用原位PCR研究石蜡包埋肝组织中微量HCV RNA

为定位分析石蜡包埋肝组织中微量ＨＣＶ ＨＮＡ，改良建立了原位ＰＣＲ检测技术，并对１７例丙型肝炎相关的肝细胞癌患者癌组织和癌周肝组织石蜡包埋切片进行检测。结果显示：该技术的特异性可靠，敏感性高于原位杂交法；两种组织切片ＨＣＶ ＲＮＡ阳性率分别为４１．２％和７０．６％，阳性信号主要呈胸浆型分布；     

人肝癌组织中黄曲霉毒素和肝炎病毒基因检测分析

以肝细胞场（ＨＣＣ）患者手术切除标本为研究材料，采用高效液相色谱荧光法检测组织中的黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１），嵌套式多聚酶链反应技术检测组织中的ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。在６９．２％（１８／２６例）的ＨＣＣ患者中检出了３．６５－８９．０６ｎｇ不等的ＡＦＢ１／ｇ肝组织；ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ检出率分别为９０．５％（５７／６３例）和１２．７％（８／６３例）。其中，ＡＦＢ１和ＨＢＶＤＮＡ重叠检出率为６１．５％（１６／２６例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ重叠检出率为７．９％（５／６３例），４例ＨＣＣ患者重叠检出了ＡＦＢ１、ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ；同步检测对照组５例，无１例出现这种情况。结果表明，上述３种因素均与人类肝癌密切相关，并且可能存在协同致癌效应。     

原发性肝癌患者肝组织中HCVRNA和HCV抗原的定位

分别用原位杂交过氧化物酶与抗氧化物酶复合物法检测了７３例肝细胞癌患者肝组织切片中的丙型肝炎病毒ＲＮＡ和ＨＣＶ抗原以及乙型肝炎病毒的表面抗原和核心抗原。结果显示：ＨＣＶＲＮＡ，ＨＣＶＡｇ，ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ的检测出率分别为２６．０％，２８．８％，７５．３％和２６．０％；ＨＣＶ阳性的肝细胞多呈散在型分布，可见有ＲＮＡ，ＨＣＶＡｇ，ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ的检测率分别为２６．０％     

肝细胞癌和癌旁肝组织中HCVRNA正,负链的检测

用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了４２例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者肝癌及癌旁肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的正，负链，结果显示，肝组织中ＨＣＶＲＮＡ正，负链的检出率分别为５４．８％和３５．７％，ＨＣＶＲＮＡ的正链和负链在肝癌和癌旁肝组织中，同时阳性的患者分别占４５．２％和３１．０％，血清ＨＣＶＲＮＡ和抗ＨＣＶ阴性埂肝组织中ＨＣＶＲＮＡ的检出率仍有５１．３％，肝组织ＨＣＶＲＮＡ与乙型肝炎     

应用PCR技术研究肝细胞性肝癌组织中的HCVRNA,HDVRNA和HG …

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测３１例石蜡包埋的肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）组织中的ＨＣＶＲＮＡ、ＨＤＶＲＮＡ和ＨＧＶＲＮＡ。结果ＨＣＶＲＮＡ阳性４例，ＨＤＶＲＮＡ阳性１例，ＨＧＶＲＮＡ未检出，阳性率分别为１２．９％、３．３％和０，表明ＨＣＣ的发生民ＨＣＶ有一定相关性。     

HCC癌组织和癌旁组织中HCVRNA检测及半定量分析

ＨＣＶ相关ＨＣＣ癌组织能检出ＨＣＶＲＮＡ负链，但许多学者检测不到或对其检测方法的准确性产生怀疑。作者收集１３例ＨＣＶ相关ＨＣＣ标本，采用严格的负链检测方法和ＰＣＲ半定量方法系统地比较了ＨＣＣ癌组织和癌旁组织中ＨＣＶ总ＲＮＡ和负链的检出情况及其数量关系。ＨＣＣ癌组织和癌旁组织中，ＨＣＶＲＮＡ负链检出率分别为３０．８％（４／１３）和６９．２％（９／１３），平均滴度分别为３．５和２９．２，两者平均相差８．４倍（０－１００倍）。癌组织中ＨＣＶＲＮＡ负链只有癌旁组织中ＨＣＶ总ＲＮＡ的１／９１．６。本研究结果提示，ＨＣＣ癌组织中的确能检出ＨＣＶＲＮＡ负链，但水平较低。这种可能存在的低水平ＨＣＶ复制对ＨＣＣ的影响可能不大。因而，临床观察和流行病学研究所揭示的ＨＣＶ与ＨＣＣ相关的基础可能存在于ＨＣＣ发生过程的早期，即启动或早期克隆扩增阶段。     

