白细胞介素-1β上行调节兔血管平滑肌细胞极低密度脂蛋白受体mRNA的表达

为了研究血管平滑肌细胞是否表达极低密度脂蛋白受体mRNA，采用Northernblot分析法检测培养兔主动脉平滑肌细胞表达极低密度脂蛋白受体mR-NA的情况。结果发现，培养兔主动脉平滑肌细胞可以表达极低密度脂蛋白受体mRNA；而且．细胞因子白细胞介素-1β能使表达增强约2倍。提示极低密度脂蛋白受体有可能参与动脉平滑肌细胞源性泡沫细胞；白细胞介素-1β上行调节平滑肌细胞表达极低密度脂蛋白受体mRNA可能是其参与动脉粥样硬化斑块形成途径之一。     

反义核苷酸干预血管成形术后平滑肌细胞生长因子基因表达的研究

为了研究反义核苷酸对平滑肌细胞（ＳＭＣ）及生长因子基因表达的影响。本实验对兔髂动脉粥样硬化模型行血管成形术；应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交和ＲＴ－ＰＣＲ方法观察反义核苷酸对体外兔髂动脉ＳＭＣ增殖及转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达的影响。结果表明：反义核苷酸抑制ＳＭＣ增生，并呈浓度依赖性；反义核苷酸抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达；阳离子脂质体能明显增强反义核苷酸的上述作用。在培养的兔髂动脉ＳＭＣ中ＥＧＦＲｍＲＮＡ表达阴性。结论：反义核苷酸抑制兔髂动脉ＳＭＣ增生与抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达有密切关系。     

肝素干预血管成形术后平滑肌细胞生长因子基因表达的研究

目的探讨肝素影响血管成形术后动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增生的机理。方法建立兔动脉粥样硬化模型，行血管成形术；观察肝素对体外兔髂动脉ＳＭＣ的增生、细胞周期、转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达等的影响。结果肝素能抑制ＳＭＣ的增生，并具有浓度依赖性和时间依赖性；肝素阻止ＳＭＣ进入Ｓ期，也有浓度依赖性和时间依赖性；肝素能抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦ信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）的表达；在培养的兔髂动脉ＳＭＣ中ＥＧＦＲｍＲＮＡ的表达呈阴性。结论肝素抑制培养的兔髂动脉ＳＭＣ的增生与抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦｍＲＮＡ的表达有密切关系。     

糖尿病大鼠糖基化终产物与主动脉细胞外基质成分的关系

为了观察富含胆固醇的脂蛋白对兔主动脉平滑肌细胞脂类堆积的影响及机制,用富含胆固醇的脂蛋白（β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白） 与兔主动脉平滑肌细胞温育４８ ｈ 后,发现β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白都能促进平滑肌细胞内总胆固醇和甘油三酯堆积,以β－ 极低密度脂蛋白的作用更显著。乳铁蛋白作为低密度脂蛋白受体相关蛋白的一种特异配体,当它与上述脂蛋白共同与平滑肌细胞温育后,发现乳铁蛋白对脂蛋白所致的平滑肌细胞内脂质堆积有抑制作用。乳铁蛋白与标记的β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白的竞争结合实验也进一步发现乳铁蛋白可明显竞争β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白与平滑肌细胞的结合,且对β－ 极低密度脂蛋白的竞争抑制作用尤为明显。提示β－ 极低密度脂蛋白、正常低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白可能主要通过低密度脂蛋白受体相关蛋白介导进入平滑肌细胞,导致平滑肌细胞内脂质堆积。     

白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α对血管平滑肌细胞及基质金属蛋白酶-2骨桥蛋白基因表达的影响

