人Tim-3基因克隆及其转基因细胞的构建

目的克隆人Tim-3基因,并构建含有该目的基因的重组真核表达载体,获得稳定表达人Tim-3分子的L929基因转染细胞。方法采用RT-PCR方法从人外周血T淋巴细胞中克隆出Tim-3基因,通过双酶切（XhoI,Sa-lI）装入真核表达载体pIRES2-EGFP中,脂质体法转染L929细胞,72 h后加入G418进行筛选,挑选出能稳定表达Tim-3蛋白的L929细胞株。结果构建了用于表达的含Tim-3基因的重组真核表达载体,经脂质体转染L929细胞,继而经RT-PCR和流式细胞术表型检测,筛选出稳定表达人Tim-3蛋白的L929转基因细胞。结论构建了含人Tim-3基因重组真核表达载体和稳定表达人Tim-3蛋白的细胞株,为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础。     

肿瘤浸润淋巴细胞及其亚群在肿瘤免疫中的作用

肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)在宿主抗原特异性肿瘤免疫应答中具有关键的作用,可通过直接的细胞毒性T淋巴细胞和分泌细胞因子产生高效、特异性强的抗肿瘤杀伤效应。TILs包括T细胞,少量的B细胞、NK细胞、巨噬细胞和树突状细胞等,其中效应细胞包括细胞毒性T淋巴细胞,如CD8~+T细胞、部分CD4~+T细胞;多种调节型淋巴细胞,如巨噬细胞、髓源性抑制细胞(MDSC)和Tregs等。多种细胞在肿瘤微环境中共同发挥作用。该文就TILs及其亚群的作用机制、研究进展等作一综述。     

髓系来源抑制细胞在胃癌患者外周血和肿瘤组织中的数量及其临床意义

目的观察髓系来源抑制细胞(MDSC)在胃癌患者外周血的数量和肿瘤组织、癌旁组织的表达,探讨MDSC的数量与胃癌患者临床病理特征间的关系。方法收集62例胃癌患者外周血和其中12例患者的新鲜肿瘤组织和癌旁组织以及20份健康志愿者外周血,流式细胞仪分析HLA-DR-CD33+CD11b+MDSC的数量,采用One-way ANOVA和Mann-Whitney U检验以及t检验分析胃癌患者外周血MDSC的数量与肿瘤的浸润深度、分化程度、患者TNM分期和淋巴结转移的关系。结果和健康志愿者相比,初诊胃癌患者外周血MDSC数量增加(P0.01);MDSC在胃癌患者外周血的数量与肿瘤的浸润深度、分化程度、患者TNM分期和淋巴结转移显著相关(P0.05);MDSC在同一病人胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织;复发/转移组患者外周血MDSC的数量明显高于无复发/转移患者(P0.05);胃癌患者外周血HLA-DR-CD33+CD11b+MDSC高表达负性协同刺激分子T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)。结论 MDSC在胃癌患者外周血的数量与肿瘤恶性程度及复发转移密切相关。     

IL-33/ST2信号与Treg在免疫性疾病中的研究进展

白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)作为白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)家族的成员,是由受损或坏死的屏障细胞(内皮细胞和上皮细胞)释放的内源性细胞因子。IL-33信号转导依赖于特异性受体生长刺激表达基因2蛋白(growth stimulation expressed gene 2,ST2)的识别和相互作用,ST2主要表达于免疫细胞。IL-33通过靶向T H2细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、2型先天性淋巴细胞(2 innate lymphoid cells,ILC2)调控2型免疫反应,也可以通过CD8+T细胞、天然杀伤细胞(natural killer cell,NK)和树突状细胞调控1型免疫反应。最近研究发现,IL-33/ST2信号转导影响调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)在外周的动态平衡、表型多样性和功能。Treg是建立和维持免疫自身耐受所必需的,因此,研究IL-33/ST2信号在Treg生物学中的作用对免疫性疾病治疗具有重要意义。该文讨论IL-33/ST2信号对Treg的不同影响,以期为肿瘤、炎症和自身免疫病的诊疗提供参考。     

中性粒细胞在肿瘤免疫治疗中的作用及研究进展

中性粒细胞是先天免疫应答中重要的效应细胞之一,具有调节炎症反应、自身免疫和急性损伤修复等多种特殊功能。近年发现,中性粒细胞也参与适应性免疫应答并与肿瘤的发生发展相关,在肿瘤微环境(tumor microenvironment, TME)中分化为不同的表型,包括N1/N2型肿瘤相关中性粒细胞(tumor-associated neutrophil, TAN)和粒细胞样髓源抑制性细胞(granulocytic-myeloid-derived suppressor cells, G-MDSCs);不同表型的中性粒细胞具有不同的功能。该文就中性粒细胞的生物学特性及其在肿瘤免疫治疗中的研究进展进行阐述。     

