细胞的细胞毒活性。     

流式细胞术检测单核巨噬细胞吞噬荧光素标记结核分枝杆菌的方法学探讨

目的：建立流式细胞术检测单核巨噬细胞吞噬荧光素标记结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,Mtb）的方法。方法：用不同浓度荧光素（FITC）标记Mtb,流式细胞术检测FITC对Mtb的标记率。健康人外周全血与FITC标记Mtb（FITC-Mtb）于37℃共孵育10~120 min,溶解红细胞,洗涤后加台盼蓝淬灭未吞噬的FITC-Mtb的荧光,流式细胞术检测FITC阳性单核细胞的数值,计算单核细胞对Mtb的吞噬率。FITC-Mtb与佛波醇酯（PMA）激活分化的THP-1细胞以10∶1的比例共孵育1~6 h,或以1∶1~100∶1的比例孵育1 h和2 h,用同样的方法检测吞噬率。结果：FITC（50μg/ml）与Mtb作用2 h的标记率达92%。人单核细胞对FITC-Mtb的吞噬率从10 min的34.68%增加至120 min的79.90%。THP-1细胞对FITC-Mtb的吞噬率从1 h的30%增加至6 h的81%。FITC-Mtb与THP-1细胞以100∶1比例孵育1 h,吞噬率达平台（81%）;以50∶1的比例孵育2 h,吞噬率达平台（82%）。未加台盼蓝淬灭时,单核细胞在10 min和120 min对FITC-Mtb的吞噬率与加台盼蓝淬灭相比,分别增加29%和6%;而未加台盼蓝淬灭时,THP-1细胞在1 h和6 h对FITC-Mtb的吞噬率与加台盼蓝淬灭相比分别增加1%和7%。结论：流式细胞术检测人单核巨噬细胞吞噬FITC标记Mtb是测定单核巨噬细胞对Mtb吞噬活性的简便、快速和重复性好的方法。