基于文献的冠心病血瘀证相关蛋白互作模块及miRNA-mRNA调控网络构建＊

目的 整合发掘更多冠心病血瘀证的标志基因，研究已知冠心病血瘀证差异基因的生物机理，构建关键蛋白互作模块与miRNA-mRNA调控网络，丰富靶点间的相互作用网络，并分析其核心生物过程与通路。方法 利用中国知网、万方、维普、中国生物医学文献、Embase、PubMed六个数据库获取冠心病血瘀证相关基因文献；按照纳排标准筛选符合要求的文献提取数据，运用Metascape数据库针对全部差异mRNA构建蛋白质间互相作用的网络模块，并对上调mRNA和下调mRNA的通路进行富集和功能注释。利用starBase数据库预测冠心病血瘀证相关miRNA的靶基因，并与文献整合的差异mRNA相互映射，运用OmicShare Tools绘制冠心病血瘀证相关miRNA-mRNA调控网络。结合Webgestalt在线工具，针对miRNA-mRNA调控网络中相关mRNA进行KEGG和GO富集分析。结果 研究纳入冠心病血瘀证相关基因文献15篇，获得113个mRNA（66个上调、47个下调），101个miRNA（55个上调、46个下调）。研究通过蛋白互作网络得到2组关键蛋白：①IL6、EGR1、TP53、JUN、FOS；②CTSL、HLA-DRB1、HLA-DQB1、HLA-DRB5。构建得到miRNA-mRNA调控网络的关键节点，包括24个miRNA（10个上调、14个下调）和22个mRNA（10个上调、22个下调），其中10个节点与部分纳入文献的研究结果吻合。结论 冠心病血瘀证涉及多种生物功能、多条信号通路，其miRNA-mRNA调控网络机制可能与炎症和免疫反应、凝血功能、细胞分化与凋亡等较为相关。     

冠心病血瘀证差异蛋白质生物信息学分析

目的:对冠心病血瘀证蛋白质组学发现的差异蛋白质进行生物信息学分析。方法:利用PANTHER、DAVID和STRING在线数据库对CNKI和PUBMED发表的冠心病血瘀证差异蛋白质进行GO功能富集分析和蛋白质相互作用网络构建。结果:冠心病血瘀证差异蛋白质细胞组分主要定位于细胞外区域、细胞、细胞器等,主要参与细胞过程、定位、多细胞生物过程等,主要涉及到催化活性、结合功能、结构分子激活等分子功能,主要参与血小板活化、补体及凝血级联反应、致心律失常性右室心肌病等信号通路,蛋白质相互作用涉及44个节点和131条边。结论:多个蛋白质、多个信号通路、多个蛋白质相互作用方式为理解冠心病血瘀证多阶段病理过程提供了帮助。     

基于蛋白质组学探讨仙连解毒方干预小鼠结直肠癌湿热瘀毒证模型的作用靶点及信号通路研究＊

目的 应用蛋白质组学方法探讨仙连解毒方（Xian-Lian-Jie-Du Decotion，XLJDD）治疗小鼠结直肠癌湿热瘀毒证模型的作用靶点及信号通路。方法 采用偶氮甲烷（AOM）/葡聚糖硫酸钠（DSS）结合高糖高脂饲料喂养的复合方法建立小鼠结直肠癌湿热瘀毒证模型，将小鼠分为空白对照（Control）组、湿热瘀毒证模型（Model）组、仙连解毒方处理（XLJDD）组。XLJDD组于造模同时开始给药（12.9 g·kg^-1），每周6次，共112天，末次给药4 h后，收集各组小鼠结直肠组织，迅速液氮保存。蛋白质质谱检测采用非数据依赖型采集模式（DIA），通过Protein Discovery 2.2软件进行蛋白质搜库鉴定，对蛋白及肽段信息定量分析，筛选各组差异表达蛋白，并对差异蛋白进行GO（Gene Oncology）和KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）富集分析。结果 Model组与Control组相比，共有差异表达蛋白267个，XLJDD组与Model组相比，共有225个差异表达蛋白，GO以及KEGG富集分析发现仙连解毒方干预后，发现这些蛋白主要定位在细胞膜上，能够发挥细胞调节功能等分子功能，参与细胞粘附、Th1/Th2细胞分化、Th17细胞分化和细胞衰老通路等生物学进程相关。结论 通过蛋白质组学研究提示，XLJDD可能通过调节免疫细胞功能，发挥干预小鼠结直肠癌湿热瘀毒证的作用。     