HCC癌组织和癌旁组织中HCV RNA检测及半定量分析

ＨＣＶ相关ＨＣＣ癌组织能检出ＨＣＶ ＲＮＡ负链，但许多学者检测不到或对其检测方法的准确性产生怀疑。作者收集１３例ＨＣＶ相关ＨＣＣ标本，采用严格的负链检测方法和ＰＣＲ半定量方法系统地比较了ＨＣＣ癌组织和癌旁组织中ＨＣＶ总ＲＮＡ和负链的检出情况及其数量关系。ＨＣＣ癌组织和癌旁组织中，ＨＣＶ ＲＮＡ负链检出率分别为３０．８％和６９．２％，平均滴度分别为３．５和２９．２，两者平均相差８．４倍。癌组织中ＨＣ     

HBV和HCV感染与原发性肝细胞癌发生的相关性研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，检测２０例肝细胞癌患者肝组织ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。检测发现８０％的ＨＣＣ癌组织中可检出ＨＢＶ－ＤＮＡ的存在，２５％的病例可以查到ＨＣＶ－ＲＮＡ；所有ＨＢＶ和ＨＣＶ阳性病例均为原发性肝细胞癌，而继发性肝细胞病例未能检出二种病毒核酸序列。本研究揭示我国引起ＨＣＣ发生的肝炎病毒以ＨＢＶ为主，ＨＣＶ也可能起到一定作用。     

丙型肝炎病毒感染成年树的实验研究

目的：探讨成年树（Ｔｕｐａｉａ）感染ＨＣＶ的可能性。方法：用ＨＣＶＲＮＡ阳性人血清接种１０只健康成年Ｔｕｐａｉａ。观察临床表现；定期检测血清ＡＬＴ和ＨＣＶＲＮＡ正、负链；检测肝组织中ＨＣＶ３种抗原和负链ＨＣＶＲＮＡ；行肝组织病理检查。结果：Ｔｕｐａｉａ接种阳性血清后，１０例均出现不同程度的肝炎症状；１０例血清ＡＬＴ升高，其中３例在２８周时仍高于正常；６例肝组织中ＨＣＶ抗原持续阳性，持续时间大于２８周；１０例出现急性肝炎的肝组织病理学变化，其中４例有慢性肝炎病变。检测４只动物血清的系列标本，ＨＣＶＲＮＡ均呈间歇性阳性；检测３只动物肝组织负链ＨＣＶＲＮＡ均为阳性；检测１例动物肝外组织，其中心肌细胞、胰岛细胞和肾小管上皮细胞中有ＨＣＶ３种抗原染色阳性信号。结论：ＨＣＶ能够感染成年Ｔｕｐａｉａ，并可形成慢性病变，感染率约为６０％，慢性病变发生率约为４０％。Ｔｕｐａｉａ可作为研究丙型肝炎的实验动物     

肝细胞癌患者血清与癌组织中抗HCV及HCVRNA的检测

８８例经病理确诊的肝细胞癌患者，用ＥＬＩＳＡ法检测其血清抗ＨＣＶ与ＨＢＶ－Ｍ，阳性率分别为１４．７７％和９０．９１％。用ＰＣＲ法检测发现血清ＨＣＶＲＮＡ阳性１２例（１３．６４％）；１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病人的肝癌组织中８例ＨＢＶＤＮＡ阳性；１例肝癌组织中同时检出ＨＣＶＲＮＡ与ＨＢＶＤＮＡ。结果表明，本组肝癌的发生主要与ＨＢＶ感染有关，而与ＨＣＶ感染也可能有一定关系。     

丙型肝炎病毒感染成年树Qu的实验研究

探讨成年树Ｑｕ感染ＨＣＶ的可能性。方法用ＨＣＶＲＮＡ阳性人血清接种１０只健康成年Ｔｕｐａｉａ。观察临床表现；定期检测血清ＡＬＴ和ＨＣＶＲＮＡ正，负链；检测肝组织中ＨＣＶ３种抗原和负链ＨＣＶＲＮＡ；行肝组织病理检查。     

