缺氧诱导的结直肠癌外泌体通过激活PTEN/PI3Kγ信号通路介导巨噬细胞极化

目的:探究缺氧条件下,结直肠癌细胞外泌体对巨噬细胞极化的影响及机制。方法:差速离心法提取正常条件下和缺氧条件下结直肠癌细胞HT-29所分泌的外泌体（HT-29 N-exo和HT-29 H-exo）,透射电镜和Western blot鉴定外泌体,荧光显微镜下观察外泌体的摄取。将U937细胞与100 ng/mL的PMA共孵育的同时分别与1 μg/mL的HT-29 N-exo和HT-29 H-exo以及等体积的PBS共孵育,记为PBS组、HT-29 N-exo组、HT-29 H-exo组。qRT-PCR检测各组细胞CD163、IL-10、IL-1Rα、TGF-β1、CCL2、TNF-α mRNA的表达,Elisa检测各组细胞IL-10 和 TNF-α 分泌,流式细胞术鉴定各组细胞CD163和CD11b表达,Western blot检测各组细胞PTEN/PI3Kγ信号通路激活情况。结果:差速离心法所提取的外泌体符合其结构和生物学特征,并且可被U937细胞摄取;相比于HT-29 N-exo组, HT-29 H-exo组细胞CD163、IL-10、IL-1Rα、TGF-β1、CCL2表达显著增加（P＜0.05）,IL-10分泌显著增加,TNF-α 表达以及分泌显著减少（P＜0.01）,CD163+CD11b+巨噬细胞数显著增加（P＜0.001）,PTEN/PI3Kγ信号通路显著激活（P＜0.001）。结论:缺氧条件下结直肠癌细胞外泌体能够显著促进巨噬细胞M2型极化,其机制为激活PTEN/PI3Kγ信号通路。     

白细胞介素35的在肿瘤发展中的作用

白细胞介素（interleukin, IL）-35是IL-12细胞因子家族的新成员,自2007年发现以来IL-35很快成为了相关领域的研究热点。与IL-12家族的其他成员（IL-12、IL-23以及IL-27）相类似,IL-35也是由异源性的α链及β链组成,即p35和EBI3蛋白组成。目前的研究发现IL-35的功能主要表现在两个方面,一方面是IL-35在体内某些炎性疾病及自身免疫性疾病患者体内异常表达,IL-35在这些疾病的发生发展过程中起到重要作用。另一方面,IL-35在某些肿瘤中也表达异常,在肿瘤的发展过程中起到了重要作用。本文对IL-35的结构及信号通路进行了阐述,并总结了IL-35在肿瘤发展中的作用的最新研究进展。     

食道癌患者IL-2RαmRNA表达的初步研究

癌症患者的免疫功能与肿瘤的发生发展密切相关，IL-2通过和细胞膜上的IL-2R结合，调节T、B淋巴细胞、NK、LAK细胞的增殖和功能．发挥其抗瘤作用。IL2R的正常或异常表达与机体的生理、病理过程密切相关。本文重点探讨食道癌患者IL-2R mRNA表达与肿瘤转移的关系。     

IL-27联合IL-15通过磷酸化STATs途径调控NK92细胞的抗肿瘤作用

目的：探讨IL-27联合IL-15对NK92细胞抗肿瘤作用的影响及其分子和信号通路机制。方法：将高表达IL-15的NK92（IL-15-NK92）细胞分别置于不同质量浓度的IL-27（0、10、20、30及60 ng/ml）下培养24 h,ELISA法检测IL-27对IL-15-NK92 细胞分泌IL-15的影响,Transwell法检测IL-27对IL-15-NK92细胞迁移作用的影响,CCK-8法检测IL-27对IL-15-NK92细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测IL-15-NK92细胞表面受体NKG2D、NKp30和NKp46的表达水平以及穿孔素和颗粒酶B的分泌水平,LDH法检测IL-15-NK92细胞对多种血液肿瘤和实体瘤细胞的杀伤作用,WB检测STATs通路相关蛋白的表达及其磷酸化水平。结果：30 ng/ml的IL-27可以促进 IL-15-NK92 细胞 IL-15的分泌（P<0.01）、明显增强其迁移能力（P<0.05）,但明显抑制其增殖能力（P<0.05）;并且显著促进 IL-15-NK92 细胞表面受体NKG2D、NKp30 和NKp46的表达（均P<0.05）、明显促进穿孔素分泌（P<0.05）但不影响颗粒酶 B 的分泌（P>0.05）。30 ng/ml 的 IL-27 可显著促进 IL-15-NK92 细胞对多种血液肿瘤和实体瘤细胞的杀伤能力（P<0.05 或 P<0.01）,并且上调STAT1、STAT3、及STAT5蛋白的磷酸化水平（均P<0.01）。结论：IL-27 可增强IL-15-NK92细胞对实体肿瘤细胞和血液肿瘤细胞的杀伤作用,该作用与IL-27 上调IL-15-NK92细胞中JAK-STAT通路相关蛋白STAT1、STAT3、STAT5磷酸化水平和促进该细胞中多种活化性受体相关。     