冠心病血瘀证蛋白组学研究的系统综述＊

目的 汇总分析近年来冠心病血瘀证蛋白组学的研究具体方法及对差异蛋白结果、涉及的病理机制的影响，为临床研究冠心病血瘀证寻找合适研究方法提供依据。方法 计算机检索中国知网、万方数据库、Cochrane、Medline文献数据库，收集包含冠心病血瘀证蛋白组学的相关研究，根据纳入和排除标准筛选文献、提取资料，对文献中冠心病血瘀证蛋白组学研究方法、差异蛋白结果及涉及的病理机制进行定性分析。结果 共检索出259篇相关文献，最终纳入14项研究，发现3种冠心病血瘀证蛋白组学研究中常用的分组策略，不同分组策略所采取的研究方法会运用不同的蛋白组学技术手段，包括双向凝胶电泳、质谱鉴定、ELISA法、免疫比浊法、发色底物法等；检测到与冠心病血瘀证相关的差异蛋白种类繁多，涉及病理机制亦不尽相同，主要与炎症反应、脂代谢紊乱、凝血-纤溶系统异常等病理机制相关，与心肌损伤与动脉粥样硬化或存在密切关系。结论 不同蛋白组学研究方法的差异主要体现在分组与技术手段方面。冠心病血瘀证患者与健康人对照得出的差异蛋白种类多，涉及的病理机制较为丰富，但血瘀证的特异性不高；冠心病血瘀证与非血瘀证患者对照得出的差异蛋白对血瘀证的特异度较高，但可能遗漏相关病理过程；冠心病血瘀证/非血瘀证患者与健康人三者对照的结果涉及的病理机制主要为免疫反应、脂代谢紊乱、凝血系统异常3种，结果较为全面，对血瘀证的特异度高，可在临床推荐使用。本文结合近些年对于冠心病血瘀证的临床研究情况，对其蛋白组学研究方法进行综述，旨在为冠心病血瘀证的蛋白组学研究奠定基础。     

冠心病血瘀证基因组学研究进展＊

目的 系统综述冠心病血瘀证基因组学研究的方法和内容。方法 计算机检索Medline、Cochrane Central Register of Controlled Trials、中国知网、万方数据库，查找冠心病血瘀证基因组学的临床研究，按照制定的纳入排除标准，由2名研究人员独立筛选文献，任何分歧通过协商一致或通过第3名研究人员来解决。结果 最终纳入34项研究，其中与冠心病血瘀证密切相关的基因组学研究类型包括基因多态性、差异基因的表达、基因的甲基化修饰，涉及的生物学功能有血管内皮损伤、血液流变学改变、炎症反应与免疫调节、血管平滑肌增殖、血脂水平等，采用的技术方法有聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction，PCR）、飞行时间质谱技术（Time-of-flight mass spectrometry，TOF-MS）、基因芯片杂交测序（Gene Chip）等。结论 基因组学研究可阐明冠心病血瘀证的生物学基础，为冠心病血瘀证的病机演变提供更好的依据，更有助于从分子水平实现个体化治疗，从而进一步提高临床疗效。     