人原发性肝细胞癌地高辛素标记HBV DNA探针的原位杂交与C－myc和P_（53）癌基因表达相互关系的研究

取自肝癌高发区的４０例人原发性肝细胞癌（ＰＨＣ）标本，应用地高辛素（Ｄｉｇ）标记ＨＢＶＤＮＡ探针作原位杂交，检测ＰＨＣ和癌周肝组织内ＨＢＶＤＮＡ的表达，并用光敏生物素Ｃ－ｍｙｃ癌基因探针原位杂交和用免疫组化检测ＨＢｓＡｇ，ＨＢｃＡｇ及Ｐ５３癌基因在ＰＨＣ和癌周肝组织内的表达。Ｄｉｇ－ＨＢＶＤＮＡ探针肝内总阳性率为８０％，在ＰＨＣ内为６５％，而癌周肝组织中为７３％。ＨＢＶ－ＤＮＡ定位于肝细胞或癌细胞的胞浆和胞核内，而ＨＢＶＤＮＡ阳性颗粒在胞浆内比胞核内多。ＨＢＶＤＮＡ阳性细胞癌周比癌内更多。结果表明，ＰＨＣ病例与ＨＢＶ存在关系密切；癌内ＨＢＶＤＮＡ大都属整合型，而癌周属游离型。研讨ＰＨＣ内ＨＢＶＤＮＡ的表达与ＨＢｓＡｇ，ＨＢｃＡｇ，和Ｐ５３及Ｃ－ｍｙｃ癌基因的表达相互关系及致癌作用。     

慢性肝病HBVDNA,HDVRNA原位杂交及HBsAg,HBcAg研究

以特异性和敏感性较高的地高辛配基探针原位分子及免疫组化技术，对云南６８例病毒性肝炎ＣＰＨ，ＣＡＨ，肝细胞癌及癌周组织进行ＨＢＶＤＮＡ，ＨＤＶＲＮＡ，ＨＢｓＡｇ，ＨＢｃＡｇ研究，结果表明：ＨＢｓＡｇ作为靶抗原诱发机体免疫反应，参与炎症过程；除浆膜型ＨＢｃＡｇ，弥漫型，膜型ＨＢｓＡｇ外，ＨＢＶＤＮＡ在肝组织中表达也与肝炎活动性有关；     

肝癌患者肝组织中丙型肝炎病毒的基因分型

肝癌患者肝组织中丙型肝炎病毒的基因分型［崔晓红等．中华医学杂志，１９９５；７５（２）：９２］用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了４２例肝细胞癌患者肝组织中的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，对其中１８例ＨＣＶＲＮＡ阳性标本用ＨＣＶ非结构区－５（Ｎ...     

肝细胞癌患者血清与癌组织中抗HCV及HCVRNA的检测

８８例经病理确诊的肝细胞癌患者，用ＥＬＩＳＡ法检测其血清抗－ＨＣＶ与ＨＢＶ－Ｍ，阳性率分别为１４．７７％和９０．９１％。用ＰＣＲ法检测发现血清ＨＣＶＲＮＡ阳性１２例（１３．６４％）；１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病人的肝癌组织中８例ＨＢＶＤＮＡ阳性；１例肝癌组织中同时检出ＨＣＶＲＮＡ与ＨＢＶＤＮＡ。结果表明，本组肝癌的发生主要与ＨＢＶ感染有关。而与ＨＣＶ感染也可能有一定关系。     

丙型肝炎病毒抗原的免疫组化检测及方法学探讨

采用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ区、Ｃ区、ＮＳ３区单克隆及多克隆抗体以及丙型肝炎患者血清及血清中ＩｇＧ抗体作为特异性第一抗体，分别应用ＬＳＡＤ、改良ＰＡＰ及直接酶标法对６５例丙型肝炎患者肝组织冰冻及石蜡包埋标本进行ＨＣＶ抗原检测，其中以ＮＳ３区抗体、ＬＳＡＢ法的检测结果较为理想（检出率２７．７％～２９．２％）。ＨＣＶ抗原呈肝细胞胞浆弥漫型、胞核型及胞浆类包涵体型表达。阳性肝细胞多呈单个散在分布。急性丙型肝炎比慢性丙型肝炎的ＨＣＶ抗原检出率更高且抗原颗粒的分布与病理损伤呈正相关，炎症区浸润的淋巴细胞中可见阳性颗粒；而慢性丙型肝炎肝组织中ＨＣＶ抗原与病理损伤无明显关联；支持急性丙型肝炎的肝细胞损伤由病毒的直接作用及免疫攻击协同所致，而慢性丙型肝炎则以免疫反应引起肝细胞持续损伤为主。胞浆弥漫型ＨＣＶ抗原表达是急性或活动性病变时的主要表达形式，而胞核型ＨＣＶ抗原表达多见于病变静止期。     

