Q开关和长脉宽1064nm Nd:YAG激光真皮胶原重建疗效的比较性研究

目的:本研究拟定量地比较Q开关和长脉宽1064 nm掺钕:钇-铝石榴石(neodymium-yttrium-aluminum garnet,Nd:YAG)激光诱导真皮胶原重建的疗效。方法:应用Q开关和长脉宽1064 nm Nd:YAG激光分别对36只雌性昆明小鼠左侧后背皮肤进行连续4次治疗,每次间隔1周,右侧相应的部位作为自身对照。分别于第1次治疗后1h、1天、7天、21天、30天和60天对小鼠皮肤行活组织取材。应用免疫组化方法分别对皮肤组织样品中真皮I、III型胶原进行检测,染色结果应用Motic医学数字图像分析系统进行定量分析。结果:与正常对照组相比,Q开关1064 nm Nd:YAG激光治疗后7天、21天、30天和60天,真皮I型胶原及III型胶原水平明显增高(均P0.01)。长脉宽1064 nm Nd:YAG激光治疗后21天、30天和60天,真皮I型胶原水平明显增高(均P0.01);激光治疗后7天、21天、30天和60天,真皮III型胶原水平明显增高(分别为P0.01、P0.05、P0.01、P0.01)。两组激光的比较:激光治疗后7天、21天和30天,Q开关1064nm Nd:YAG激光治疗组真皮I型胶原水平较长脉宽1064nm Nd:YAG激光治疗组明显增高(均P0.01),而激光治疗后60天明显降低(P0.05);激光治疗后7天和21天,Q开关1064nm Nd:YAG激光治疗组较长脉宽1064nm Nd:YAG激光治疗组真皮III型胶原水平明显增高(分别为P0.05、P0.01)。结论:Q开关和长脉宽1064nm Nd:YAG激光均可引起真皮胶原重建,但二者的作用效果不尽相同。     

红宝石点阵激光联合胶原修复贴治疗黄褐斑的临床观察

目的:对红宝石点阵激光联合胶原修复贴治疗黄褐斑进行临床疗效观察。方法:使用Q开关红宝石固体激光治疗,点阵模式,能量密度3~4.5mJ/cm2,每2周1次,10次为1个疗程;术后1周每天外敷胶原修复贴治疗1次,观察临床疗效及副作用。结果:60例患者经治疗后,基本治愈28例,显效24例,好转8例,无效0例,总有效率86.7%,患者耐受性好,未出现严重不良反应。结论:采用红宝石点阵激光联合胶原修复贴治疗黄褐斑患者疗效显著、安全,副作用少。     

基于VEGF通路探讨断藤益母汤抑制胶原诱导型关节炎小鼠血管翳形成的作用

目的 探讨断藤益母汤抑制胶原诱导型关节炎（CIA）小鼠血管翳形成的机制。方法 SPF级DBA/1雄性小鼠24只,随机分为4组,分别是空白组（NC组）,模型组（CIA组）,甲氨蝶呤组（MTX组）,断藤益母汤组（DTYM组）,每组6只。除正常组外,其余组小鼠进行造模。二次免疫起,给予灌胃等体积溶媒,MTX（1 mg·kg^-1）和DTYM（15.4 g·kg^-1）,给药35 d。观察小鼠一般情况、关节炎指数;取材后进行膝、踝关节微型计算机断层摄影（micro CT）扫描,苏木素-伊红（HE）和番红-固绿染色观察病理改变,免疫组化检测血小板-内皮细胞黏附分子-1（CD31）,血管内皮生长因子-α（VEGF-α）,血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）,磷酸化（p）-VEGFR2的表达。结果 与NC组比较,CIA组小鼠踝关节红肿明显,关节炎指数评分显著上升（P<0.05,P<0.01）,膝、踝关节关节面明显破损,软骨厚度降低,膝、踝关节micro CT骨破坏评分明显升高（P<0.01）,滑膜中CD31,VEGF-α,VEGFR2,p-VEGFR2积分吸光度显著升高（P<0.01）;与CIA组比较,DTYM组踝关节红肿程度明显减轻,给药3周后小鼠关节炎指数评分明显下降（P<0.05,P<0.01）,膝、踝关节关节面更完整,软骨厚度增加,膝、踝关节micro CT骨破坏评分均明显降低（P<0.05,P<0.01）,滑膜中CD31,VEGF-α,VEGFR2,p-VEGFR2积分吸光度显著降低（P<0.01）。结论 断藤益母汤可能是通过调控VEGF通路抑制CIA小鼠血管翳的形成。     