基于定量蛋白质组学技术探究半夏泻心汤对慢性胃炎大鼠影响的作用机制

目的 应用定量蛋白质组学探究半夏泻心汤抗慢性胃炎的生物学基础。方法 实验大鼠分为正常组、慢性胃炎模型组、半夏泻心汤组,采用56%乙醇灌胃法,4周建立慢性胃炎模型,给药治疗后,取胃组织进行苏木素-伊红（HE）染色,观察各组大鼠胃组织病理损伤及改善情况,提取胃组织蛋白质,运用串联质谱标签（TMT）定量蛋白质组学研究各组之间的差异蛋白情况,采用蛋白免疫印迹法（Western blot）验证关键的差异表达蛋白。结果 从大鼠胃组织中鉴定出4 452个蛋白,其中模型组与正常组差异蛋白为318个。经半夏泻心汤干预后,与模型组相比,共有258个差异蛋白,这些差异蛋白主要富集于cell killing,nucleoid及hijacked molecular function等。京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集发现,作用涉及到三羧酸循环,steroid hormone biosynthesis,retrograde endocannabinoid等信号通路,同时还涉及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）和核转录因子（NF）-κB信号通路。Western blot验证发现14-3-3 theta,干细胞因子（SCF）,肌腱蛋白C（TN-C）,半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）,细胞间黏附分子-1（ICAM-1）,线粒体丙酮酸载体（Mpc1）和免疫相关蛋白GTP酶4（GIMAP4）可能是该方治疗慢性胃炎的关键蛋白。结论 半夏泻心汤治疗慢性胃炎的作用机制涉及到能量代谢、激素调节、炎症反应及免疫过程,利用差异蛋白质组学寻找的靶点蛋白及其涉及的信号通路可能是半夏泻心汤治疗慢性胃炎的生物学基础。     

基于网络药理学研究瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的作用机制＊

目的 采用网络药理学和分子对接的研究方法分析瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的药物作用机制。方法 检索TCMSP数据库，筛选瓜蒌、薤白、半夏3味药物的主要活性成分并检索其作用靶点，根据GeneCards数据库查询与冠心病有关的靶点。Cytoscape3.7.2软件构建成分-靶点网络图，运用STRING绘制蛋白质相互作用（Protein-protein interactions，PPI）网络，分析相关生物功能注释和通路，用SYBYL-X 2.0软件完成靶基因与有效成分的分子对接。结果 筛选得到瓜蒌薤白半夏汤有效活性成分46个，药物相应靶点277个，疾病靶点450个，获取交集靶点82个，PTGS2、ADRB2、SCN5A、CASP3、NR3C2、AR等靶点处于网络图的核心位置。富集分析显示，主要通过RNA聚合酶II启动子转录的正调控、转录正调控，DNA模板、药物反应、基因表达的正调控、信号转导、缺氧反应、炎症反应等生物学过程干预冠心病；细胞组分主要涉及细胞外间隙、质膜、胞外区、胞质、细胞外泌体等；具有蛋白质结合、酶结合、蛋白质同源二聚体活性、细胞因子活性、受体结合、转录因子活性等分子功能。瓜蒌薤白半夏汤可能通过PI3K-Akt信号通路、TNF信号通路、HIF-1信号通路、MAPK信号通路、FoxO信号通路等发挥治疗作用；分子对接显示瓜蒌薤白半夏汤有效成分与核心靶点具有较好的结合能力。结论 本研究系统筛选了瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的作用靶点和生物学机制，为后续深入研究中医药治疗冠心病的药物机制提供理论基础。     

基于网络药理学探讨丹参通络方治疗冠心病血瘀证的机制＊

目的 基于网络药理学探讨丹参通络方治疗冠心病（Coronary heart disease，CHD）血瘀证的可能作用机制。方法 通过TCMSP数据库ChEMBL数据库筛选出丹参通络方3味药丹参、三七、银杏叶潜在活性成分及靶点，通过GeneCard数据库获得冠心病的作用靶点，结合课题组前期通过高通量测序方法获得的冠心病血瘀证的差异表达基因，最终得到药物与疾病的交集靶点，并运用Cytoscape 3.7.2软件绘制活性成分-靶点-疾病网络图，采用STRING数据库构建PPI网络，使用R软件和Bioconductor包对交集靶点进行基因GO功能和KEGG富集分析。结果 筛选得到丹参通络方治疗冠心病血瘀证的潜在活性成分8个，核心靶点7个，其作用的生物路径与IL-17信号通路等关系密切。结论 丹参通络方治疗冠心病血瘀证的作用具有多成分、多靶点、多通路的作用机制特点，网络药理学结果可为实验验证其机制提供方向。     

