白细胞介素-1β及其受体拮抗剂对系膜细胞增殖及产生一氧化氮的影响

目的：探讨白细胞介素１β（ＩＬ１β）及其受体拮抗剂（ＩＬ１ｒａ）对系膜细胞增殖及产生ＮＯ的影响。方法：培养的第１０～１２代ＳＤ大鼠肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）用于实验,分别加入ＩＬ１β或ＩＬ１β加ＩＬ１ｒａ,１２ｈ后用化学方法测定培养上清中亚硝酸盐的含量,用３ＨＴＤＲ掺入率测定ＧＭＣ的增殖,狭缝和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交测定细胞ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达。结果：ＩＬ１β组ＧＭＣ出现ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达及亚硝酸盐增多（０５３±０１３ｖｓ０１８±００７ｎｍｏｌ／１０４细胞）,但无明显细胞增殖（４０４６０６±１９１２６ｖｓ３９７７９±２８０４１）;ＩＬ１β加ＩＬ１ｒａ组,无ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达,上清亚硝酸盐含量更高（０９４±０１５ｎｍｏｌ／１０４细胞）,ＧＭＣ增殖被抑制（３１１５５±３１３９８）。结论：ＩＬ１β能刺激ＧＭＣ的ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达和产生亚硝酸盐,ＩＬ１ｒａ虽抑制ＧＭＣ的ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达,但没能减少其亚硝酸盐的产生。     

TGF-β1和ECM与糖尿病肾病关系的实验研究

目的 观察高糖条件下大鼠肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）分泌细胞外基质（ＥＣＭ）成分中纤粘连蛋白（ＦＮ）、层粘连蛋白（ＬＡＭ）、Ⅱ及Ⅳ型胶原和转化生长因子β（ＴＧＦ－β１）的变化,探讨细胞因子和细胞外基质在糖尿病肾病发病中的作用。方法 采用体外大鼠肾小球系膜细胞培养,用ＥＬＩＳＡ方法测定培养上清液中的ＥＣＭ和ＴＧＦ－β１。结果（１）高糖条件下,ＧＭＣ合成和分泌ＴＧＦ－β１增加。（２）高糖对体外培养的系膜细     

系统性红斑狼疮患者白细胞介素—1受体拮抗剂基因多态性的？…

目的：阐明ＩＬ－１受体拮抗剂基因多态性对其功能的影响,论证ＩＬ－１ｒａ基因与系统性红斑狼疮之间联系的机制。方法：用ＰＣＲ方法对ＳＬＥ患者ＩＬ－１ｒａ基因型进行分析,从ＩＬ－１ｒａ不同基因型患者获取外周血单核细胞,观察单核细胞经ＧＭ－ＣＳＦ刺激后ＩＬ－１ｒａ,ＩＬ－α和ＩＬ－１β的产生能力。结果：携带ＩＬ－１ｒａ基因ＩＬ１ＲＮ＾＊２等位基因的ＳＬＥ患者其单核细胞ＩＬ－１ｒａ的产生能力明显低于不携带该     

肾小球系膜细胞白细胞介素—6基因表达与白细胞介？…

目的：探讨白细胞介素－１３（ＩＬ－１３）对于体外培养大鼠系膜细胞白细胞介素－６（ＩＬ－６）分泌及其基因表达的影响,以研究ＩＬ－３对肾小球疾病症状下肾脏系细胞炎症反应的抑制作用。方法：用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）测定系膜细胞ＩＬ－６分泌量,用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测系膜细胞ＩＬ－６ ｍＲＮＡ表达。结果：正常培养条件上系膜细胞ＩＬ－６ ｍＲＮＡ表达及ＩＬ－６分泌水平较低,脂多糖（ＬＰＳ     