针刀对类风湿性关节炎模型大鼠的治疗作用及对滑膜细胞凋亡的影响

目的:观察针刀干预对II型胶原诱导关节炎(CIA)大鼠模型的治疗作用及对CIA大鼠滑膜组织中凋亡相关基因天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶3和9(Caspase-3和Caspase-9)表达的影响,探讨针刀干预对CIA大鼠的影响。方法:将30只SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组和针刀组,每组10只。空白组正常饲养,模型组、针刀组分别采用免疫学方法制备CIA大鼠模型。造模成功后模型组不予任何处理,针刀组于大鼠左膝关节周围寻找条索状物行针刀干预治疗,每周治疗1次,共治疗3周。观察记录各组大鼠左后足足跖厚度及大鼠四肢关节炎指数评分(AI);运用HE染色法通过光镜观察各组大鼠膝关节病理形态学变化;采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR法)检测各组大鼠滑膜组织中Caspase-3、Caspase-9的mRNA表达量。结果:与空白组比较,模型组、针刀组大鼠足跖厚度及AI值均明显增加,差异具有统计学意义(P0.01);与模型组比较,针刀组大鼠足跖厚度及AI值均明显降低,差异具有统计学意义(P0.01)。模型组大鼠Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平明显低于空白组,差异具有统计学意义(P0.05),针刀组大鼠Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达水平较模型组明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:针刀干预对CIA大鼠关节炎症有明确的治疗作用,其作用机理可能是通过促进滑膜细胞凋亡相关基因的表达抑制滑膜组织增生实现的。     

硬膜外腔注射胶原酶治疗腰椎间盘突出症影响疗效的相关因素分析

目的：探讨X射线监视下硬膜外腔注射胶原酶治疗腰椎间盘突出症影响疗效的相关因素。方法：根据椎间盘突出的大小及突出类型和是否伴有椎管狭窄以及置管位置等将120例患者分组进行影响因素分析，通过复诊和电话询问。在术后1周、3个月、1年分别评定疗效。结果：椎间盘突出大小对疗效影响不明显(P&;gt;0．05)；术后各时期突出型较膨出型疗效好[u分别为2．27(1周)，2．15(3个月)，1．97(1年)，P&;lt;0．05]；不同时期非椎管狭窄组疗效均好于椎管狭窄组[u=2．05(1周)，u=3．05(3个月)，u=3．25(1年)，P&;lt;0．01]；术后1周硬膜外前间隙组较后间隙组疗效好(u=2．13，P&;lt;0．05)，3个月和1年后两组无明显差别。结论：椎管狭窄和椎间盘膨出及药液注射部位是影响硬膜外腔注射胶原酶治疗腰椎间盘突出症疗效的主要因素。     

胶原基组织工程支架对成纤维生长因子的控制释放与组织再生功能

目的通过将碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)与胶原基组织工程支架进行复合,实现对bFGF的控制释放,从而更有效的实现组织再生功能.方法采用ELISA酶联免疫试剂盒对溶出的bFGF进行定量分析,考察支架对bFGF的短期控制释放过程.结果bFGF可以通过静电作用与胶原基支架结合,均匀分布在多孔三维支架中,48 h后,bFGF的溶出浓度趋于恒定,经过甲醛交联的支架对bFGF的结合量较高;bFGF的结合量受到壳聚糖的含量和交联方法的影响.结论胶原基组织工程支架能够对生长因子在较长时间内实现控制释放,促进组织的再生修复.     

