含胎牛血清胶原酶消化法培养兔成骨细胞

背景:成骨细胞原代培养技术已经很成熟,然而各种消化酶单纯作用于原代组织时对成骨细胞膜蛋白有一定影响。目的:为尽可能避免酶对细胞的损害,用含胎牛血清的胶原酶消化胎兔颅盖骨骨组织,进行体外成骨细胞培养,观察加入胎牛血清后胶原酶对成骨细胞消化的效果。设计:对照实验。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院骨外科研究室。材料:实验于2004-03/12在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨外科研究室完成。妊娠28d日本大耳白种孕兔2只。方法:将同一个批号的Ⅰ型胶原酶分别用含体积分数为0.15胎牛血清的培养基和DMEM溶液配制成0.1%的含胎牛血清的胶原酶和0.1%不含血清的胶原酶,分别作为实验组和对照组的酶消化液A液和B液。妊娠28d的孕兔,无菌条件下剖腹取出胎兔,然后取胎兔的颅盖骨,剔净、漂洗、剪碎。实验组和对照组分别加5mL37℃的A液和B液消化,两组均用含体积分数为0.15胎牛血清的培养液分别成梯度稀释为0倍、1倍、2倍和4倍后继续消化-培养成骨细胞。锥虫蓝染色测定细胞的存活率,细胞内碱性磷酸酶染色鉴定和测定成骨细胞的纯度,显微镜下观察细胞生长情况。主要观察指标:①用锥虫蓝染色来检测两组细胞的存活率。②以细胞内碱性磷酸酶染色来检测两组细胞的纯度。③用显微镜观察细胞形态来区别两组细胞的生长情况。结果:①细胞锥虫蓝染色结果:通过记数计算,实验组拒染率高达98%,细胞存活率高;对照组拒染率也高达95%,细胞存活率也较高。②细胞内碱性磷酸酶染色结果:实验组碱性磷酸酶染色阳性区域不少于95%,细胞纯度高;但对照组碱性磷酸酶染色阳性区域不超过75%细胞纯度较低。③显微镜下观察结果:实验组细胞饱满凸起,有立体感,细胞生长旺盛,营养充足;而对照组细胞凸起不明显,立体感较差,细胞生长营养较实验组差。结论:用含胎牛血清胶原酶消化胎兔颅盖骨骨组织,培养出的成骨细胞具有典型的成骨细胞特征,且成分单一,存活率高。     

男性2型糖尿病患者骨代谢生化指标变化研究

鉴于对2型糖尿病(NIDDM )骨生化代谢指标的检测结果很不一致,本研究排除了受试对象的性别、年龄、体重指数(BMI)、并发症、经济条件等因素,探讨了2型糖尿病患者骨代谢生化指标变化特征。一、材料和方法1 .对象　(1 )对照组:健康体检者4 9名,平均年龄5 1岁,体检合格,BMI 2 5 .2±0 .3;(2 )NIDDM组:4 2例,均为我院住院患者,诊断符合1 985年WHO糖尿病诊断及分型标准,平均年龄5 3岁,BMI 2 5 .0±0 .6 ,病程5～7年,尿白蛋白排泄量≤30mg/L ,当前血糖水平控制较好,排除其他疾病。2 .仪器与试剂　血清钙(Ca)、磷(Pi)、碱性磷酸酶(ALP)…     

异种煅烧骨与Ⅰ型胶原复合骨形态发生蛋白修复兔桡骨缺损过程中的组织学与生物力学变化特征

目的制备异种煅烧骨、Ⅰ型胶原和骨形态发生蛋白复合材料,观察在骨缺损修复过程种的组织学和生物力学变化.方法实验于2004-07/2005-04在第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所实施.①采用小牛骨粒制备牛煅烧骨;胃蛋白酶液消化新鲜牛腱制备Ⅰ型胶原;牛骨形态发生蛋白及Ⅰ型胶原制备活性复合颗粒实验材料.②取兔36只,建立桡骨中段15 mm骨缺损模型,随机分为4组,每组9只.空白对照组不植入材料;煅烧骨组植入单纯煅烧骨,将煅烧骨与骨水泥按11复合后制成长15 mm,直径4 mm柱件,至骨水泥面团期时填入骨缺损处;自体骨组植入自体骨;复合材料组植入活性复合颗粒,按11质量比将活性颗粒与骨水泥复合.植入物均不作固定,清洗,缝合,术后回笼喂养.③观察指标术后4,12,24周每组各取3只兔,分别通过X射线检查,组织学观察,生物力学测定和扫描电镜等手段观察新骨形成和材料降解情况.结果36只兔均进入结果分析.术后各组动物均无毒性反应.①各组兔骨缺损区X射线检查结果术后24周时复合材料组、自体骨组骨缺损已修复,而煅烧骨组,空白对照组未修复.②各组植入材料组织学观察结果术后24周时复合材料组、自体骨组骨缺损有大量新骨形成,而煅烧骨组、空白对照组未见新骨形成.③复合材料扫描电镜观察结果复合材料空隙率高,复合紧密.④各组植入材料生物力学测定术后24周复合材料组最大扭转强度和最大载荷接近自体骨组[(0.76±0.05)N·m,(162.6±4.1)N,(0.82±0.03)N·m,(172.2±6.1)N,P＞0.05],明显高于煅烧骨组[(0.26±0.01),(46.8±6.8)N,P＜0.05].结论①异种煅烧骨、Ⅰ型胶原和骨形态发生蛋白复合移植物具有较强的成骨作用及修复骨缺损能力.②复合材料组最大扭转强度和最大弯曲载荷接近自体骨组.③可望成为新型骨缺损修复材料.     