系统性红斑狼疮患者白细胞介素-1受体拮抗剂基因多态性的功能研究

目的：阐明ＩＬ１ 受体拮抗剂（ＩＬ１ｒａ） 基因多态性对其功能的影响,论证ＩＬ１ｒａ 基因与系统性红斑狼疮（ＳＬＥ） 之间联系的机制。　方法：用ＰＣＲ 方法对ＳＬＥ 患者ＩＬ１ｒａ 基因型进行分析,从ＩＬ１ｒａ 不同基因型患者获取外周血单核细胞,观察单核细胞经ＧＭＣＳＦ 刺激后ＩＬ１ｒａ 、ＩＬ１α和ＩＬ１β的产生能力。　结果：携带ＩＬ１ｒａ 基因ＩＬ１ ＲＮ＊２ 等位基因的ＳＬＥ 患者其单核细胞ＩＬ１ｒａ 的产生能力明显低于不携带该等位基因的个体,而ＩＬ１α和ＩＬ１β的产生能力与是否携带ＩＬ１ＲＮ＊ ２ 等位基因无关　结论：ＩＬ１ｒａ 基因多态性能对其功能产生影响。携带ＩＬ１ ＲＮ＊２ 等位基因者其体内ＩＬ１ｒａ 的产生能力存在缺陷。该结果为临床上根据ＩＬ１ｒａ 基因型有针对地采取干预治疗奠定了基础。     

内毒素诱导肾小球系膜细胞白细胞介素—6的产生及基因表达

目的：观察体外培养的小鼠肾小球系膜细胞在内毒素（ＬＰＳ）诱导下ＩＬ－６的产生及其ｍＲＮＡ表达。方法：按经典方法培养肾小球系膜细胞（ＭＣ），转种培养后分为二组，诱导组加ＬＰＳ１０ｍｇ／Ｌ，对照组不加，用分子生物学和免疫学方法进行检测。结果：ＩＬ－６在正常ＭＣ中分泌量极微，其ｍＲＮＡ也为低水平表达，经ＬＰＳ诱导后二者均明显增加，ＩＬ－６蛋白的产生６～１２ｈ达高峰，比对照组增加３～５倍，ＩＬ－６ｍＲＮＡ     

GM—CSF及IL—4增强肝癌患者树突状细胞免疫功能

目的　探讨粒／ 巨噬细胞集落刺激因子（ ＧＭＣＳＦ） 及白介素４（ＩＬ４） 对正常成人及肝癌患者树突状细胞（ＤＣ） 表面人白细胞抗原（ＨＬＡ）ＤＲ 及Ｂ７２ 等免疫分子表达及其免疫功能的影响。方法　以ＧＭＣＳＦ 及ＩＬ４ 联合刺激正常成人（ｎ ＝ １０） 及肝癌患者（ｎ ＝ １０）ＤＣ,检测经ＧＭＣＳＦ 及ＩＬ４ 联合刺激前后ＤＣ 表面ＨＬＡＤＲ 及Ｂ７２ 表达水平及ＤＣ 免疫功能变化。结果　经ＧＭＣＳＦ 及ＩＬ４ 联合刺激后ＤＣ 表面ＨＬＡＤＲ 及Ｂ７２ 表达水平在肿瘤患者（６－７ ±１－６ 、６－１ ±１－１ 增至１３－１ ±２－３ 、１１－４ ±２－０ＶＯＦ,Ｐ＜ ０－０１） 及正常成人（１０－７ ±１－４ 、９－６ ±１－２ 增至１４ ±２－２ 、１１ ±１－７ＶＯＦ,Ｐ＜ ０－０５） 均有增高;该ＤＣ 免疫诱导能力亦相应增强（ 肝癌患者：由３１００ ±１２０ 增至６４００ ±１４０ｃｐｍ ,Ｐ＜ ０－０１ ;正常人：由６２００ ±９０ 增至７０００ ±１１０ｃｐｍ ,Ｐ＞ ０－０５） 。结论　ＧＭＣＳＦ 及ＩＬ４ 联合刺激能增强正常成人及肝癌患者ＤＣ 表面ＨＬＡＤＲ 及Ｂ７２ 表达水平并进一步增强ＤＣ 免疫功能。提示联合应     

雌二醇对兔血管平滑肌细胞诱导型一氧化氮合酶的影响

目的 通过测定兔血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）一氧化氮（ＮＯ）产物及诱导型一氧化氮 麦（ｉＮＯＳ）ｍＲＮＡ的表达。验证雌二醇影响恰在民的机制。方法 测定细胞培养液中硝酸盐和亚硝酸盐含量作为培养兔血管平滑肌细胞ＮＯ产物的指标,用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法检测培养兔血管平滑肌细胞ｉＮＯＳ表达。结果 （１）雌二醇呈时间依赖关系（０～２４ｈ,Ｐ〈０．０５）和剂量依赖关系（１０＾０－７～１０＾－２ｍｏｌ／Ｌ,Ｐ〉     