促炎细胞因子白细胞介素－ １β和肿瘤坏死因子－ α是血管平滑肌细胞的强效促分裂原,为了探讨其促血管平滑肌细胞增殖是否与细胞外基质降解及粘附蛋白合成有关,本文以体外培养的血管平滑肌细胞为研究对象,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹及基质金属蛋白酶－ ２ 活性酶图分析方法动态观察白细胞介素－ １β、肿瘤坏死因子－ α对血管平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶－２ 及骨桥蛋白的影响。结果发现,白细胞介素－１β和肿瘤坏死因子－ α均可显著诱导基质金属蛋白酶－ ２ 及骨桥蛋白的基因表达,血管平滑肌细胞受两种细胞因子刺激１２ ｈ 后,基质金属蛋白酶－２ 及骨桥蛋白ｍＲＮＡ表达活性最高,分别达到对照细胞的３ 倍左右和１０ 倍以上。对细胞培养基基质金属蛋白酶活性进行酶图分析的结果发现,肿瘤坏死因子－α及白细胞介素－１β作用于血管平滑肌细胞１２ 及２４ ｈ 时,基质金属蛋白酶降解明胶的活性约为对照细胞培养基的２ 倍和１．５ 倍。提示这类细胞因子可同时在多位点上对血管平滑肌细胞的迁移与增殖发挥促进作用。     

动脉壁正常区与脂斑区血小板源性生长因子及其受体基因表达的比较

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析技术测定了正常人主动脉平滑肌细胞血小板源性生长因子及其受体ｍＲＮＡ的表达，以探其与动脉样硬化发生的关系，结果显示，正常动脉壁及有脂纹脂斑动脉的正常区ＰＤＧＦ链ｍＲＮＡ仅有微量表达，未检出ＰＤＧＦ受体ｍＲＮＡ的表达；而脂纹脂斑区的ＰＤＧＦＡ链ｍＲＮＡ及ＰＤＧＦβ－受体ｍＲＮＡ表达则显著增高，提示动脉壁ＰＤＧＦＡ链及受体ｍＲＮＡ表达增高与Ａｓ的发生有关。     

反义核苷酸干预血管成形术后平滑肌细胞生长因子基因表达…

为了研究反义核苷地平滑肌细胞（ＳＭＣ）及生长因子基因表达的影响。本实验对兔髂动脉粥样硬化模型进行血管成形术；应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交和ＲＴ－ＰＣＲ方法观察反义核苷酸对体外兔髂动脉ＳＭＣ增殖及转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１），表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）、碱改成纤维细胞生长因子基因表达的影响。结果表明：反义核苷酸抑制ＳＭＣ增生、并呈浓度依赖性；反义核苷酸抑制ＴＧＦ－β１和ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达；     

动脉壁正常区与脂斑区血小板源性生长因子及其受体基因表达的比较

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析技术测定了正常人主动脉平滑肌细胞血小板源性生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ）及其受体ｍＲＮＡ的表达，以探讨其与动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ａｓ）发生的关系。结果显示，正常动脉壁及有脂纹脂斑动脉的正常区ＰＤＧＦ链ｍＲＮＡ仅有微量表达，未检出ＰＤＧＦ受体ｍＲＮＡ的表达；而脂纹脂斑区的ＰＤＧＦＡ链ｍＲＮＡ及ＰＤＧＦβ－受体ｍＲＮＡ表达则显著增高。提示动脉壁ＰＤＧＦＡ链及ＰＤＧＦ受体ｍＲＮＡ表达增高与Ａｓ的发生有关。     

白细胞介素—1β及其受体拮抗剂对系膜细胞增殖及产？…

目的：探讨白细胞介素１β（ＩＬ－１β）及其受体拮抗剂（ＩＬ－１ｒａ）对系膜细胞增殖及产生１ＮＯ的影响。方法 培养 的第１０￣１２代ＳＤ大鼠肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）用于实验,分别加入ＩＬ－１β或ＩＬ－１β加ＩＬ－１ｒａ,１２ｈ后用化学方法测定培养上清中亚硝酸盐的含量,用＾３Ｈ－ＴＤＲ掺入率测定ＧＭＣ的增殖,狭缝和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交测定细胞ｉＮＳ ｍＲＮＡ表达。结果：ＩＬ－１β组ＧＭＣ出现ｉＮＯＳｍ     

白细胞介素—1受体拮抗剂对肺间质纤维化的影响

白细胞介素－１（ＩＬ－１）是一种具有多种生物活性的细胞因子，它参与了肺间质纤维化形成的过程。白细胞介素－１受体拮抗剂（ＩＬ－ｌｒａ）能和ＩＬ－１竞争靶细胞表面受体，阻断ＩＬ－１的效应。为了探索治疗肺间质纤维化的新途径，我们在博莱霉素所致大鼠肺间质纤维化模型上，气管灌注重组人ＩＬ－ｌｒａ，观察病理变化、胶原蛋白量以及转化生长因子－βｍＲＮＡ在肺内表达的变化，评价ＩＬ－ｌｒａ对肺间质纤维化形成的影响，     

