中医药院校开展生物制药专业自主设计实验课的探索

为提高中医药院校的生物制药专业学生的实验专业技能,本文以贵州中医药大学2016级生物制药专业学生为研究对象,以小组讨论、自设实验方案为主线贯穿到专业实验课的教学中。以实验教学中存在的问题为论点,探讨生物制药专业开设自主设计实验在生物制药人才培养过程中的意义,从而为本专业学生毕业后能够在生物制药领域从事相关生产、研发及技术工作打下坚实的基础。     

烟草DELLA基因家族的克隆与表达模式分析

为明确烟草受逆境胁迫时DELLA基因家族的转录调节功能,通过烟草EST序列比对分析克隆了3个DELLA基因家族基因（NtDELLA1,NtDELLA2,NtDELLA3）,并对3个基因的结构和表达模式进行了分析。生物信息学分析结果表明,烟草DELLA基因全长1 700 bp左右,其编码蛋白包含DELLA蛋白的特征结构域DELLA基序和VHYNP基序,与拟南芥DELLA蛋白家族的GAI蛋白高度同源,推测烟草DELLA蛋白与拟南芥DELLA蛋白具有类似的功能;荧光定量PCR分析结果表明,这3个基因在烟草不同组织和关键生长发育时期表达模式类似,尤以茎中表达量最高;胁迫应答分析结果表明,烟草DELLA基因的转录对干旱、低温、烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）侵染和外源激素均表现出不同程度的响应,其中干旱、赤霉素（GA）和脱落酸（ABA）可抑制烟草DELLA基因的表达,而低温胁迫可诱导NtDELLA1上调表达,TMV侵染可诱导NtDELLA1和NtDELLA2的大量表达。      

英美文学教学与思想政治教育

教书育人是每个教师的神圣职责。它要求教师在讲授任何一门课程时 ,既要向学生传授有关专业知识 ,又要对学生进行思想政治教育。思想政治教育主要包括人生观、政治观和道德观的内容 ,而其出发点和本质要求则是爱国主义和社会主义。爱国主义是一个民族的灵魂 ,但不与社会主义联系在一起 ,就无法显示其时代特征。因此 ,在教育学生热爱祖国的同时 ,还必须教育他们热爱祖国的社会主义事业 ,而这正是人文科学包括外国文学或外国文学中的英美文学课本身具有的主要功能之一。英美文学所具有的进行思想政治教育的功能 ,首先是由于无论哪一个民族和国家 ,都有自己的爱国主义传统即千百年所巩固起来的对自己国家的忠诚和热爱 ;而自近代以来 ,又都具有若干民主主义和社会主义的内容。列宁曾经指出 :“每个现代民族都有两个民族 ,每一个民族文化中都有两种民族文化”。“每个民族的文化里都有一些哪怕是还不发达的民主主义和社会主义文化成分。因为每个民族文化里都有劳动群众和被剥削群众 ,他们的生活条件必然产生民主主义和社会主义的思想体系”。这种爱国主义传统和文化中的某些社会主义成分反映到文学领域中 ,便会产生具有爱国主义和社会主义思想的作家和作品 ,这样的作品可以...     

多重实时荧光定量PCR分析转基因烟草外源基因拷贝数

[目的]采用多重实时荧光定量PCR方法在一个反应内同时检测转基因烟草中插入外源基因35S、NOS、NPT Ⅱ的拷贝数。[方法]将转基因阳性参照烟草基因组DNA经梯度稀释,通过多重荧光定量PCR反应同时获得烟草内源参照基因NR、外源基因35S、NOS、NPT Ⅱ的相关性标准曲线方程,将待测株系外源基因的Ct值代入标准曲线方程后估算其拷贝数。[结果]获得了上述4个基因的标准曲线,其R2均接近于1,相关性较高。在检测的六个转基因株系中初筛到3株3个外源基因均为单拷贝的株系。[结论]可使用该方法对转基因烟草外源基因插入拷贝数进行估算,为获得稳定遗传材料提供初筛依据。      

烟草糖基转移酶基因NtGT5a的克隆及原核表达

为揭示烟草糖基转移酶的活性及生物学功能,从烟草栽培品种中克隆了烟草糖基转移酶基因NtGT5a,基于GenBank的烟草糖基转移酶基因NtGT5a的核苷酸序列(GenBank登录号AB176523),设计并合成特异性引物,以红花大金元叶片总RNA为模板,通过RT-PCR方法获得了烟草糖基转移酶基因NtGT5a的cDNA片段。序列分析表明,该基因编码区为1458 bp,编码485个氨基酸残基,推测的蛋白分子量为54.21 kDa,理论等电点为5.41。通过构建重组表达载体pCold-SUMO-NtGT5a,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在15Ⅲ下经0.2 mmol/L IPTG诱导22 h表达产生了SUMO-NtGT5a重组蛋白。重组蛋白部分以包涵体形式存在,部分以可溶性蛋白形式存在。将重组蛋白的可溶性组分经过Ni-NTA柱层析纯化和凝胶过滤层析,用SUMO蛋白酶切除SUMO标签,再用镍柱纯化获得了高纯度的NtGT5重组蛋白。     