冠心病心血瘀阻证和心肾阴虚证的蛋白组学研究

目的:使用蛋白质组学技术对冠心病心血瘀阻证和心肾阴虚证这两种证候之间差异进行研究,以期找到两种证候间差异的物质基础并初步阐释两者差异的信号通路。方法:采集冠心病心血瘀阻证和心肾阴虚证病人的血浆,用荧光差异蛋白电泳(2D-DIGE)、质谱(MALDI-TOF)等蛋白质组学技术分析和鉴定两种证候间蛋白表达的变化,并用生物信息学方法对其涉及的主要信号通路进行分析。结果:蛋白组学研究发现冠心病心血瘀阻证和心肾阴虚证相比共有10种差异表达蛋白,其中7种表达上调,3种表达下调。涉及的通路主要有补体和凝血级联通路及阿尔兹海默症信号通路。结论:补体和凝血级联通路及阿尔兹海默症信号通路与冠心病心血瘀阻证和心肾阴虚证的中医分型有关,但需要进一步验证和机制研究。     

基于差异凝胶双向电泳技术的冠心病不稳定性心绞痛血瘀证患者血浆差异蛋白特征研究

目的通过对冠心病心绞痛血瘀证患者和健康人血浆的差异凝胶电泳图谱检测,寻找其血浆差异蛋白,探索其蛋白质组学特点。方法采用差异凝胶双向电泳和串联质谱对12例冠心病不稳定性心绞痛气虚血瘀证患者、12例痰瘀互阻证患者和12名健康人去高丰度蛋白血浆进行比较蛋白质组学研究,寻找心绞痛血瘀证血浆差异蛋白。结果初步发现在冠心病不稳定性心绞痛气虚血瘀证和痰瘀互阻证两组患者表达均变化的蛋白有Haptoglobin β chain、DBP、HBB、HBA、Transthyretin、ApoA-Ⅰ、ApoA-Ⅳ。仅在冠心病不稳定性心绞痛痰瘀互阻证表达变化的蛋白有Haptoglobin α1 chain、α-1-acid glycoprotein、ApoC-Ⅲ、ApoA-Ⅱ、ApoC-Ⅱ、ApoJ、Haptoglobin α 2 chain。仅在冠心病不稳定性心绞痛气虚血瘀证表达变化的蛋白α1-antitryp-sin、Fibrinogen γ chain、Fibrin β。结论冠心病不稳定性心绞痛气虚血瘀证与痰瘀互阻证在蛋白质层面的部分共性特征表现为炎症反应、代谢紊乱(包括血脂、血氧等)。     

基于iTRAQ技术的慢性心力衰竭气虚血瘀证及气阴两虚证组差异蛋白质组学研究

目的:寻找慢性心力衰竭(CHF)(Chronic Heart Failure,CHF)气虚血瘀证及气阴两虚证的相关蛋白质组学特征,探讨证候发生发展机制的可能生物学通路。方法:研究设计分为CHF气虚血瘀证、气阴两虚证、健康对照组,利用i TRAQ标记定量结合串联质谱技术分析CHF气虚血瘀证及气阴两虚证的相关表达差异蛋白质,为蛋白质组学层面的疾病与证候生物学基础提供实验依据,可以在一定层面上揭示证的内涵。结果:与健康对照组比较,在CHF气虚血瘀证组表达差异蛋白质有16个,其中载脂蛋白E、半乳糖凝集素-3结合蛋白等11个蛋白质表达上调,维生素D结合蛋白、胰蛋白酶抑制剂等5个蛋白质表达下调;与健康对照组比较,在CHF气阴两虚证组表达差异的蛋白质有15个,其中补体9、间-α-胰蛋白酶抑制剂家族重链相关蛋白等10个蛋白质表达上调,前血清淀粉样蛋白P、维生素D结合蛋白等5个蛋白质表达下调。结论:蛋白质组检测结果能够反映CHF气虚血瘀证及气阴两虚证的生物学基础,从而能客观的评价证候特征,为病证结合的研究开拓了新的视野。     