温阳散结汤含药血清通过NF-κB通路调控肿瘤相关巨噬细胞极化对Lewis肺癌的影响

目的:观察温阳散结汤对 Lewis 肺癌小鼠肿瘤生长及瘤组织中巨噬细胞M2型极化的影响,并探索其调控NF-κB信号通路抑制肿瘤相关巨噬细胞M2型极化,对Lewis肺癌细胞侵袭、迁移能力的影响。方法:建立C57BL/6小鼠 Lewis 肺癌移植瘤模型,温阳散结汤干预14 d 后观察小鼠瘤重和肺转移灶,计算肺转移抑瘤率,免疫组化染色检测小鼠瘤组织中巨噬细胞M2型表面标志物 CD206 的表达;温阳散结汤灌胃SD大鼠制备含药血清,采用IL-13干预RAW264.7小鼠巨噬细胞建立巨噬细胞M2型极化模型,CCK-8法检测温阳散结汤含药血清对巨噬细胞增殖的影响,流式细胞术和Western-blot检测 CD206的表达,RT-PCR检测巨噬细胞M2型标志基因的mRNA表达,ELISA法检测细胞上清中IL-1β、IL-10、TGF-β 和TNF-α 的水平变化,Western-blot检测氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、核因子-κB p65(NF-κB p65)和磷酸化核因子-κB p65（pNF-κB p65）的蛋白表达;收集温阳散结汤含药血清处理的M2型巨噬细胞条件培养基,将其作用于Lewis肺癌细胞,通过Transwell侵袭迁移实验检测Lewis 肺癌细胞的侵袭和运动迁移能力。结果:温阳散结汤干预后,明显减少了小鼠瘤重和肺转移灶数,并抑制了瘤组织CD206的阳性表达（P<0.05）;温阳散结汤含药血清干预后,IL-13诱导的M2型巨噬细胞中F4/80+CD206+的细胞比例和CD206蛋白表达明显减少,MRC1、Arg1、Ym1的mRNA表达水平显著降低,细胞中TNF-α、IL-1β的含量明显升高,IL-10、TGF-β的含量明显降低,同时明显下调了细胞PPARγ、NF-κB p65、pNF-κB p65的蛋白表达及pNF-κB p65/NF-κB p65比值（均P<0.05）;温阳散结汤含药血清处理的M2型巨噬细胞条件培养基干预后,Lewis肺癌细胞迁移和侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。结论:温阳散结汤具有抑制肺癌肿瘤生长和转移的作用,其作用机制可能与调节NF-κB通路,抑制IL-13诱导的RAW264.7细胞M2型极化,从而抑制Lewis肺癌细胞侵袭和迁移能力相关。     

新的肺癌候选癌基因RAP2B的鉴定和功能研究初探

背景与目的 RAP2B是我们实验室构建的中国人肺鳞癌差异表达cDNA文库中高表达的基因之一.作为具有保守结构域的Ras超家族成员,RAP2B基因在肿瘤发生发展中的作用仍属未知.本文拟初步探讨RAP2B基因在肺癌中的作用及其机制.方法 应用半定量RT-PCR方法检测了27例手术切除的肺鳞癌肿瘤组织和相应的癌旁组织中RAP2B基因的表达;结合生物信息学分析克隆全长ORF区并转染大鼠Rat1细胞,观察转化灶形成情况;采用NF-kappaB信号通路特异的报告基因观察RAP2B基因对NF-kappaB通路的影响.结果 RAP2B mRNA在约67%(18/27)的肺鳞癌配对组织中肿瘤较癌旁组织高表达;成功构建了RAP2B的真核表达质粒;平板转化实验显示转染RAP2B基因的细胞出现明显转化灶;通路报告基因分析显示RAP2B能够明显激活NF-kappaB通路.结论 RAP2B基因在肺癌患者的肿瘤组织高表达,在体外具有恶性转化Rat1细胞能力,提示其为候选癌基因,并且可能通过激活NF-kappaB信号通路在肺癌发生发展中发挥作用.     

转录因子GLI1在肿瘤发生与侵袭转移作用中的机制

哺乳动物Hedgehog基因家族包括3个成员:Sonic hedgehog（SHH）、Desert hedgehog（DHH）和Indian hedgehog（IHH）。SHH信号通路主要由分泌型信号糖蛋白SHH配体、跨膜蛋白受体PTCH和另一跨膜蛋白SMO的复合物,以及3种GLI蛋白的下游转录因子GLI1、GLI2、GLI3组成。作为最经典的信号通路之一,SHH信号通路在胚胎发生、发育和组织更新等过程中发挥至关重要作用。GLI1是该通路中最重要转录因子之一,其异常活化与纤维化修复、肿瘤的发生发展与侵袭转移、肿瘤耐药和预后等密切相关。本文就GLI1与肿瘤发生与侵袭转移作用机制进行综述。      