凝血酶和脂多糖诱导小牛主动脉平滑肌细胞表达单核细胞趋化蛋白-1

为探讨凝血酶和脂多糖是否可诱导血管壁平滑肌细胞表达单细胞趋化蛋白－１,用贴块法培养小牛主动脉平滑肌细胞至３－５代,用ｄｏｔ ｂｌｏｔ分析测定对照组,凝血酶组脂多糖组单核细胞趋化蛋白－１ｍＲＮＡ表达情况;并用夹心酸联免疫吸附法检测各组条件培养基中单核细胞趋化蛋白－１蛋白表达情况。结果发现,凝血酶和脂多糖均能增加单核细胞趋化蛋白－１ｍＲＮＡ表达,但夹心酶联免疫吸附法显示仅凝血酶能增加单核细胞趋化蛋白－     

大鼠主动脉内皮损伤后原生型一氧化氮合成酶和内皮素-1基因表达的改变

采用Ｆｏｇａｒｔｙ导管损伤大鼠胸主动脉段内皮细胞，观察１、５、１５和２０天后胸主动脉组织形态学改变；提取胸主动脉段组织ＲＮＡ采用反转录－多聚酶链反应方法测定原生型一氧化氨合成酶基因和内皮素－１基因ｍＲＮＡ的表达。结果表明，胸主动脉压血管平滑肌细胞在内皮损伤后增殖，内皮素－１基因表达增加，原生型一氧化氮合成酶基因表达减少，提示原生型一氧化氮合成酶基因和内皮素－１基因表达的改变可能在内皮损伤后的平滑肌细胞增殖中起重要作用。     

白细胞介素－1受体拮抗剂对肺间质纤维化的影响

白细胞介素－１（ＩＬ－１）是一种具有多种生物活性的细胞因子，它参与了肺间质纤维化形成的过程。白细胞介素－１受体拮抗剂（ＩＬ－１ｒａ）能和ＩＬ－１竞争靶细胞表面受体，阻断ＩＬ－１的效应。为了探索治疗肺间质纤维化的新途径，我们在博莱霉素所致大鼠肺间质纤维化模型上，气管灌注重组人ＩＬ－１ｒａ，观察病理变化、胶原蛋白量以及转化牛长因子－βｍＲＮＡ在肺内表达的变化，评价ＩＬ－１ｒａ对肺间质纤维化形成的影响，结果发现这些指标在ＩＬ－１ｒａ治疗组和对照组间并无明显差异。     

单核细胞趋化蛋白-1对其表面淋巴细胞功能相关抗原-1、清道夫受体和载脂蛋白E表达的影响及雌二醇的干预作用

为研究单核细胞趋化蛋白－１对单核细胞表面淋巴细胞功能相关抗原－１、清道夫受体和载脂蛋白Ｅ表达的影响,采用培养人单核细胞株ＴＨＰ－１细胞,以间接免疫荧光法结合流式细胞术和激光共聚焦扫描显微镜分别检测淋巴细胞功能相关抗原－１和清道夫受体蛋白的表达,用逆转录－多聚酶链反应检测清道夫受体和载脂蛋白Ｅ ｍＲＮＡ的表达水平。结果显示,在单核细胞趋化蛋白－１刺激组淋巴细胞功能相关抗原－１和清道夫受体蛋白的表达明显高于对照组（Ｐ〈０．０１）;１７－β－雌二醇可抑制单核细胞趋化蛋白－１对ＴＨＰ－１细胞表面淋巴细胞功能相关抗原－１表达的促进作用（Ｐ〈０．０５）,但对单核细胞趋化蛋白－１促进清道夫受体表达的作用无明显影响;单核细胞趋化蛋白－１明显促进ＴＨＰ－１细胞清道夫受体ｍＲＮＡ的表达,而对载脂蛋白Ｅ ｍＲＮＡ的表达无明显影响。研     