冠心病合并糖尿病患者冠脉病变及中医证候学特点

目的研究冠心病合并糖尿病患者的冠脉病变及其中医证候学特点。方法用流行病学方法收集冠心病糖尿病患者,并与冠心病非糖尿病组比较临床的基本情况、冠脉病变特点、中医证候学特点。结果冠心病合并糖尿病组中,高血压和血管重建病史与冠心病非糖尿病组有显著性差异(P<0.05);回旋支、右冠脉、多支病变显著高于冠心病非糖尿病组。患者舌体黯红、舌苔少津、舌下络脉怒张、脉细弱组明显高于冠心病非糖尿病组,血瘀证、阴虚证明显高于冠心病非糖尿病组。结论冠心病合并糖尿病的冠脉病变和中医证候有自己独特的特点。     

冠心病不同证候的蛋白质组学研究进展

从冠心病血瘀证、痰证、痰瘀互结证、气虚证、心肾阴虚证的蛋白差异表达进行评价,筛选出差异蛋白,探讨其诊断价值及证候发展规律;对冠心病蛋白质组学实验提出规范检测标准、优化实验设计、创新技术手段等建议。冠心病与正常组的差异蛋白为CD41、视黄醇结合蛋白、结合珠蛋白、血清白蛋白等;痰证以脂质代谢异常所导致的"高脂"为主要特点,其与血瘀证主要差异蛋白为载脂蛋白E、载脂蛋白H及巨噬细胞刺激蛋白1等;痰瘀互结证的特点为"高脂、高凝",其与痰证差异蛋白为纤维蛋白原β链、补体C4、载脂蛋白AI前体、载脂蛋白E、白蛋白等。心肾阴虚证与血瘀证的差异蛋白为补体C3、补体C1、载脂蛋白A-1、载脂蛋白4前体、载脂蛋白E等;气虚证与血瘀证的差异蛋白为补体C3、补体C4-A、补体C7、血浆血管舒缓素、血红素结合蛋白等。以上差异蛋白可作为辨别中医证型的依据。     

冠心病稳定性心绞痛痰瘀互结证多中心、小样本、精细化临床研究方案

冠状动脉粥样硬化是冠心病血管狭窄的发病基础,在中国有研究调查发现冠心病血瘀、痰浊等标实证候要素所占比例在逐年增加,冠心病痰瘀互结证成为当今冠心病的主要证候类型之一。依托国家973计划项目,选取中国7家临床单位的冠心病痰瘀互结证患者为观察人群,冠心病气阴两虚证患者为疾病对照人群,以健康人为空白对照人群,开展多中心、小样本、精细化的临床对照试验研究,检测脂质代谢、炎症介质、内皮细胞损伤、凝血功能等评价病证关系的生化指标,检测血尿代谢组学、全基因表达谱芯片,揭示冠心病痰瘀互结证的生物学基础。该方案进行了严格的入组筛选,严谨的样本采集、运输及统一检测,从量表到临床生化指标再到蛋白组学、基因组学、代谢组学的多组学分析,全面诠释了冠心病痰瘀互结证的临床生物学基础,是冠心病证候学研究的典型范例。     

基于Label-free定量技术及异病同证理论的妇科实寒证患者血浆蛋白质组学研究

目的 基于Label-free定量蛋白质组学及异病同证理论探究妇科实寒证的生物学基础.方法 纳入原发性痛经实寒证患者、子宫内膜异位症实寒证患者及健康女性各8例,分别为痛经组、内异症组、正常组.采集各组月经周期第2日的血浆样本进行蛋白提取、胰酶酶解和超高效液相色谱-质谱联用分析后得到原始数据,依据筛选标准获得差异表达蛋白...     