丙型肝炎病毒C33c抗原、核心抗原和HBxAg在人原发性肝内胆管细胞癌中的分布及意义

目的：研究丙型肝炎病毒Ｃ３３ｃ抗原及核心抗原在人肝内胆管细胞癌中的分布及意义。方法：以免疫组织化学方法检测ＨＣＶ两种抗原及ＨＢｘＡｇ在肝内胆管细胞癌及癌旁肝组织中定位及分布。结果：ＨＣＶＣ３３ｃ抗原位于癌细胞或肝细胞的胞浆内；ＨＣＶ核心抗原在癌组织主要呈核阳性，在癌旁肝以胞浆阳性为主。ＨＣＶＣ３３ｃ抗原在癌组织及癌旁肝的阳性率分别为６０％（２１／３５）及１００％（２１／２１），ＨＣＶ核心抗原在上述两种组织的阳性率分别为８７．８％（２９／３３）及６１．９％（１３／２１）；ＨＢｘＡｇ在两种组织中检出率分别为７４．３％（２６／３５）及７６．２％（１６／２１）．Ｃ３３ｃ及ＨＢｘＡｇ双阳性分别为４８．６％（１７／３５）及７６．２％（１６／２１）．结论：除ＨＢＶ感染外，ＨＣＶ感染在人肝内胆管细胞癌的发生中可能起重要作用     

逆转录巢式多聚酶链反应对输血后肝炎HCV核酸检测及临床意义

本文采用逆转录巢式多聚酶链反应（ＲＴ一ｎＰＣＲ）等法，对４９例输血后肝炎（ＰＴＨ）患者同时检测ＨＣＶＲＮＡ、ＨＢＶＤＮＡ及其有关血清学标志，结果显示：ＨＣＶ与ＨＢＶ感染率分别为８１．６％、３４．６％，其中双重感染者占２２．４％。抗一ＨＣＶ与ＨＣＶＲＮＡ符合率为７９．４％，抗一ＨＣＶ阴性患者中，４０％可检出ＨＣＶＲＮＡ，表明检测抗一ＨＣＶ对诊断排除ＨＣＶ感染有一定意义，但抗一ＨＣＶ阴性并不能排除ＨＣＶ感染。     

人原发性肝细胞癌及肝硬变内HBV DNA及HBAg的分布及意义

为了探讨ＨＢＶ与肝细胞癌的发病的关系，作者应用原位分子杂交，免疫组化及它们的双标记方法在４４例肝癌，１７例癌旁肝组织和４２例肝硬变的石蜡切片中检测了ＨＢＶ ＤＮＡ，ＨＢｘＡｇ。研究结果显示，ＨＢＶ ＤＮＡ，ＨＢｘＡｇ和ＨＢｃＡｇ在肝癌组织中的率分别为７０．５％，６５．９％和２０．５％，而在癌旁肝组织内检出率分别为７６．５％，７６．５％和２９．４％，４２例肝硬变组织中的检出率分别为８８．１％，...     

标记引物逆转录原位聚合酶链反应的建立及对丙型肝炎病毒的检测

建立光敏生物素补骨脂素（ＢＰ）标记引物逆转录原位聚合酶链反应技术（标记法），并以此研究石蜡包埋肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的定位分布。方法用葡聚糖凝胶纯化ＨＣＶ靶基因被标记引物，在其负链５′非编码区将ＢＰ标记置链４处，所得终产物１４５ｂｐ。分别用标记法、间接逆转录原位聚合酶链反应（间接法）和原位杂交检测ＨＣＶ。结果表明用ＢＰ标记引物进行聚合酶链反应是可行的，并具有良好的特异性。应用间接法及标记法检测ＨＣＶ，其检出率分别为５９％（１０／１７）和５３％（９／１７），差异无显著意义（χ２＝０．１２，Ｐ＞０．０５）；原位杂交对ＨＣＶ的检出率仅为２４％（４／１７），明显低于上述两种方法，差异有显著意义（χ２＝３．９７和４．３７，Ｐ＜０．０５）。ＨＣＶ的分布以肝细胞浆型为主，单核细胞及胆小管上皮细胞也可见阳性信号。结论间接法和标记法对检测石蜡包埋肝组织中的ＨＣＶ均具有良好的敏感性和特异性；在肝组织中，ＨＣＶ不仅存在于肝细胞，而且也存在于单核细胞及胆小管上皮细胞中，提示肝细胞可能不是ＨＣＶ唯一的复制部位。