双氢青蒿素对Ⅱ抗炎和软骨修复作用型胶原诱导的类风湿关节炎大鼠的

【目的】 探讨双氢青蒿素对Ⅱ型胶原诱导的类风湿关节炎（RA）大鼠的抗炎作用和软骨修复作用。【方法】 将75只健康6周龄雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,双氢青蒿素低、中、高剂量组,每组15只。除假手术组外,其他各组大鼠均给予Ⅱ型胶原诱导构建 RA 模型。成功造模后,双氢青蒿素低、中、高剂量组大鼠分别对应给予双氢青蒿素 6.25、12.5、25 mg/kg灌胃处理,1次/d,连续给药2周。给药结束后,检测骨指标（骨体积分数、骨表面积/骨体积、骨小梁厚度、骨小梁数量）;采用苏木素-伊红（HE）染色法观察踝关节组织病理学表现、阿利新蓝染色法观察踝关节软骨组织蛋白多糖的表达,采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法观察踝关节骨组织破骨细胞情况;采用酶联免疫吸附分析（ELISA）检测外周血中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-10、IL-17、IL-23的含量;采用蛋白免疫印迹法检测踝关节组织成骨标记物成骨细胞特异性转录因子Osterix（Osx）,Ⅰ型胶原蛋白α1链（COL1A1）和骨钙素（OC）的表达;采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测踝关节组织骨吸收功能相关基因破骨细胞相关受体（OSCAR）和TRAP的表达情况。【结果】 与假手术组比较,模型组大鼠骨体积分数,骨小梁厚度、骨小梁数量显著降低,骨表面积/骨体积显著升高（均P < 0.05）,踝关节组织病理学表现可见滑膜增生,炎性细胞浸润,软骨损伤严重,软骨组织基本无蛋白多糖表达,外周血中炎症相关因子TNF-α、IL-17、IL-23和IL-10含量均显著升高（P < 0.05）,踝关节组织Osx、COL1A1、OC的相对表达水平均显著降低（P < 0.05）,OSCAR、TRAP的mRNA表达水平均显著升高（P < 0.05）。给予双氢青蒿素干预后,RA大鼠上述指标均得到明显改善。【结论】 双氢青蒿素可以通过抑制炎症反应、促进软骨修复治疗Ⅱ型胶原诱导的大鼠RA。     

大鼠胎脑神经细胞与胶原复合体移植对脑损伤的修复

目的:评价胶原蛋白(Collagen)的细胞相容性;研究胶原蛋白(C)与大鼠胎脑神经细胞(FBN)复合体(C-FBN)脑内移植对脑损伤的修复作用。方法:将大鼠FBN与胶原蛋白联合体外培养,进行光镜、扫描电镜观察。并将体外联合培养3～5d的C-FBN(移植前48h培养液中加入BrdU)移植到大脑皮质损伤模型的大鼠脑损伤部位,术后3,6,10,15及30d光镜、BrdU免疫细胞化学染色(ICC)、透射电镜观察脑组织对移植物的反应、移植细胞生长状态及载体在体内的降解情况等。结果:胶原蛋白对FBN生长无不良影响;脑组织对移植物无明显的免疫排斥反应;胶原蛋白与周围脑组织整合好,有血管长入移植物中;载体内有大量存活神经细胞,而且术后各时段都检出BrdU阳性细胞;移植区有突触形成;胶原蛋白海绵吸收、降解快,可诱导组织再生。结论:胶原具有良好的细胞相容性和组织相容性,是神经组织工程的一种较为理想的生物载体材料;生物材料与胎脑神经细胞联合培养移植是治疗脑损伤较有前途的新方法。     

人增生性瘢痕成纤维细胞最佳转染条件:α_1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染的实验

目的:选择α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳条件。方法:实验于2003-10/2004-06在中山大学附属第一医院外科实验室进行。以阳离子脂质体Oligofectamine转染体外培养的第2～6代人增生性瘢痕成纤维细胞,应用荧光显微镜记录荧光素在细胞内的空间分布,用流式细胞术作荧光细胞计数和观察细胞凋亡,通过不同细胞接种数量、反义寡核苷酸浓度和脂质体量转染条件的比较,逐步获得各转染过程中的最佳条件。结果:①在6孔板上转染反义寡核苷酸,所用各转染条件未引起细胞凋亡。②其最佳转染条件为:接种细胞数量32.25×104/皿,反义核酸浓度150nmol/L,脂质体量3μL/孔;转染后细胞浆和细胞核内均有荧光素聚集。结论:获得α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染的人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳转染条件,可为下一步试验提供基础。     

17β-雌二醇及补骨脂素对骨髓间充质细胞向成骨细胞分化的诱导作用

目的:观察17β-雌二醇对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的诱导作用。方法:将大鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs)暴露于不同浓度的17β-雌二醇、补骨脂素增殖和成骨分化培养基。通过茜素红(Alizarin Red)染色法观察细胞增殖;通过酶联免疫吸附试验法(ELISA)和实时聚合酶链反应(PCR)评估成骨标志物Ⅰ型胶原的分泌水平以及关键因子RUNX2的表达情况。结果:与对照组比较,17β-雌二醇补充剂促进BMSCs增殖。BMSCs增殖添加的17β-雌二醇的不同剂量(0、0.001、0.01、0.1 nmol/L),有效地改善了骨髓间充质干细胞分泌Ⅰ型胶原的水平,RUNX2的mRNA也被上调。17β-雌二醇干预后第5天,Ⅰ型胶原表达显著升高(P<0.05),在17β-雌二醇干预的第7天,RUNX2 mRNA及蛋白表达随17β-雌二醇水平的增加而升高(P<0.05)。结论:17β-雌二醇联合补骨脂素可以作为一种有效的调节剂,以提高骨髓再生中MSC的能力。