丹蒌方干预冠心病稳定性心绞痛痰瘀互结证的临床生化基础研究

[目的]通过多中心、精细化的临床研究,旨在通过对比丹蒌方干预冠心病稳定性心绞痛痰瘀互结证患者和健康人的临床生化指标,探究其临床生化基础。[方法]从全国7家临床研究中心共入组受试者82例,脱失4例,最终入组冠心病痰瘀互结证患者38例,在西医常规治疗的基础上加服中药丹蒌片治疗,健康人40例不予干预。分别检测内皮细胞损伤、脂质代谢、黏附分子、炎症介质、金属蛋白酶、同型半胱氨酸和凝血功能共7类28项指标,冠心病患者分别检测0、8、12周水平,健康人检测第0周水平。[结果]冠心病痰瘀互结证与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、活化部分凝血活酶时间(APTT)相关性较大,通过丹蒌方的治疗可降低患者炎症因子水平,改善血管内皮损伤情况。[结论]丹蒌方干预冠心病稳定性心绞痛痰瘀互结证的机制与调节内皮损伤、脂质代谢、炎症因子、凝血功能、金属蛋白酶有关,可为下一步研究提供参考依据。     

稳定性冠心病中医证候分布的现况调查

目的:观察稳定性冠心病(SCAD)及其不同合并病的证候分布特点。方法:用现况研究方法调查经冠状动脉造影证实或既往有心肌梗死病史的稳定性冠心病患者,采用SPSS 13.0软件进行统计分析。结果:调研736例稳定性冠心病患者,男546例,女190例,年龄28～75岁,平均(61.87±8.74)岁。常见合并病是高脂血症(475例,64.54%)、高血压(454例,61.68%)、糖尿病(239例,32.47%)和脑卒中(94例,12.77%)。常见证候是血瘀(501例,68.07%)、痰浊(363例,49.32%)、气虚(344例,46.74%)。稳定性冠心病合并高脂血症多见气虚证(49.3%vs 42.1%,P=0.038),合并高血压病多见气滞证(10.4%vs 6.0%,P=0.027),合并脑卒中多见气滞证(17.0%vs 7.5%,P=0.004),陈旧性心肌梗死患者多见血瘀证(78.5%vs 63.8%,P<0.001)。结论:血瘀、痰浊、气虚是稳定性冠心病的主要证候,稳定性冠心病不同合并病有符合自身的证候特点。     

加味陈平汤治疗老年社区获得性肺炎患者痰湿阻肺夹瘀证的临床观察

目的:观察加味陈平汤治疗老年社区获得性肺炎患者痰湿阻肺夹瘀证患者的临床疗效及安全性,并探讨其作用机制。方法:采用随机数字表将104例老年社区获得性肺炎痰湿阻肺夹瘀证患者随机分为治疗组、对照组,各52例。治疗组患者采用常规西医治疗联合加味陈平汤,对照组患者采用单纯西医治疗,比较两组患者的临床症状体征评分、中医证候疗效、外周血炎症指标(白细胞计数、中性粒细胞数、快速C反应蛋白、血沉及降钙素原)水平、胸部CT炎症吸收情况及不良反应。结果:治疗组患者在临床症状体征评分、中医证候疗效、外周血炎症指标水平(白细胞计数、中性粒细胞数、快速C反应蛋白、血沉及降钙素原)、胸部CT炎症吸收方面显著优于对照组(P0.01)。在试验过程中,少数患者出现轻微静脉炎、胃肠道反应和肝功能受损等药物副作用,两组不良反应率差异无统计学意义。结论:在常规西医治疗基础上,服用加味陈平汤治疗老年社区获得性肺炎痰湿阻肺夹瘀证疗效更好,值得临床推广应用。