miR-105-5p在胃癌中的表达及其意义与生物学功能

目的:探讨miR-105-5p在胃癌(GC)中的表达情况、临床意义及生物学功能及其潜在的作用机制。方法:应用real-time PCR检测miR-105-5p在GC组织与癌旁组织以及不同GC细胞(MGC-803,MKN-1,SGC-7901,BGC-823和AGS)与正常胃黏膜细胞(GES-1)中的表达;分析miR-105-5p的表达与GC临床病理特征及患者预后的关系;采用Transwell迁移和侵袭实验以及MTT实验检测miR-105-5p对GC细胞迁移与侵袭能力以及增殖能力的影响;应用生物信息学工具预测miR-105-5p的下游靶点,并应用荧光素酶报告实验以及Western blot分析miR-105-5p对靶点的调节作用。结果:miR-105-5p在GC组织的表达明显高于癌旁组织,在各GC细胞中的表达均明显高于正常胃黏膜细胞(均P0.05)。miR-105-5p的表达水平与肿瘤大小(P=0.020)和远处转移(P=0.004)明显有关;miR-105-5p低表达GC患者的总体生存率明显高于miR-105-5p高表达组的患者(P=0.001 8)。选择miR-105-5p表达量相对较低的BGC-823细胞和相对较高的MKN-1细胞,分别转染miR-105-5p模拟物和miR-105-5p抑制物,转染后结果显示,BGC-823细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显增强,而MKN-1细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显抑制(均P0.05)。生物信息学分析发现,DIRAS家族GTP结合RAS样3(DIRAS3)可能是miR-105-5p的作用靶点;荧光素酶报告实验显示,miR-105-5p能够负向调节DIRAS3-3'UTR的荧光素酶活性;Western blot显示,转染miR-105-5p模拟物的BGC-823细胞中DIRAS3的表达明显下调,转染miR-105-5p抑制物的MKN-1细胞DIRAS3的表达明显上调(均P0.05)。结论:miR-105-5p在GC中表达升高,其可能通过靶向作用于DIRAS3增强GC细胞的迁移、侵袭及增殖,进而促进GC的发生发展。     

miR-491通过下调Xklp2靶蛋白(TPX2)表达抑制肝癌细胞增殖、侵袭及迁移

目的探讨miR-491在肝癌组织中的表达、临床意义及可能的分子机制。方法实时定量PCR检测miR-491在肝癌及癌旁组织中的表达,MTT法检测MHCC-97H细胞的增殖,TranswellTM实验检测MHCC-97H细胞的侵袭及迁移,Western blot法及免疫组织化学染色检测miR-491下游潜在靶点Xklp2靶蛋白(TPX2)的表达。结果 miR-491在肝癌组织中表达水平显著低于相应癌旁组织;肝癌组织中miR-491低表达与肿瘤大小、TNM分期、门静脉侵犯及Edmondson分级显著相关;低表达miR-491患者3年生存率明显低于高表达组;miR-491可显著抑制MHCC-97H细胞的增殖、侵袭及迁移,并下调TPX2的蛋白水平;miR-491低表达组TPX2蛋白水平明显高于miR-491高表达组,相关性分析显示肝癌组织中miR-491与TPX2蛋白表达呈显著负相关。结论 miR-491在肝癌组织中表达下调并与肝癌恶性临床病理特征有关,miR-491抑制肝癌细胞增殖、侵袭及迁移的作用可能与下调TPX2表达有关。     

腹腔镜模拟操作系统在普通外科临床实践教学中的应用

目的：探讨腹腔镜模拟操作系统在普通外科临床实践教学中应用的效果。方法随机抽取20名本科生和15名研究生进行腹腔镜技术理论、操作技能等培训,并在培训前后分别进行理论知识和操作能力考核。结果通过理论培训及腹腔镜模拟操作系统练习,35名医学生在对腹腔镜技术的认知和实践操作能力方面都有明显提高。结论作为模拟医学教学模式的组成部分,腹腔镜模拟操作系统可有效提高医学生普通外科临床实践能力。     

UbcH10在肝细胞癌中的表达及临床病理意义

目的研究UbcH10在肝细胞癌中的表达及其与临床病理特征的联系,初步探讨UbcH10在人肝细胞癌中的生物学意义。方法利用RT-PCR法检测正常肝脏细胞系及肝癌细胞系,和肝癌组织及对应的癌旁组织中UbcH10 mRNA的表达水平。分析UbcH10 mRNA的表达水平与肝癌临床病理特征之间的关系。利用免疫组化方法检测UbcH10蛋白在肝癌组织及其癌旁组织和正常肝脏组织中的表达。结果正常肝脏细胞系L02中UbcH10 mRNA表达水平显著低于肝癌细胞细胞系BEL-7402、Hep3B、HepG2、SMMC-7721中UbcH10 mRNA的表达水平(P<0.05)。肝癌组织中UbcH10 mRNA的表达水平显著高于其癌旁组织(P<0.05)。UbcH10 mRNA表达水平与肿瘤直径、组织病理分化程度、TNM分期、门静脉侵犯特临床病理特征显著相关(P<0.05)。肝癌组织中广泛表达UbcH10蛋白,总体阳性率为68.6%(48/70),癌旁组织和正常肝组织中较少见UbcH10蛋白阳性表达,其染色阳性率分别28.6%(20/70)和26.7%(8/30)。结论 UbcH10在肝癌细胞系及肝癌组织中高表达。UbcH10的高表达与肝癌的恶性临床病理特征相关,UbcH10可能成为潜在的分子标志物或治疗靶点。     

