四逆汤(附子、干姜、甘草)对肾血管性高血压大鼠血压调节作用的实验研究

目的 探讨四逆汤对肾血管性高血压大鼠血压的调节作用和可能的机制.方法 健康雌性Wistar大鼠24只,随机分为正常组、对照组和治疗组,每组8只.根据双肾动脉夹闭法建立肾性高血压动物模型,应用四逆汤(附子、干姜、甘草)灌胃治疗2周,RBF-2型鼠尾动脉血压计测量血压,放射免疫法测定血浆中血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和降钙素基因相关肽(CGRP)的含量,TUNEL法检测肾组织细胞凋亡,免疫组化法测定肾组织中Ang Ⅱ和CGRP的表达.结果 (1)对照组和治疗组大鼠血压较正常组明显升高,四逆汤能明显降低血压[(131.6±14.2 vs 116.2±8.3)mm Hg,P＜0.05].(2)各组动物血浆AngⅡ水平无显著性变化(P＞0.05),治疗组CGRP含量较对照组明显升高[(75.2±12.2 vs 54.8±18.1)pg/mL,P＜0.05].(3)四逆汤治疗明显减少肾小球凋亡阳性细胞数(12.6±3.5 vs 29.4±3.5细胞个数/10个视野, P＜0.05);治疗组明显降低AngⅡ表达水平,显著升高CGRP表达水平(P＜0.05).结论 四逆汤可能通过调节肾血管性高血压大鼠血浆和肾组织中血管活性物质Ang Ⅱ和CGRP的水平,发挥其血压调节和保护高血压靶器官的作用.     

黄芪对高血压大鼠肾脏血管紧张素转换酶2表达的影响

目的探讨两肾一夹(2K1C)高血压大鼠肾脏血管紧张素转换酶2(ACE2)表达。了解甘肃黄芪对大鼠肾脏ACE2mRNA表达及血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的影响,观察黄芪的降压效果。方法50只雄性Wistar大鼠随机分为5组:正常对照组(n=10);2K1C高血压组(n=10);2K1C+缬沙坦组(n=10);2K1C+黄芪20g/(kg.d)组(n=10);2K1C+黄芪10g/(kg.d)组(n=10)。8周后,用RT-PCR法检测肾脏ACE2mRNA表达,免疫组化法检测肾脏ACE2表达,放射免疫分析法测定肾脏局部AngⅡ水平。结果2K1C高血压大鼠肾脏ACE2mRNA表达较正常大鼠降低(0.282±0.025vs0.359±0.017,P<0.05),高、低剂量黄芪及缬沙坦治疗大鼠ACE2mRNA表达(0.398±0.004,0.391±0.006,0.403±0.009)均高于对照组(0.282±0.025)(P<0.05)。高剂量黄芪组降低肾脏局部AngⅡ效果较缬沙坦组明显(P<0.01)。缬沙坦和黄芪治疗都明显降低血压(P<0.01)。结论2K1C高血压大鼠肾脏组织中ACE2mRNA表达降低。甘肃黄芪及缬沙坦在降压的同时增加肾脏组织ACE2mRNA表达。     

四逆汤对肾性高血压大鼠主要靶器官血管活性物质表达的影响

目的研究四逆汤对肾性高血压大鼠主要靶器官血管活性物质表达的影响。方法健康雌性Wistar大鼠24只，随机分为正常对照组、肾性高血压组和四逆汤治疗组，每组8只。根据双肾动脉夹闭法建立肾性高血压动物模型，免疫组化法测定心、脑、肾组织内皮素受体A（ETRA）、一氧化氮合酶（NOS）、血管紧张素Ⅱ（Ang—Ⅱ）、降钙素基因相关肽（CGRP）的表达。结果①各靶器官ETRA表达水平，肾性高血雎组均显著高于正常对照组（P〈O．05）；四逆汤治疗组在肾和心均显著低于肾性高血压组（P〈0．05），但在脑无显著性差异（P〉0．05）。②肾和脑iNOS表达水平，肾性高血压组显著高于正常对照组（P〈0．05）；四逆汤治疗组明显低于肾性高血压组（P〈0．01）。心脏eNOS表达水平，肾性高血压组显著低于正常对照组（P〈0．01），治疗组显著高于高血压组（P〈0．01）。③各器官CGRP表达水平，肾性商血压组较正常对照组均显著升高（P〈0．05）；四逆汤治疗组较肾性高血压组均明显降低（P〈0．01）；④Ang—Ⅱ在肾和心的表达水平，四逆汤治疗纰较肾性高血压组均明显降低（P〈0．05），但在脑无显著性差异（P〉0.05）。结论四逆汤可能通过调节肾性高血压大鼠肾、心、脑组织中ETRA、NOS、Ang—Ⅱ和CGRP的表达水平，发挥其血压调节作用。     