IL-27通过促进活化性受体表达和STATs磷酸化增强NK92细胞的抗肿瘤作用

[摘要] 目的：探讨IL-27 影响NK92 细胞抗肿瘤作用的分子和信号通路的机制。方法：将NK92 细胞分别置于不同质量浓度的IL-27（10、20、30 及60 ng/ml）下培养24 h,LDH法检测NK92 细胞对多种血液肿瘤和实体瘤细胞的杀伤作用,流式细胞术检测NK92 细胞表面受体NKG2D、NKp30 和NKp46 的表达水平以及穿孔素和颗粒酶B的分泌水平,WB检测STATs 蛋白的表达和磷酸化水平。建立重度免疫缺陷型小鼠的前列腺癌（DU145 细胞）模型,使用IL-27 和NK92 细胞联合局部治疗,评估其抗肿瘤活性。结果：10、20 及30 ng/ml浓度的IL-27 均可显著促进NK92 细胞对靶细胞的杀伤能力,且30 ng/ml的IL-27 对其细胞毒的促进作用最强（P<0.05 或P<0.01）。30 ng/ml IL-27 能显著促进NK92 细胞表面受体NKG2D、NKp30 和NKp46 的表达（均P<0.05）、明显促进NK92 分泌穿孔素（P<0.05）,但不影响颗粒酶B的分泌（P>0.05）;上调STAT1、STAT3 及STAT5 蛋白的磷酸化水平（均P<0.01）。IL-27 和NK92 细胞局部联合治疗可明显延长前列腺癌荷瘤小鼠生存期（P<0.05）。结论：IL-27 可增强NK92 细胞对实体肿瘤细胞和血液肿瘤细胞的杀伤作用,两者联合治疗可明显延长荷瘤小鼠生长期,该作用与IL-27 上调NK92 细胞中JAK-STAT 通路STAT1、STAT3、STAT5 磷酸化水平和促进细胞中多种活化性受体相关。     

PD-1/PD-L1通路在乳腺癌治疗中的作用及意义

程序性死亡受体1（programmed death-1,PD-1,CD279）为共刺激受体CD28超家族成员,主要表达在活化T细胞、B细胞、单核细胞以及自然杀伤细胞表面。程序性死亡配体1（programmed death-ligand 1,PD-L1,CD274）为PD-1的一个重要配体,广泛表达于肿瘤细胞以及抗原呈递细胞（APC）表面。以PD-1/PD-L1为靶点的肿瘤免疫治疗为肿瘤治疗开辟了新的道路。PD-1通过与PD-L1和(或)PD-L2结合,抑制T细胞活化,诱导T细胞凋亡,在肿瘤免疫逃逸中起着重要的作用。目前PD-1/PD-L1信号通路成为免疫靶向治疗的新靶点,相关研究在非小细胞肺癌、晚期黑色素瘤等多种恶性肿瘤领域有重大进展,研究发现PD-L1 在多种肿瘤细胞包括乳腺癌中表达上调,提示 PD-1/PD-L1通路可能参与肿瘤的免疫逃逸。本文将针对PD-1/PD-L1通路在乳腺癌治疗中的作用及意义进行综述。     

RAR-β2 基因在乳腺肿瘤组织中的表达及意义*

目的:检测视黄酸受体β 2（RAR-β 2）基因在不同乳腺肿瘤组织中的表达,探讨RAR-β 2 基因与乳腺肿瘤的关系,分析其在乳腺癌发生、发展中的作用。方法:免疫组织化学法检测乳腺浸润性癌、导管上皮重度不典型增生、腺纤维瘤各40例及20例正常乳腺组织中RAR-β 2 的表达情况。RT-PCR 法检测乳腺浸润性癌、导管上皮重度不典型增生、腺纤维瘤及正常乳腺组织各20例RAR-β 2 的表达水平。结果:免疫组化结果显示,RAR-β 2 阳性表达主要位于细胞核,RAR-β 2 蛋白在乳腺浸润癌组织中阳性表达率（30.0%）明显低于正常乳腺组织（95.0%）,χ2=26.30,P<0.05。RAR-β 2 蛋白在乳腺重度不典型增生组织中阳性表达率（17.5%）低于乳腺癌组织,但差异无统计学意义（P>0.05）。 在乳腺浸润性癌组织中,RAR-β 2 表达与患者年龄、肿瘤大小、临床分期、腋下淋巴结转移状况、组织学分级、病理学类型以及ER、PR表达状况无相关性（P 均>0.05）。 随访结果显示,28例RAR-β 2 阴性乳腺癌患者中3 例发生内脏转移,而12例RAR-β 2 阳性患者仅1 例发生骨转移。RT-PCR 结果显示,RAR-β 2 在乳腺癌、导管上皮重度不典型增生、腺纤维瘤及正常乳腺组织中阳性表达率分别为25.0%（5/20）、35.0%（7/20）、85.0%（17/20）和100%（20/20）,乳腺癌组织RAR-β 2 mRNA 明显低于正常乳腺组织（χ2=30.43,P<0.001）。 结论:RAR-β 2 可能在乳腺癌的发生过程中发挥抑制作用,并且可能在乳腺癌发生的早期发挥作用。