浅表性胃炎、胃粘膜不典型增生及胃癌组织中COX-1、COX-2、iNOS表达的意义

目的：研究ＣＯＸ－１、ＣＯＸ－２、ｉＮＯＳ于浅表性胃炎、胃粘膜不典型增生及胃癌中表达的意义,探讨ＣＯＸ－２,ｉＮＯＳ与胃癌、幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染的关系。方法应用多克隆抗体ＣＯＸ－１,ＣＯＸ－２、ｉＮＯＳ免疫组化方法检测３３例浅表性胃炎、３０例胃粘膜不典型增生、２９胃癌石蜡包埋组织中的ＣＯＸ－１、ＣＯＸ－２、ｉＮＯＳ表达情况及Ｈｐ感染率。结果ＣＯ２－２,ｉＮＯＳ在胃癌中的表达率明显高于浅表性胃炎（     

嗜酸细胞凋亡在激素抵抗型哮喘中的意义

目的 观察激素抵抗型（ＳＲ）哮喘是否存在嗜酸细胞（ＥＯＳ）凋亡功能的异常及促炎症细胞因子白细胞介素５（ＩＬ－５）和粒－巨细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）的调节作用。方法 分离ＳＲ（１５例）、激素敏感型（ＳＳ,３０例）两组哮喘患外周血单个核细胞（ＰＢＭＣＳ）及ＥＯＳ,体外培养后测定：（Ｆ１）ＰＢＭＣＳ在糖皮质激素处理前、后和细胞因子的能力;（２）自发的或糖皮质激素诱导的或用ＰＢＭＣＳ培养上液处理后     

巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）抑制c—kit的表达

已经证实细胞原癌基因ｃ－ｋｉｔ的蛋白产物是造血干细胞因子（ＳＣＦ）或肥大细胞生长因子（ＭＧＦ）的细胞膜上受体，对于造血细胞增殖和分化调节起重要作用，ｃ－ｋｉｔ的表达受到多种细胞因子的调节，其中已知ＩＬ－４，和ＴＧＦ－β可抑制它的表达，所来许多实验都发同ＳＣＦ与ＩＬ－３，ＧＭ－ＣＳＦ，Ｇ－ＣＳＦ，ＥＰＯ，ＩＬ－１和ＩＬ－６对造血有协同增强作用，但是Ｍ－ＣＳＦ无协同作用，Ｍ－ＣＳＦ的受体是原癌基因ｃ－     

rhIL—6,rhGM—CSF和rhEPO对人造血干细胞的作用

重组人白细胞介素 ６和重组人粒－单细胞集落刺激因子与正常人造血干细胞培养１周后，ＩＬ－６组细胞数增至４．３±０．６倍，ＧＭ－ＣＳＦ组细胞数增至９．４±０．９倍；ＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ组细胞数增至１３．７±１．０倍，明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。红系集落生成单位集落分析：ＩＬ－６单独应用未见ＣＦＵ－Ｅ集落形成，仅有粒－单细胞集落生成单位集落形成；ＩＬ－６＋促红细胞生成素且则ＣＦＵ－Ｅ集落数明显高于     

巨噬细胞集落刺激因子（M－CSF）抑制c－kit的表达

已经证实细胞原癌基因ｃ－ｋｉｔ的蛋白产物是造血于细胞因子（ＳＣＦ）或肥大细胞生长因子（ＭＧＦ）的细胞膜上受体，对于造血细胞增殖和分化调节起重要作用。ｃ－ｋｉｔ的表达受到多种细胞因子的调节，其中已知ＩＬ－４和ＴＧＦ－β１可抑制它的表达。近来许多实验都发现ＳＣＦ与ＩＬ－３，ＧＭ－ＣＳＦ，Ｇ－ＣＳＦ，ＥＰＯ，ＩＬ－１和ＩＬ－６对造血有协同增强作用，但与Ｍ－ＣＳＦ无协同作用。Ｍ－ＣＳＦ的受体是原癌基因ｃ－ｆｍｓ的蛋白产物，与ｃ－ｋｉｔ的产物一样属单链穿膜的具磷酸化激酶活性的受体。我们应用小鼠巨噬细胞为模型，发现Ｍ－ＣＳＦ抑制ｃ－ｋｉｔ的表达，可能是这两种造血刺激因子无协同作用的原因。     