小干扰RNA沉默CIP2A表达阻滞HepG2细胞周期、促进细胞衰老的作用及机制探讨

目的:观察抑制CIP2A表达对HepG2细胞周期及衰老的影响，并探讨初步机制。方法:运用前期成功构建的重组腺相关病毒载体rAAV2-EGFP-CIP2A shRNA转染肝癌细胞系HepG2，PI单染测定细胞周期，衰老相关β-半乳糖苷酶染色检测阳性细胞率，Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果:病毒感染组与空病毒感染组细胞相比，抑制CIP2A表达后HepG2细胞出现G1期阻滞（69.8% vs 60.4%,P=0.025），细胞内β-半乳糖苷酶染色阳性比例升高（22.1% vs 9.6%,P=0.022），细胞周期相关蛋白FoxM1、CDK2、CDK4、cyclin D1及MCM7蛋白表达量降低，而细胞周期负性调控分子p21蛋白表达量增加。结论:抑制CIP2A表达导致HepG2细胞出现细胞周期停滞，细胞衰老增加，其机制可能通过调控细胞周期相关蛋白表达来实现的。     

闭合性胰腺损伤及术后并发症的防治

目的探讨胰腺损伤的治疗措施及并发症的防治。方法回顾性分析2000年8月至2008年8月收治的35例胰腺损伤的临床资料。术式包括急诊清创修补胰周引流术6例,单纯胰体尾切除术4例,胰体尾联合脾切除术4例,主胰管修补外引流术2例,近端关闭远端行胰腺空肠吻合术4例,胰腺坏死组织清除、引流术3例,胰、十二指肠及胃肠造瘘引流手术4例。结果 29例进行了手术治疗。除1例自动出院外全部治愈;4例并发胰瘘、2例继发腹腔感染和大出血等并发症。结论胰腺损伤术后并发症多,病死率高,合理有效的手术方式、通畅的引流是防治术后并发症的关键。     

尼美舒利诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡并下调HSP70基因表达

目的:探讨尼美舒利诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用及其机制。方法:以不同浓度的尼美舒利处理体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和/或Western blot法检测caspase-9和PARP的剪切情况及HSP70的表达水平;通过RNAi技术沉默HSP70基因表达,观察其对细胞凋亡的影响。结果:尼美舒利可抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,诱导细胞凋亡,导致caspase-9和PARP的剪切活化及HSP70的mRNA和蛋白表达下调;在人肝癌SMMC-7721细胞中转染靶向HSP70的siRNA可沉默HSP70表达、剪切活化caspase-9和PARP,进而显著促进细胞凋亡。结论:尼美舒利可诱导人肝癌SMMC7721细胞凋亡,这一作用可能与抑制HSP70表达有关。     

UbcH10与肿瘤关系研究进展

泛素-蛋白酶体系统（UPS）是蛋白质选择性降解的最重要机制之一。蛋白质的泛素化是一个非常复杂而缜密的级联酶促反应过程,参与调节细胞内多种蛋白的表达水平和功能活性。泛素-蛋白酶体系统的异常与恶性肿瘤的发生和进展有着密切的关系。泛素偶联酶UbcH10属于泛素偶联酶E2家族,其与特定的E3酶相互作用引起底物蛋白的降解,是一种参与细胞有丝分裂调控的细胞周期蛋白。UbcH10可激活Cdc20/APC,与细胞周期进展、细胞分裂、染色体分离密切相关。UbcH10表达异常可导致细胞的染色体不稳定,细胞分裂异常。目前已有研究证明UbcH10是一种具有癌基因性质的泛素偶联酶。UbcH10在乳腺癌、结肠癌、胃癌、卵巢癌、肝癌、脑胶质瘤、淋巴瘤等多种肿瘤中高表达并且与肿瘤分期呈正相关,提示不良预后,可能成为新的肿瘤标志物或治疗靶点。本文就近年来关于UbcH10在肿瘤中作用的研究进展加以综述。      

胆管良性瘢痕组织中前列腺素F2α受体及前列腺素合酶2的表达及意义

目的探讨前列腺素F2α受体(PTGFR)和前列腺素合酶2(COX-2)在胆管良性瘢痕组织中的表达及意义,并研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对胆管成纤维细胞中PTGFR表达的影响。方法收集2008～2010年西安交通大学第一附属医院肝胆外科收治的18例肝外胆管瘢痕性狭窄患者的胆总管组织,另收集6例来自异体肝移植供体的正常胆总管组织作为对照。采用免疫组织化学SABC法分别检测PTGFR及COX-2在两种组织中的表达情况,然后用不同浓度(0、10、20及30ng/ml)TGF-β1作用于胆管成纤维细胞后24h,用半定量RT-PCR法以及ELISA法检测胆管成纤维细胞中PTGFR的mRNA及蛋白表达。结果 PTGFR和COX-2在胆管良性瘢痕组织中的表达阳性率分别为88.9%(16/18)和83.3%(15/18),正常胆总管组织中其表达阳性率分别为33.3%(2/6)及0(0/6),PTGFR及COX-2在前者均分别明显高于后者(P<0.05)。TGF-β1作用于胆管成纤维细胞后24h,随着TGF-β1浓度增高,可上调PTGFR mRNA及蛋白在胆管成纤维细胞中的表达,并且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论胆管良性瘢痕组织中PTGFR和COX-2高度表达是造成胆管瘢痕过度增生的重要因素,TGF-β1可诱导胆管成纤维细胞中PTGFR的表达增高,并呈浓度依赖性,调节胆管瘢痕的形成。