β2M-绿色荧光蛋白在MHC-Ⅰ肽亲和力实验中的应用

目的 构建并表达β2微球蛋白-绿色荧光蛋白融合蛋白,并应用该蛋白建立一种全新的MHC-Ⅰ肽亲和力实验方法.方法 构建β2M-ZsGreen-6×His标签的融合蛋白真核表达质粒,转染293FT细胞表达,并以镍亲和层析法纯化,将该融合蛋白与表位肽共同与,12细胞反应,通过流式细胞术检测T2细胞标记绿色荧光的情况鉴定表位.结果 构建了B2微球蛋白-绿色荧光蛋白真核表达质粒并表达、纯化得到融合蛋白,该蛋白可应用于亲和力实验,进行表位鉴定.结论 β2微球蛋白-绿色荧光融合蛋白应用于亲和力实验鉴定CTL表位方法可行,步骤简便,适用于大通量表位鉴定.     

辅助刺激信号在类风湿关节炎发病机制中的作用

类风湿关节炎作为一种系统性自身免疫性疾病,其发病机制与许多因素有关。辅助刺激信号在其病程中的作用是近期国内外研究热点之一。已有的研究发现,CD28,CTLA-4,CD80,CD86,CD40,CD40L等辅助刺激分子在类风湿关节炎中均呈现表达异常,并且与不同的临床特征有一定的相关性,提示这些分子可能在发病过程和疾病进展中扮演了一定的角色。而针对这些分子所设计的一些药物如CTLA4Ig,其治疗作用已经在动物实验中得到了初步验证。但辅助刺激分子与T细胞和抗原提呈细胞之间的相互作用是动态且复杂的免疫调节过程,其在类风湿关节炎发病及病程进展中的机制尚不完全清楚,明确其调节过程,有助于更好的理解类风湿关节炎的发病机制,并可以为其基因治疗提供新的线索。     

人microRNA-146a慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的构建针对has-miR-146a的慢病毒表达载体,并鉴定成熟has-miR-146a在细胞内表达水平。方法PCR扩增pri-miR-146a,克隆于慢病毒载体plenti-GFP中,转染293FT细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染Jurkat细胞。结果成功构建了has-miR-146a的慢病毒表达载体,建立了高效转染系统。结论建立了高效稳定表达has-miR-146a的慢病毒转染系统。     

三七总皂苷对肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响及意义.方法通过电镜观察大鼠肝脏的超微结构,以不同剂量PNS分别对肝纤维化大鼠进行预防和治疗.结果肝纤维化大鼠可出现肝细胞胞浆内肿胀空泡和脂滴、微绒毛稀少、窦内皮细胞肥胖、细胞器增多、Disse间隙内胶原纤维增生等超微结构改变.PNS可减轻大鼠肝纤维化模型肝细胞内脂滴形成、内质网增生、线粒体肿胀及间质胶原增生.结论无论治疗和预防组,PNS均可有效减轻肝纤维化大鼠肝脏超微结构的损伤.     

MHC-Ⅰ荧光四聚体载体的构建及其真核表达

目的 构建MHC-I荧光四聚体真核表达质粒,并表达、纯化该蛋白,以更简便地检测特异性T细胞.方法 运用分子克隆技术,构建sKb-ZsGreen-6 × His标签的融合蛋白真核表达质粒,转染293FT细胞表达,并以镍亲和层析法纯化.结果 经酶切及测序鉴定证实成功构建了MHC-I荧光四聚体真核表达质粒并完成表达、纯化,并经SDS-PAGE电泳证实.结论 得到了纯化的MHC-I荧光四聚体,并经流式细胞术证实其与β2-微球蛋白、OVA肽结合后能被B3Z细胞识别,为特异性T细胞检测提供了一种更方便的方法.     

S100A4 siRNA 对佐剂性关节炎大鼠炎症及细胞因子的影响

目的：研究S100A4 siRNA对关节炎大鼠炎症及细胞因子肿瘤坏死因子α（TNF‐α）、IL‐1β和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法建立大鼠佐剂性关节炎模型,造模后第11天给模型干扰组大鼠关节腔内注射 S100A4 siRNA 片段。观察各组大鼠关节炎指数（AI）的变化及踝关节的病理变化;ELISA 检测血清 TNF‐α、IL‐1β和 VEGF 的表达变化。结果模型干扰组大鼠 TNF‐α、IL‐1β和 VEGF 表达水平均比模型组降低（P＜0．05）;AI 值及踝关节病理积分与模型组比较显著下降,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论抑制 S100A4基因表达,能显著降低致炎细胞因子 TNF‐α、IL‐1β及促血管生成因子 VEGF 的表达,减轻关节滑膜的病理损伤。     