LNK在高血压血管重构中的作用研究

目的 探讨LNK在高血压血管重构中的作用。方法 选取大鼠胸主动脉平滑肌细胞，在一定条件下构建高血压细胞模型；根据不同处理方法分为空白对照组，AngⅡ+空白组，AngⅡ+空载组，AngⅡ+LNK重组质粒组;流式细胞仪检测VSMC周期、凋亡及增殖的水平；ELISA检测IL-6、TNF-α、IFN-γ的表达水平。结果 ①各组大鼠血管平滑肌细胞周期、凋亡及增殖的水平：与空白对照组比较，AngⅡ+空白组和AngⅡ+空载组VSMC处于G0/G1期减少[(71.357±0.312)%比(67.480±0.613)%、(67.053±0.321)%]，S期增加[(21.517±0.254)%比(24.003±0.748)%、(22.927±0.178)%]，G2/M期增加[(7.137±0.159)%比(8.483±0.618)%、(10.020±0.364)%]，差异有统计学意义（P<0.05）；与AngⅡ+空载组比较，AngⅡ+LNK重组质粒组VSMC处于G0/G1期增加[(67.053±0.321)%比(70.810±1.470)%]，S期减少[(22.927±0.178)%比(21.867±0.676)%]，G2/M期减少[(10.020±0.364)%比(7.320±1.002)%]，差异有统计学意义（P<0.05）； AngⅡ+LNK重组质粒组VSMC细胞凋亡率高于AngⅡ+空白组和AngⅡ+空载组[(5.210±0.053)%比(4.503±0.223)%、(3.837±0.546)%]（P<0.05）；AngⅡ+LNK重组质粒组VSMC细胞增殖水平低于AngⅡ+空白组和AngⅡ+空载组[(1.263±0.053)比(1.482±0.104)、(1.480±0.092)]（P<0.05）。②各组大鼠血管平滑肌细胞上炎性细胞因子水平：与空白对照组相比，AngⅡ+空白组和AngⅡ+空载组IL-6[(176.023±16.776)比(264.560±12.368)、(486.147±41.893)]、TNF-α[(8.563±0.667)比(15.738±0.995)、(20.389±1.274)]、IFN-γ[(631.117±26.551)比(1097.271±32.303)、(1207.185±38.949)]水平升高，AngⅡ+LNK重组质粒组IL-6[(157.410±12.456)]、IFN-γ[(723.270±15.317)]表达降低，差异具有统计学意义（P<0.05）；与AngⅡ+空白组和AngⅡ+空载组相比，AngⅡ+LNK重组质粒组的IL-6[(264.560±12.368)、(486.147±41.893)比(157.410±12.456)]、TNF-α[(15.738±0.995)、(20.389±1.274)比(8.394±0.190)]、IFN-γ[(1097.271±32.303)、(1207.185±38.949)比(723.270±15.317)]表达降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 LNK通过介导炎症反应影响血管平滑肌的周期、凋亡及增殖参与高血压血管重构。     

