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1.
目的探讨提高癌基因HER2 RNA干扰抑瘤效果的新方法。方法采用RNA干扰抑制B16细胞中癌基因HER2的表达后,体外分析HER2 RNA干扰对B16细胞的增殖、老化、凋亡和细胞周期的影响。用TGF-β1中和抗体腹腔注射C57BL/6小鼠,皮下接种HER2 RNA干扰后肿瘤细胞或对照细胞,检测血清中游离TGF-β1的含量、观察荷瘤小鼠生存情况。结果与对照相比,HER2 RNA干扰后B16细胞的增殖速度显著下降,细胞凋亡率和G2/M期细胞明显增加,而细胞的老化则无显著变化。体内实验发现,TGF-β1中和抗体对接种了对照肿瘤细胞的小鼠的生存率无明显影响;与接种了对照肿瘤细胞的小鼠相比,接种了HER2RNA干扰肿瘤细胞的小鼠生存率有一定程度的提高,TGF-β1中和抗体则进一步提高了接种HER2 RNA干扰肿瘤细胞的小鼠生存率。结论癌基因HER2的RNA干扰可通过抑制细胞分裂、促进细胞凋亡等抑制B16细胞的增殖,TGF-β1中和与HER2 RNA干扰联合应用可显著提高荷瘤小鼠的生存率。  相似文献   
2.
目的 构建并表达β2微球蛋白-绿色荧光蛋白融合蛋白,并应用该蛋白建立一种全新的MHC-Ⅰ肽亲和力实验方法.方法 构建β2M-ZsGreen-6×His标签的融合蛋白真核表达质粒,转染293FT细胞表达,并以镍亲和层析法纯化,将该融合蛋白与表位肽共同与,12细胞反应,通过流式细胞术检测T2细胞标记绿色荧光的情况鉴定表位.结果 构建了B2微球蛋白-绿色荧光蛋白真核表达质粒并表达、纯化得到融合蛋白,该蛋白可应用于亲和力实验,进行表位鉴定.结论 β2微球蛋白-绿色荧光融合蛋白应用于亲和力实验鉴定CTL表位方法可行,步骤简便,适用于大通量表位鉴定.  相似文献   
3.
目的 构建MHC-I荧光四聚体真核表达质粒,并表达、纯化该蛋白,以更简便地检测特异性T细胞.方法 运用分子克隆技术,构建sKb-ZsGreen-6 × His标签的融合蛋白真核表达质粒,转染293FT细胞表达,并以镍亲和层析法纯化.结果 经酶切及测序鉴定证实成功构建了MHC-I荧光四聚体真核表达质粒并完成表达、纯化,并经SDS-PAGE电泳证实.结论 得到了纯化的MHC-I荧光四聚体,并经流式细胞术证实其与β2-微球蛋白、OVA肽结合后能被B3Z细胞识别,为特异性T细胞检测提供了一种更方便的方法.  相似文献   
4.
人microRNA-146a慢病毒表达载体的构建及鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的构建针对has-miR-146a的慢病毒表达载体,并鉴定成熟has-miR-146a在细胞内表达水平。方法PCR扩增pri-miR-146a,克隆于慢病毒载体plenti-GFP中,转染293FT细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染Jurkat细胞。结果成功构建了has-miR-146a的慢病毒表达载体,建立了高效转染系统。结论建立了高效稳定表达has-miR-146a的慢病毒转染系统。  相似文献   
5.
目的 通过RNA干扰研究Rac2蛋白对树突状细胞(DC)交叉递呈的影响.方法 首先构建针对Rac2基因siRNA的慢病毒载体pFIVsiRNARac2-1,pFIVsiRNARac2-2,pFIVsiRNARac2-3;DNA-磷酸钙共沉淀的方法转染293FT细胞包装慢病毒,嘌呤霉素(puromycin)筛选病毒感染的阳性DC2.4(树突状细胞系),Western-blot检测其干扰效率;然后用B3Z细胞(H2-Kb限制性,SIINFEKL特异性T细胞杂交瘤)检测筛选后的DC2.4细胞交叉递呈的能力.结果 酶切和测序结果证实表达siRNA的慢病毒载体构建成功,抗原递呈实验发现下调了Rac2蛋白表达的DC2.4细胞交叉递呈能力下降.结论 初步证实了Rac2蛋白参与树突状细胞对外来抗原的交叉递呈,为进一步了解树突状细胞交叉递呈的分子机制奠定了基础.  相似文献   
6.