白细胞介素—1,—6对鼠甲状腺FRTL—5细胞间通讯的影响

为探讨细胞因子对细胞间通讯的影响，应用荧光光淬灭后恢复技术研究白细胞介素（ＩＬ）－１、ＩＬ－６及促甲状腺激素（ＴＳＨ）对鼠甲状腺ＦＲＴＬ－５细胞与细胞间通讯的作用。将培养的ＦＲＴＬ－５细胞加入不同浓度的ＴＳＨ、ＩＬ－１β、ＩＬ－６继续培养１２小时后作荧光染色，以激光扫描仪测定平均荧光恢复速率（ＭＦＲＲ）作为通讯程度的定量指标。结果：（１）用ＴＳＨ后细胞ＭＦＲＲ（单位：％／ｍｉｎ）对照组为０．４４５±０．０３３，０．１、１、５Ｕ／Ｌ组分别为０．６７９±０．０５４、０．９５０±０．０７３、０．７９９±０．０８２（Ｐ＜０．０１）。（２）用ＩＬ－１β后ＭＦＲＲ对照组为０．５６４±０．０３２，１０３、１０４、１０５Ｕ／Ｌ组分别为０．４８５±０．０４２、０．４４５±０．０４３、０．４０５±０．０２９（Ｐ＜０．０１）。（３）ＩＬ－６对ＦＲＴＬ－５细胞胞间通讯无明显影响。提示ＴＳＨ可增强ＦＲＴＬ－５细胞间的通讯，ＩＬ－１β可抑制ＦＲＴＬ－５细胞间的通讯，其作用与ＴＳＨ及ＩＬ－１β的剂量有关。     

细菌脂多糖对小鼠巨噬细胞生长的调节作用

目的研究细菌脂多糖对小鼠巨噬细胞的生长调节作用。方法应用小鼠腹腔渗出性巨噬细胞（ＰＥＭ）和巨噬细胞株Ｊ７７４Ａ．１为靶细胞，测定细菌脂多糖（ＬＰＳ）对Ｍ－ＣＳＦ和ＧＭ－ＣＳＦ刺激的巨噬细胞集落细胞形成的影响，同时用１２５Ⅰ标记的ＧＭ－ＣＳＦ受体结合实验测定了ＬＰＳ对巨噬细胞膜上的ＧＭ－ＣＳＦ受体数目的调节。用反向ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测ＴＴＧＦ－β１对巨噬细胞产生ＩＦＮ－γ的作用。结果ＬＰＳ单独对巨噬细胞无生长调节作用，但可抑制ＧＭ－ＣＳＦ对巨噬细胞的增殖效应。而在ＴＧＦ－β１同时存在下，ＬＰＳ的抑制效应被消除。ＲＴ－ＰＣＲ证实ＬＰＳ诱生巨噬细胞产生的ＩＦＮ－γ可被ＴＧＦ－β１有效地抑制．而已知ＩＦＮ－γ是强烈的巨噬细胞生长抑制因子。此外，１２５Ⅰ－ＧＭ－ＣＳＦ受体结合实验发现，同ＴＧＦ－β１一样ＬＰＳ增强ＧＭ－ＣＳＦ受体数目的表达。结论ＬＰＳ参与了多种细胞因子对巨噬细胞生长的调节网络，根据存在的细胞因子不同，表现为抑制和增殖的双重作用。     