阿托伐他汀钙对肾血管性高血压大鼠模型左室重构的影响

目的观察阿托伐他汀钙对肾血管性高血压大鼠左室重构的保护作用。方法应用经典的两肾一夹方法,制备肾血管性高血压大鼠模型。实验动物随机分对照组(假手术)、高血压组及治疗组,每组各7只。治疗组给予阿托伐他汀钙(立普妥2 mg/kg)治疗6周。采用鼠尾测压法测定大鼠血压的变化;放射免疫分析法测定大鼠血浆血管紧张素(Ang)Ⅱ含量和肾素活性;称量法计算各组大鼠心脏重量及左室重量与体重比值。结果高血压大鼠血浆AngⅡ含量和肾素活性分别为(106.4±7.8)ng/L和(20.6±2.4)ng/L,比对照组〔(72.3±5.4)ng/L和(12.5±3.7)ng/L〕明显增高(P<0.01);心脏重量为(1.46±0.09)g,左室重量与体重比值为(3.54±0.19)×10-3,比对照组〔(0.98±0.07)g和(2.28±0.06)×10-3〕显著增大(P<0.01)。给予小剂量阿托伐他汀钙治疗6周后,AngⅡ含量〔(68.3±6.9)ng/L〕和肾素活性〔(8.7±2.3)ng/L〕明显下降(P<0.01),心脏重量减至(1.05±0.04)g,左室重量与体重比值降至(2.36±0.07)×10-3,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论阿托伐他汀钙能明显降低高血压大鼠心脏重量及左室重量与体重比值,对高血压大鼠病理性左室重构具有保护作用。     

肾性高血压大鼠血液及脑组织血管活性物质的表达及意义

采用双肾动脉夹闭法建立肾性高血压大鼠模型,4周后测量血压、NO、内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)和血管紧张素Ⅱ(AT-Ⅱ)水平,免疫组化法测定脑组织内皮素受体A(ETRA)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、AT-Ⅱ、CGRP的表达.结果:①肾性高血压组血压明显升高.②血清NO和血浆CGRP、ET明显升高(P＜0.05),AT-Ⅱ无显著变化(P＞0.05).③肾性高血压组血压随血清CGRP的升高而升高,随血清NO的升高而下降.④肾性高血压组ETRA、iNOS和CGRP表达水平显著高于正常对照组(P＜0.05).认为肾性高血压早期血液中CGRP、NO可能对血管及脑组织起主要作用.     

加味四逆汤对充血性心力衰竭大鼠血管紧张素Ⅱ、醛固酮及心功能的影响

目的探讨加味四逆汤对充血性心力衰竭大鼠血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)及心功能的影响。方法选取雄性大鼠40只,随机分为空白组、假手术组、模型组及加味四逆汤处理组,各10只。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支制备心肌梗死后心力衰竭模型为模型组,空白组为不经任何处理的正常大鼠,假手术组为开胸不进行心脏血管手术处理大鼠,加味四逆汤处理组给予加味四逆汤灌胃,连续给药分别在心力衰竭早期和晚期应用超声心动图检测4组大鼠心功能,放射免疫法测定4组大鼠AngⅡ及ALD水平,RT-PCR及Western印迹法分别检测4组大鼠心脏血管紧张素转化酶(ACE)及血管紧张素1型受体(AT1R)mRNA和蛋白表达水平。结果与空白组和假手术组比较,模型组和加味四逆汤处理组大鼠左心室射血分数(LVEF)明显降低(P<0.05),而左心室收缩末期内径(LVESD)及左心室舒张末期内径(LVEDD)均明显增加(P<0.05);模型组和加味四逆汤处理组血浆AngⅡ及ALD、心脏ACE和AT1R mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,加味四逆汤处理组LVEF明显升高(P<0.05),LVESD及LVEDD明显降低(P<0.05);AngⅡ及ALD水平及心脏ACE和AT1R mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论加味四逆汤通过抑制心力衰竭大鼠心脏AngⅡ、增强ALD活性,从而改善充血性心力衰竭大鼠心功能。     