CD103+CD8+T细胞在结直肠癌组织中的浸润分布及其临床意义

[摘要] 目的:研究组织驻留CD8+T细胞（CD103+CD8+T细胞）在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）组织中浸润程度及分布特征,分析其浸润程度与患者临床病理特征及预后的关系。方法:选用上海芯超生物科技有限公司的88 例结肠癌HColA180Su14和77 例直肠癌HRec-Ade180Sur-03 组织芯片,应用免疫荧光染色法分别检测CRC组织及相应癌旁组织中CD103+CD8+T细胞的浸润分布特征及程度,Wilcoxon 秩和检验比较CRC及癌旁组织中CD103+CD8+T细胞浸润程度,χ2检验分析CRC中CD103+CD8+T细胞浸润程度与患者临床病理特征的关系;Kaplan-Meier 生存分析CD103+CD8+T细胞浸润程度与患者预后的关系,拟合Cox 模型评价不同指标与患者预后的关系。结果: CRC组织中CD103+CD8+T 细胞浸润程度与癌旁组织比较差异无统计学意义（P>0.05）,有远处转移患者中CD103+CD8+T细胞高度浸润的比率显著低于无远处转移患者（P<0.01）,CD103+CD8+T细胞浸润程度与患者其他临床病理特征无明显相关（P>0.05）。Kaplan-Meier生存分析显示,CD103+CD8+T细胞高度浸润患者的OS较低度浸润患者显著延长（54.42% vs 25.00%,P<0.05）,多因素Cox 显示,病理分级（P<0.01）和CD103+CD8+T细胞高度浸润（P<0.05）均可作为CRC患者预后的独立影响因素。结论: CRC组织中CD103+CD8+T细胞浸润与预后相关,提示其在CRC发生发展过程中发挥重要作用。     

紫杉醇对IL-36γ介导的抗肿瘤作用的影响

目的: 探讨不同剂量紫杉醇对IL 36γ介导的抗肿瘤作用的影响。方法: 构建重组表达载体pCDEF3 IL 36γ,再经基因转染、亚克隆筛选和实时定量PCR（RT qPCR）鉴定,构建可稳定表达IL 36γ的转染细胞株B16 IL 36γ;利用荷瘤小鼠模型,观察转染表达的IL 36γ对肿瘤生长的影响;将肿瘤细胞转染表达的IL 36γ联合不同剂量紫杉醇（0,12.5,25和100 μg）进行C57BL/6J雌鼠腹腔注射,分析紫杉醇对肿瘤直径的影响,并检测肿瘤中干扰素 γ mRNA的表达。结果： 成功获得能稳定表达IL 36γ的转染细胞株B16 IL 36γ;IL 36γ可显著抑制B16肿瘤的生长;100 μg剂量的紫杉醇明显抑制了IL 36γ介导的抑肿瘤生长作用和肿瘤中干扰素 γ表达,而12.5 μg剂量的紫杉醇则对IL 36γ介导的抑肿瘤生长和肿瘤中干扰素 γ表达具有促进作用。 结论： 采用IL 36γ进行肿瘤免疫治疗的同时,不宜采用高剂量紫杉醇,但可联合低剂量紫杉醇达到一定的协同效果。     

协同刺激分子B7-H4在肿瘤免疫治疗中的机制及应用进展

协同刺激分子B7-H4是B7超家族的一员,在多种肿瘤组织中有不同程度表达。其中B7-H4在卵巢癌及乳腺癌患者的肿瘤组织中呈高表达,提示其在这两种肿瘤的发生发展过程中起到重要作用。研究表明,B7-H4通过以下4条途径负性调控T细胞介导的抗肿瘤免疫应答:增强肿瘤细胞的增殖能力,抑制肿瘤细胞凋亡;抑制T细胞增殖,诱导T细胞凋亡;参与肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)介导的免疫抑制;促进CD11b+Ly6G+髓源抑制细胞(MDSCs)的产生。抗B7-H4单克隆抗体及B7-H4-/-小鼠模型已在实验中显示出良好的抗肿瘤效果。该文对协同刺激分子B7-H4的生物学特性、作用机制及B7-H4在免疫治疗应用中的研究进展作一综述。     

IL1R2在肿瘤发生发展中的作用

[摘要] IL-1 有IL-1α 和IL-1β 两种亚型,其受体家族包括I 型和II 型两种受体形式（IL1R1 和IL1R2）以及一种受体辅助蛋白（IL1RAP）。在IL1RAP帮助下,IL-1α 和IL-1β 均可与ILR1 形成IL-1/IL1R1/IL1RAP复合物,激活下游信号转导通路,发挥生物学作用;IL1R2 由于缺少胞内TIR 结构域无法介导IL-1 信号通路,而能通过与IL1R1 竞争性结合抑制IL-1 的作用。IL1R2 起初被认为是一种IL-1 的诱捕受体,但在后续的研究中发现其在多种肿瘤中有异常表达,且多数呈现异常上调状态,仅在少数肿瘤中低表达,其表达与许多肿瘤的发生发展以及预后有着重要关联。本文针对IL1R2 在肿瘤发生发展中的作用方面的相关研究进展进行综述。     

白介素-33对免疫细胞的影响及其作用机制

白介素-33（IL-33）是一种双功能的细胞因子,也称为核因子,属于IL-1家族成员。在机体稳态下,IL-33主要在上皮细胞、内皮细胞和成纤维细胞中表达。当组织损伤、感染或坏死时,细胞分泌IL-33,发挥“危险信号”蛋白作用。IL-33特异性受体ST2在多种免疫细胞中表达,可引起广泛的免疫反应。研究IL-33在变态反应、感染、炎症,尤其在肿瘤发生发展过程中的作用具有重要意义。本文就IL-33对免疫细胞的影响及其作用机制的研究进展作一综述。