试论《哈姆莱特》中的鬼魂

莎士比亚的社会悲剧《哈姆莱特》中的鬼魂,不是剧中主角,但是全剧的主宰.从某种意义上说,没有鬼魂,就没有这出悲剧.作者对鬼魂所作的细致描绘及其赋予鬼魂在全剧中的重要作用,使鬼魂这一艺术形象,具有独特的审美价值.     

烟草半胱氨酸蛋白酶抑制剂（CPI）基因家族的克隆及组织表达谱分析

运用生物信息学方法,结合RT-PCR和SMART RACE技术从烟草（Nicotiana tabacum）中克隆了4个CPI基因的全长cDNA序列,分别命名为NtCPI1、NtCPI2、NtCPI3和NtCPI4, GenBank登陆号分别为KF057988、KF057989、KF057990和KF057991。基因序列分析表明4个基因分别编码98、98、120和123个氨基酸残基的蛋白质,都具有CPI反应位点的保守基序GG、QXVXQ和A/PW,同时具有植物CPI所特有的LARFAV基序,其中NtCPI3和NtCPI4的N端还包含一段27个氨基酸残基组成的信号肽。实时荧光定量PCR试验表明,4个基因的组织表达谱很广,在根、茎、叶和芽组织中都有表达。这些结果为进一步研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂在植物中的生理功能奠定了基础。      

烟草转基因研究常用遗传元件筛查策略

通过检索国内外近10年烟草转基因研究的相关文献,建立了转基因烟草常用转化遗传元件的数据库,统计了每个遗传元件及组合元件的使用频率后,发现利用7种遗传元件,包括:启动子P-35S、标记基因NPT II、HPT、Bar和aadA、报告基因GUS及终止子T-NOS作为靶标元件组合,能使目前烟草转基因事件的理论筛查率达到100%,从而构建出转基因烟草的优化筛查策略,为行业转基因烟草检测提供依据。      

基于毛细管电泳的TILLING实验技术的建立

CEL I内切酶特异识别并切断错配碱基,是建立TILLING实验技术品台的关键组成。商用CEL I酶价格昂贵,不利于大规模的TILLING分析实验。参考发表文献,成功地从贵州省贵阳市当地种植的西芹中获得具有活性的CELI酶粗提物。本实验建立了有效的酶切体系:酶切温度42℃, 酶切时间 60 min,酶切反应总体积15μL,包括8μL PCR 产物、4.5μL ddH2O、1.5μL 酶切缓冲液(pH 7.5, 500mmol/ L KCL, 100mmol / L Tris-Cl, 15mmol / L MgCl2 )和1μL CEL I酶（稀释为原始粗提液0.05倍）,并通过 ABI 3500遗传分析仪获得定量结果,准确确定突变位点。      

英美文学教学与思想政治教育

教书育人是每个教师的神圣职责。它要求教师在讲授任何一门课程时 ,既要向学生传授有关专业知识 ,又要对学生进行思想政治教育。思想政治教育主要包括人生观、政治观和道德观的内容 ,而其出发点和本质要求则是爱国主义和社会主义。爱国主义是一个民族的灵魂 ,但不与社会主义联系在一起 ,就无法显示其时代特征。因此 ,在教育学生热爱祖国的同时 ,还必须教育他们热爱祖国的社会主义事业 ,而这正是人文科学包括外国文学或外国文学中的英美文学课本身具有的主要功能之一。英美文学所具有的进行思想政治教育的功能 ,首先是由于无论哪一个民族和国家 ,都有自己的爱国主义传统即千百年所巩固起来的对自己国家的忠诚和热爱 ;而自近代以来 ,又都具有若干民主主义和社会主义的内容。列宁曾经指出 :“每个现代民族都有两个民族 ,每一个民族文化中都有两种民族文化”。“每个民族的文化里都有一些哪怕是还不发达的民主主义和社会主义文化成分。因为每个民族文化里都有劳动群众和被剥削群众 ,他们的生活条件必然产生民主主义和社会主义的思想体系”。这种爱国主义传统和文化中的某些社会主义成分反映到文学领域中 ,便会产生具有爱国主义和社会主义思想的作家和作品 ,这样的作品可以...