培哚普利对自发性高血压大鼠内源性一氧化碳的影响

目的探讨培哚普利对自发性高血压大鼠(SHR)内源性一氧化碳(CO)产生的影响。方法选取自发性高血压大鼠(SHR)及年龄、体质量相匹配的正常血压(WKY)大鼠各16只,随机各分为培哚普利组和对照组(各8只),胃内分别注入培哚普利2mg/(kg.d)或等量生理盐水14d,于试验开始前一天和结束当天分别采血,应用连二亚硫酸钠将血液中的多组分血红蛋白还原为血红蛋白(Hb)和碳氧血红蛋白(COHb),用双波长分光光度法测定全血420nm和432nm的吸光度,计算出COHb的百分含量,并用放射免疫技术检测血浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的水平。结果培哚普利治疗后,WKY大鼠血压、AngⅡ及COHb百分含量无变化;但SHR血压及血浆AngⅡ含量明显降低[SHR组收缩压:培哚普利组:(153.5±10.1)比对照组:(170.6±11.4)mmHg,P<0.01;SHR组AngⅡ:培哚普利组:(427.7±31.7)比对照组:(529.7±40.5)pg/mL,P<0.01],培哚普利还明显升高COHb百分含量[SHR组COHb:培哚普利组:(1.40±0.14)%比对照组:(1.28±0.10)%,P=0.01]。SHR培哚普利组用药后较用药前血压和AngⅡ明显降低(P<0.05),而COHb百分含量明显升高[(1.40±0.14比1.29±0.16)%,P=0.001],实验结束时SHR培哚普利组和对照组COHb含量与AngⅡ浓度均呈负相关(r分别为-0.54和-0.49,P<0.05)。结论培哚普利可能通过抑制AngⅡ的生成,使内源性CO的产生增加。     

降压胶囊联合尼莫地平对自发性高血压大鼠ET、CGRP及AngⅡ水平的影响

目的观察中药复方降压胶囊联合尼莫地平对高血压和左心室肥厚的治疗作用及其对血浆AngⅡ、ET、降钙素基因相关肽(CGRP)水平的影响。方法将40只自发性高血压大鼠(SHR)随机分为降压胶囊加尼莫地平组、降压胶囊组、尼莫地平组和SHR模型组,每组10只。连续灌胃给药8w。分别在实验前、给药4w和8w后,用尾动脉脉压法监测各组动物的血压和心率;给药8w后,放免法检测血浆AngⅡ、ET、CGRP水平,计算左室重量指数。结果与模型组比,降压胶囊联合尼莫地平组有较好的降压效果,且血浆ET、AngⅡ水平显著降低(P<0.05,P<0.01)、血浆CGRP水平显著升高(P<0.05),左室重量及其指数均显著降低(P<0.05)。结论降压胶囊联合尼莫地平能抑制ET、AngⅡ的生物活性,促进CGRP的释放,从而降低血压和减轻左心室肥厚。     

肾性高血压大鼠脑ATP酶活性和血管紧张素Ⅱ水平及厄贝沙坦的干预

目的 探讨厄贝沙坦对肾性高血压大鼠(RHR)脑Na+,K+-ATPase、Ca2+ -ArPase及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的影响.方法 采用两肾一夹制造肾血管性高血压模型,18只造模成功的RHR随机分为模型组(RHR)、厄贝沙坦组(50 mg· kg-1 ·d-1)、停药组,另设假手术组对照,每组6只,测量各组大鼠用药前后血压;用药8 w后,分别用生化酶学方法和放射免疫技术检测大鼠大脑皮质、海马Na+,K+-ATPase、Ca2+ -ATPase活性及AngⅡ水平.结果 RHR血压[(189±15) mmHg]明显高于对照组[(134±9) mmHg];厄贝沙坦治疗后,血压明显下降[(123±7)mmHg],停药后,血压明显上升[( 154±10) mmHg].与假手术组比较,RHR大脑皮质、海马Na+,K+-ATPase、Ca2+ -ATPae活性明显降低.厄贝沙坦对Na+,K+ -ATPase活性无明显影响,但能明显升高Ca2+ -ATPase活性,停药后Ca2+ -ATPase活性明显下降.厄贝沙坦能明显升高血浆、大脑皮质、海马的AngⅡ水平,停药后血浆AngⅡ水平无明显改变,大脑皮质、海马的AngⅡ水平明显下降.RHR脑Ca2+ -ATPase与局部AngⅡ水平呈显著负相关.结论 厄贝沙坦影响RHR脑Ca2 -ATPase活性及AngⅡ水平,Ca2+ -ATPase活性降低可能与局部AngⅡ升高有关.停药后循环和大脑局部AngⅡ及Ca2+ -ATPase活性变化,可能是高血压反跳的机制之一.