ATF6对骨肉瘤MCA205细胞免疫原性的调控作用及其机制的初步探索

目的：探讨活化转录因子 6（ATF6）对骨肉瘤细胞 MCA205 免疫原性的影响,初步解析其调控机制。方法：利用CRISPR-Cas9技术敲除MCA205细胞的Atf6基因,借助CCK-8实验、细胞能量代谢检测、流式细胞术、ATP检测试剂盒、干扰素刺激响应元件（ISRE）-荧光素酶报告细胞实验和qPCR法分别检测野生型（WT）和Atf6-/- MCA205细胞在PBS或衣霉素（Tm）处理后的活力、线粒体耗氧速率（OCR）和胞外酸化速率（ECAR）、磷脂酰丝氨酸外翻和细胞膜通透性、胞内钙离子动员、胞内外ATP浓度、IFN-a/b分泌和干扰素刺激基因（ISG）的表达水平。在免疫系统健全的小鼠皮下接种WT或Atf6-/- MCA205细胞,比较两者的成瘤速度、肿瘤组织基因转录图谱、局部抗肿瘤效应T细胞活化有无差异。将WT和Atf6-/- MCA205细胞分别接种于nu/nu小鼠背部两侧皮下,或将Atf6-/- MCA205细胞分别接种于免疫系统健全小鼠和Ifnar-/-小鼠皮下,记录肿瘤生长曲线。分别用Tm预处理的WT和Atf6-/- MCA205细胞对na?ve小鼠（未经免疫刺激的小鼠）进行初次免疫,使肿瘤抗原特异性T细胞发生初次活化（prime）,随后收集引流淋巴结细胞并进行体外再刺激（boost）,分析特异性T细胞再次活化有无差异。按照不同的效靶比,将NK细胞与染料标记的WT和Atf6-/- MCA205细胞共培养,流式细胞术检测细胞杀伤情况。结果：PBS或Tm处理后,WT和Atf6-/-骨肉瘤细胞活力和增殖、氧化磷酸化和糖酵解、离子霉素触发的胞内钙离子动员、胞内外ATP和IFN-a/b分泌均无显著差异。Tm处理后,Atf6-/-细胞死亡比例低于WT细胞（P<0.01）。在免疫系统健全的小鼠体内,Atf6-/-肿瘤的生长速度明显低于WT肿瘤（P<0.05）。然而,在缺乏T细胞的nu/nu小鼠体内,两种肿瘤生长速度的差异显著缩小。与免疫系统健全的小鼠相比,Ifnar-/-小鼠体内Atf6-/-肿瘤的生长速度略快（P<0.05）。Atf6-/-肿瘤内免疫应答相关基因的表达、效应T细胞的活化均显著高于WT肿瘤（P<0.05）。与WT MCA205细胞相比,Atf6-/- MCA205细胞与NK细胞共培养后死亡比例更高（P<0.05）。在Tm刺激后,Atf6-/- MCA205细胞比WT细胞表达更多的Irf3和Irf7,前者在prime-boost实验中可刺激T细胞分泌更多的IFN-g。结论：阻断ATF6信号通路能显著增强MCA205细胞的免疫原性,促进免疫监视,阻碍肿瘤进展。     

砷剂调控肿瘤细胞命运的机制及激活抗肿瘤免疫的潜力

中药砷剂的主要活性成分是三氧化二砷（arsenic trioxide，ATO），对急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia，APL）等血液肿瘤显示出良好的临床疗效。尽管ATO在体外实验中能高效杀伤多种癌细胞，其单药治疗实体肿瘤的临床获益却并不理想，而联合用药以及药物靶向递送等策略也尚未取得突破。ATO药物作用机理复杂，可诱导活性氧的生成、抑制谷胱甘肽过氧化物酶及多种代谢限速酶的活性、引发细胞氧化应激、激活线粒体介导的细胞凋亡通路等。长期以来，ATO的细胞毒性及其诱导肿瘤细胞死亡的机制一直是研究的重点，ATO能否增强肿瘤细胞的免疫原性、调控抗肿瘤免疫应答尚存在认知空白。本文总结ATO的临床应用现状，归纳了其对多种细胞死亡方式的影响，分析了相关分子机制。此外，基于诱导免疫原性细胞死亡的理念，本文初步探讨了利用砷剂制备预防型及治疗型肿瘤全细胞疫苗的可能，并展望了该疫苗联合多种免疫治疗策略提升实体瘤疗效的思路和可能性。