Rab4蛋白参与DC细胞内源性抗原递呈   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的 建立稳定表达卵白蛋白的DC细胞株DC-OVA,研究Rab蛋白对DC内源抗原递呈的影响.方法 首先构建含OVA蛋白基因慢病毒表达质粒pLentimycOVA;以DNA-磷酸钙共沉淀法转染293FT细胞制备慢病毒,用病毒感染DC2.4细胞及杀稻瘟毒素(Blasticidin)筛选方法建立稳定表达OVA的细胞株,Western blot鉴定DC-OVA细胞中OVA蛋白表达;然后用识别MHC Ⅰ类分子-OVA肽复合物的T细胞杂交瘤B3Z细胞以及针对该复合物的单抗25D1.16检测DC-OVA细胞表面MHC-OVA肽复合物的形成情况,建立内源性抗原呈递的检测方法;最后采用脂质体法转染化学合成的Rab4、Rab5A、Rab7、Rab11的siRNA于DC-OVA中,B3Z检测DC内源抗原递呈的变化.结果 酶切和测序分析证实转移质粒克隆成功,Western blot可在DC-OVA细胞中检测到OVA蛋白,B3Z细胞和25D1.16单抗可检测到DC-OVA细胞表面存在MHCⅠ类分子-OVA表位多肽复合物,表明内源性抗原呈递系统成功建立.在此基础上,发现下调DC细胞中Rab4蛋白的表达,DC-OVA细胞刺激B3Z生成IL-2(白细胞介素2)的量明显下降.结论 成功构建了OVA蛋白的慢病毒表达载体,获得了表达内源OVA蛋白的DC细胞株,建立了内源性抗原呈递系统,初步证实下调Rab4蛋白可抑制DC细胞的内源性抗原递呈,为病毒感染和肿瘤等疾病的治疗奠定了基础.  相似文献   
7.
目的:探讨降钙素基因相关肽作用下成骨细胞内蛋白质表达谱的变化.方法:传代培养MG63成骨细胞,随机分为CGRP组和对照组.提取各组成骨细胞内蛋白质,经双向电泳分离、考马斯亮蓝染色后扫描分析蛋白质表达变化,选取6个差异显著的蛋白点进行胶内酶切、肽质量指纹图谱分析和IPI数据库检索.结果:双向电泳可分离(967±17)个蛋白质,点匹配率为(85.1±1.4)%,成骨细胞6种蛋白点表达出现明显差异,与对照组比较,CGRP组6种蛋白质表达下调.质谱分析鉴定出与核糖体定位和合成的新蛋白转位有关的核糖体结合蛋白p180(p180/ribosome receptor)及影响细胞内钙浓度的钙结合蛋白HRNR Hornerin等5种蛋白质.结论:CGRP作用于成骨细胞后,成骨细胞蛋白质组变化显著,涉及与钙离子浓度变化及新蛋白转位有关的几组蛋白质,提示CGRP可能通过这几种蛋白参与第二信使及细胞因子的调节并发挥功能.  相似文献   
8.
9.
目的 鉴定类风湿关节炎患者外周血和关节积液中Th1/Th2细胞因子谱的表达并探讨其在炎症中的意义.方法 采用微量样本多指标流式蛋白定量技术(cytometric bead array,CBA)检测41例类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者(2006年1月至2007年12月西南医院风湿病中心首诊病例)血清和关节积液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α和IFN-γ的表达.对照组(n=5)为西南医院健康查体人员.结果 与对照组和/或RA患者外周血比较,RA患者关节积液中IL-2、IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-10的表达显著增高(P<0.01),IFN-γ和IL-6的表达在RA患者外周血中也显著增高(P<0.01),TNF-α的表达在RA患者关节积液和外周血中也增高(P<0.05),并且在关节积液中IFN-γ/IL-4比例显著增高(P<0.01).与抗环瓜氨酸肽抗体(cyclic citrullinated peptide,CCP)阴性的患者相比,CCP抗体阳性的患者关节积液中IL-2、IL-6表达增高(P<0.05),TNF-α和IFN-γ的表达显著增高(P<0.01).结论 Th1/Th2极化失衡是RA炎症损伤的主要免疫病理机制,在关节局部是以Th1极化诱导的炎症反应为主,并且CCP抗体阳性患者关节炎症程度明显高于CCP抗体阴性患者.  相似文献   
10.
目的 研究Rac1、Rac2、Rac3、RhoA以及Cdc42的C-末端肽对树突状细胞(DC)交叉递呈的影响.方法 合成Rac1、Rac2、Rac3、RhoA及Cdc42 C末端区与人工改造的穿膜肽Tat47-57的融合肽,负载DC2.4细胞后,采用荧光显微镜及流式细胞术检测DC2.4细胞吞噬能力的变化,采用B3Z细胞检测DC2.4细胞抗原交叉递呈能力的变化.结果 负载了Tat-Rac1 C-末端肽的DC2.4细胞吞噬能力增强,并显著促进DC2.4细胞经MHC I类分子途径递呈外源性抗原的能力.结论 Tat-Rac1 C-末端肽能够有效促进DC的交叉递呈,为病毒感染和肿瘤等疾病的治疗奠定了基础.  相似文献   
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