大鼠组织中三磷酸肌醇受体亚型基因的表达

为观察大鼠心肌，小脑和培养的主动脉血管平滑肌细胞中三磷酸肌醇受体亚型的基因表达，用异硫氰酸胍－酸酚氯仿一步法抽提组织总ＲＮＡ，用特异性引物进行逆转录－聚合酶链式反应，β－ａｃｔｉｎ为内标半量定量检测三磷酸肌醇受体亚型ｍＲＮＡ的表达。将Ⅱ型ＰＣＲ产物重组，单克隆并测序。     

低氧致大鼠肺中血小板—衍化生长因子—β受体基因表达增强

观察血小板－衍化生长因子－β（ＰＤＧＦ－β）受体在低氧大鼠肺中基因表达的变化。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示正常大鼠肺中可表达ＰＧＤＦ－β受体的信使ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）。随低氧时间的延长ｍＲＮＡ水平迅速增加，至低氧第４日时达高峰，为正常的１．３倍（Ｐ〈０．０５）。免疫组化显示ＰＤＧＦ－β受体主要分布在肺的中、小动脉的平滑肌细胞及内皮细胞。随低氧时间的延长，其分布无变化，但密度显著增加，至低氧第７日时达高峰     

大鼠主动脉内皮损伤后原生型一氧化氮合成酶和内皮素-1基因表达的改变

采用Ｆｏｇａｒｔｙ导管损伤大鼠胸主动脉面内皮细胞，观察１、５、１５和２０天后胸主动脉组织形态学改变，提取胸主动脉段组织ＲＮＡ采用反转录－多聚酶链反应方法测定原生型一氧化氮合成酶基因和内皮素－１基因ｍＲＮＡ的表达，结果表明，胸主动脉段血管平滑肌细胞在内皮损伤后增殖，内皮素－１基因表达增加，原生型一氧化氮合成酶基因表达减少，提示原生型一氧化氮合成酶基因和内皮素－１基因表达的改变可能在内皮损伤后的平滑肌     

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的胎儿主动脉平滑肌细胞c－fos基因mRNA表达的影响

人主动脉硫酸乙酰肝素蛋白聚糖对培养的胎儿主动脉平滑肌细胞ｃ－ｆｏｓ基因ｍＲＮＡ表达的影响刘俊明，丛祥凤，张春玲，张英珊（中国医学科学院心血管病研究所，阜外医院，北京１０００３７）人主动脉壁中的蛋白聚糖与动脉粥样硬化斑块的形成密切相关，而平滑肌细胞（Ｓ...     

转化生长因子β_1对纤维母细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原及胶原酶mRNA表达的影响

目的纤维母细胞是重要的胶原合成细胞，观察转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）对纤维母细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原及胶原酶ｍＲＮＡ表达的影响，以了解ＴＧＦ－β１在肝纤维化中的作用机制。方法首先对含有Ⅰ、Ⅲ型前胶原及胶原酶ｃＤＮＡ片段的质粒进行扩增、提纯及酶切，然后用自由引物延伸法进行地戈辛标记，并对探针进行检测；其次对纤维母细胞进行培养，加用ＴＧＦ－β１孵育后收集细胞并提取细胞总ＲＮＡ，最后将ＲＮＡ点样于尼龙膜上，并与上述探针进行斑点杂交。结果杂交结果显示ＴＧＦ－β能明显促进纤维母细胞Ⅰ型前胶原ｍＲＮＡ的表达（Ｐ＜０．０５），也能促进其Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的表达（Ｐ＝０．０９）；而对其胶原酶ｍＲＮＡ的表达则起抑制作用（Ｐ＜０．０５）。结论ＴＧＦ－β可以从细胞及分子水平发挥其抗纤维化作用。     

低氧致大鼠肺中血小板－衍化生长因子－β受体基因表达增强

观察血小板。衍化生长因子－β（ＰＤＧＦ－β）受体在低氧大鼠肺中基因表达的变化。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示正常大鼠肺中可表达ＰＤＧＦ－β受体的信使ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）。随低氧时间的延长ｍＲＮＡ水平迅速增加，至低氧第４日时达高峰，为正常的１．３倍（Ｐ＜０．０５）。免疫组化显示ＰＤＧＦ－β受体主要分布在肺的中、小动脉的平滑肌细胞及内皮细胞。随低氧时间的延长，其分布无变化，但密度显著增加，至低氧第７日时达高峰，为正常的２．４倍（Ｐ＜０．０５）。提示ＰＤＧＦ－β受体基因表达增强在低氧性肺血管重建中起一定作用。