以多发性肌痛为主要表现的原发性甲状腺功能减低1例

1临床资料患者,女性,17岁,因多关节疼痛3年入住中西医结合科。患者于2007年无明显诱因出现双踝、双膝关节疼痛,皮肤发红,当地医院诊断为风湿病,经中西药物治疗后病情无减轻,并出现双肩、肘、腕关节疼痛。5月来我院儿科查肌电图示:左三角肌示肌源性疾患肌电特征。考虑为"多发性肌炎",服中药治疗     

系统性红斑狼疮患者B细胞亚群谱系分析

目的检测系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血B细胞各亚群比例、分析B细胞分化及其临床意义,进一步探讨SLE患者B细胞功能分化在疾病中的作用。方法收取ds-DNA阳性、经过正规疗程激素及免疫抑制剂治疗后,临床治疗仍未达标的21例SLE患者简称难治性SLE患者,同时选取16例健康体检者作为正常对照组。采用流式细胞术检测健康对照及SLE患者外周血淋巴细胞中B细胞亚群比例的变化情况,并与患者的临床指标进行相关性分析。结果与健康人相比,高抗体滴度的SLE患者外周血双阴性记忆B细胞(CD19~+CD27~-IgD~-)比例明显增多,浆母细胞(CD19~+CD27~+CD38~+)比例明显增多,而非类型转换的记忆B细胞(CD19~+CD27~+IgD~+)比例明显下降。类型转换记忆B细胞(CD19~+CD27~+IgD~-)、静息B细胞(CD19~+CD27~-IgD~+)以及CD19~+B细胞比例与健康人无明显差异。结论同健康对照相比,SLE患者外周血B细胞记忆相关亚群比例发生显著变化,B细胞分化发生改变,导致B细胞功能障碍,进而增强B细胞分泌抗体能力,影响SLE疾病进程。     

青藤碱对类风湿关节炎患者炎性细胞因子及抗环瓜氨酸肽抗体的影响

目的探讨青藤碱对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清中炎性细胞因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)及抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)的影响.方法以健康成人为正常对照组,用双抗体夹心法(ELISA)检测活动性类风湿关节炎患者予青藤碱或甲氨喋呤治疗前及治疗1、2个月时血清中TNF-α、IL-1β、IL-10的含量及抗CCP抗体的滴度.结果与正常对照组相比,RA患者血清中TNF-α、IL-1β含量明显增加(P＜0.01),IL-10的含量无明显变化.青藤碱及甲氨喋呤能显著降低RA患者血清中IL-1β、TNF-α的含量(P＜0.01),而对IL-10的含量及抗CCP抗体的滴度无明显作用(P＞0.05).结论青藤碱可通过降低RA患者中血清TNF-α、IL-1 β的含量而治疗类风湿关节炎.     

类风湿性关节炎中树突状细胞亚群分析

目的分析类风湿性关节炎患者外周血和关节液中的DC(dendritic cell,DC)亚群以及DC亚群与炎症产生的关系。方法收集来自西南医院体检中心26例健康人外周血作为对照组,来自西南医院风湿免疫科28例RA患者的外周血及滑膜液作为实验组,其中RA患者的外周血和滑膜液来自同一RA患者。采用人外周血淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离提取对照组和实验组外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)和滑膜液单个核细胞(synovial fluid mononuclear cells,SFMCs),流式细胞术检测如下DC亚群:浆细胞样DC(CD123⁺DC)、髓系DC(CD11c⁺DC),进一步分析CD11c⁺DC亚群,CD1c⁺DC和CD141⁺DC。结果首先我们分析比较健康人外周血、RA患者外周血和RA患者滑膜液中各DC亚群,结果发现:健康人外周血CD123⁺DC亚群的比例明显高于RA患者外周血(P<0.0001),而RA患者外周血和滑膜液CD123⁺DC亚群的比例无显著性差异;而RA患者滑膜液中CD11c⁺DC亚群占比例明显高于RA患者外周血(P<0.01);进一步对CD11c⁺的亚群进行分析,结果发现RA患者滑膜液中CD1c⁺DC所占比例明显高于RA患者外周血(P<0.05);而RA患者滑膜液中CD141⁺DC亚群所占比例也显著高于RA患者外周血(P<0.001);最后我们分析了RA患者滑膜液中CD11c⁺、CD1c⁺以及CD141⁺DC亚群与RA患者滑膜液中活化CD4⁺CD45RO⁺T细胞相关性,结果发现:CD1c⁺DC的比例与CD4⁺CD45RO⁺T细胞比例有显著正相关(P<0.05)。结论RA患者滑膜液中CD11⁺DC、CD1c⁺DC和CD141⁺DC亚群的比例明显高于患者外周血,提示mDC可能在RA的局部炎症中起着比较重要的作用。