血小板活化因子介导过氧化氢诱导肾小球系膜细胞-白细胞粘附

目的：研究过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）对肾小球系膜细胞－中性粒细胞（ＧＭＣ－ＰＭＮ）粘附的影响及其机制。方法：用体外培养的人肾小球系膜细胞与不同浓度血小板活化因子（ＰＡＦ）或Ｈ２Ｏ２作用，并以各类拮抗剂观察其对ＧＭＣ－ＰＭＮ粘附的影响。结果：不同浓度Ｈ２Ｏ２促进ＧＭＣ依赖性ＰＭＮ粘附，以１０－２ｍｏｌ／Ｌ浓度的作用最强，使ＰＭＮ粘附率增强２．２倍。用ＰＡＦ受体拮抗剂预处理ＰＭＮ对粘附无影响。预处理ＧＭＣ可显著降低粘附率，磷酯酶Ａ２抑制剂对溴基苯酰基溴、钙调蛋白抑制剂氯丙嗪和钙离子螯合剂ＥＧＴＡ预处理ＧＭＣ，均能降低Ｈ２Ｏ２引起的ＧＭＣ－ＰＭＮ粘附。结论：Ｈ２Ｏ２可促进ＧＭＣ与ＰＭＮ的粘附。Ｈ２Ｏ２的这一作用可能是通过ＰＡＦ介导的。     

非淋巴细胞白血病原代细胞诱导成树突状细胞的研究

目的：用白血病细胞诱导树突状细胞,为白血病的免疫治疗提供新途径。方法：分离人的非淋巴细胞白血病原代细胞,体外流体培养体系中加入ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α及ＩＬ－４,培养１２ｄ后,与培养前的细胞在形态、ＣＤ１ａ、ＨＬＡ－ＤＲ及ＣＤ８０的表达情况进行比较。结果：经１２ｄ诱导,细胞形态表现典型的树突状细胞的特征;ＣＤ１ａ、ＨＬＡ－ＤＲ及ＣＤ８０的表达明显增高。结论：可将非淋巴细胞白血病原代细胞诱导成树突状     

内毒素诱导肾小球系膜细胞白细胞介素─6的产生及基因表达

目的：观察体外培养的大鼠肾小球系膜细胞在内毒素（ＬＰＳ）诱导下ＩＬ┐６的产生及其ｍＲＮＡ表达。方法：按经典方法培养肾小球系膜细胞（ＭＣ）、转种培养后分为二组，诱导组加ＬＰＳ１０ｍｇ／Ｌ，对照组不加，用分子生物学和免疫学方法进行检测。结果：ＩＬ┐６在正常ＭＣ中分泌量极微，其ｍＲＮＡ也为低水平表达，经ＬＰＳ诱导后二者均明显增加。ＩＬ┐６蛋白的产生６～１２ｈ达高峰，比对照组增加３～５倍，ＩＬ┐６ｍＲＮＡ的表达３～６ｈ达高峰，较对照组增加２～３倍。结论：ＬＰＳ可诱发系膜细胞ＩＬ┐６水平增高，可能作为炎症介质参与肾脏疾病的发病，在系膜增殖性肾炎发病中起一定作用     

脂多糖和细胞因子刺激肾小球系膜细胞合成PAF的研究

本研究首先建立了血小板活化因子（ＰＡＦ）生物活性检测法，并测定了体外培养的系膜细胞经ＩＬ－１β，ＩＬ－６和ＴＮＦα刺激后，其培养上清中ＰＡＦ的含量。结果发现，上述细胞因子均能刺激系膜细胞合成ＰＡＦ，并呈一定的剂量依赖关系，ＩＬ－１β，ＩＬ－６和ＴＮＦα通过这一途径而间接地发挥病理作用，加剧肾小球损害。     

氨茶碱体外诱导人嗜酸细胞凋亡的研究

嗜酸细胞（ＥＯＳ）是支气管哮喘的关键效应细胞，ＥＯＳ浸润增加是其显著的病理特征。近年来研究表明，氨茶碱不仅具有支气管扩张作用，还有免疫调节和抗炎作用。我们观察了氨茶碱对白细胞介素５（ＩＬ５）、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）和ＩＬ３介导的体外ＥＯＳ存活和凋亡的影响，以进一步阐明氨茶碱的作用机制。材料与方法　（１）主要材料：人重组ＩＬ３、ＩＬ５、ＧＭＣＳＦ由美国ＧｅｎｅｔｉｃｓＩｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＧＩ）ＭｅｇＯ′Ｄｏｎｅｌｌ教授惠赠。Ｐｅｒｃｏｌｌ分离液购自瑞典Ｐｈａｒｍａｃ…