胶原材料生物学特征及其在牙周组织工程中的应用

学术背景:牙周病治疗的目的是重建丧失的牙周组织,形成新附着及牙槽骨再生.在牙周组织工程中选择合适的支架材料是一个首要的问题,胶原由于其独特的生物学特征而被应用于牙周组织工程.目的:针对胶原的生物学特征及其在牙周组织工程的应用现状做一综述.检索策略:应用计算机检索Medline(ovid) 数据库1996-01/2007-10关于胶原及其在牙周组织工程应用方面的文章,检索词"collagen,tissue engineering,periodontal diseases ,periodontal tissue engineering",并限定语言种类为"English";同时检索中国期刊全文数据库1996-01/2007-10的相关文章,检索词"胶原、组织工程、牙周病、牙周组织工程"等;同时手工检索相关书籍.纳入标准:胶原及其在组织工程和牙周组织工程中的研究现状;对具体研究的回顾调查.排除标准:重复性研究.文献评价:初检得到63篇文献,排除33篇重复性研究,纳入30篇.其中8篇论述了胶原的生物学特征,22篇论述了胶原在组织工程和牙周组织工程中的研究现状.资料综合:在牙周组织工程中支架材料起着非常重要的作用,选择合适的载体是一个首要解决的问题.胶原不仅可生物降解, 促进细胞生长代谢, 还可与其他合成或天然高分子、无机或有机材料以及生物材料复合, 这些优点使其在牙周组织工程中优势明显.结论:胶原材料具备良好的生物安全性和相容性,因此被用于牙周组织工程的支架材料,并可通过与其他高分子材料复合改善其部分性能.     

EGFR、PCNA、LN、IV型胶原在SACC中的表达及临床意义

目的：探讨表皮生长因子受体（EGFR）、增殖细胞核抗原（PCNA）、层黏连蛋白（LN）和IV型胶原蛋白在唾液腺腺样囊性癌（SACC）中的表达及临床意义。方法：选取临床病例资料齐全的SACC 78例,用荧光原位杂交技术检测EGFR基因表达,免疫组织化学技术检测 EGFR、PCNA、LN和Ⅳ型胶原蛋白的表达,分析其与临床病理参数的相关性。结果：SACC中EG-FR基因扩增率（69．2％）与蛋白的阳性表达率（71．8％）存在明显正相关（P＜0．05）,且EGFR、PCNA、LN、Ⅳ型胶原蛋白表达与临床病理参数密切相关。EGFR、PCNA表达水平间存在明显正相关（P＜0．05）;LN蛋白、Ⅳ型胶原表达水平间存在明显负相关（P＜0．05）。结论：EGFR基因在SACC中明显扩增,EGFR、PCNA、LN、Ⅳ型胶原蛋白共同参与SACC发生、发展。     

多孔β-磷酸三钙/胶原支架修复兔下颌牙槽骨缺损的实验研究

目的观察自行研发的2种支架材料修复兔下颌牙槽骨临界骨缺损的效果。方法8只新西兰大白兔下颌骨制备10mm×8mm箱状骨缺损,分别植入多孔β-磷酸三钙／胶原与β-磷酸三钙／聚左旋乳酸2种支架材料,分别在4、6、8、12周时各处死2只。采用肉眼观察,锥形束CT与组织切片观察成骨效果与材料降解情况。结果β-磷酸三钙／胶原支架在各时间点成骨效果均好于对照组。在12周时,完全修复骨缺损。结论β-磷酸三钙／胶原支架可以快速、有效修复兔下颌牙槽骨临界骨缺损。     

五倍子水提取物对人牙髓细胞Ⅰ型胶原合成的影响

目的:观察五倍子水提取物对人牙髓细胞Ⅰ型胶原合成的影响。方法:取第6代体外培养的人牙髓细胞分别与终末浓度为5、10μg/m L的五倍子水提取物共同培养3 d后,采用免疫组化染色法观察人牙髓细胞中Ⅰ型胶原的表达情况,并用HPIAS-1000图像分析系统进行定量分析。结果:对照组和不同浓度五倍子水提取物作用的实验组人牙髓细胞中均有Ⅰ型胶原的表达,其免疫反应物质多定位于胞浆。人牙髓细胞经5、10μg/m L浓度的五倍子水提取物作用后,其Ⅰ型胶原的表达水平均明显增高,其中以10μg/m L组的增高程度最大,各组间两两相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:5、10μg/m L五倍子水提取物均能明显促进人牙髓细胞中Ⅰ型胶原的表达;提示其具有促进牙髓细胞向成牙本质细胞分化的作用。     

药物性牙龈增生与胶原代谢失衡的相关性研究进展

药物性牙龈增生(drug-induced gingival overgrowth,DIGO)是指长期服用某些特定药物而引起的牙龈纤维性增生和体积增大,其发病机制尚不清楚。目前研究表明,胶原的合成和降解失衡与药物性牙龈增生有密切关系。本文就药物性牙龈增生与胶原代谢失衡的相关研究进展作一综述。     

补肾方改善骨基质结构提高骨强度的机理研究

目的本研究利用切卵大鼠骨丢失动物模型,通过观察补肾方对骨基质结构的影响,探讨补肾方改善骨质量、提高骨强度的调控机制。方法建立卵巢切除大鼠动物模型,运用骨骼影像学、骨组织病理学和骨生物力学等技术与酶联免疫吸附法观察补肾方对骨丢失大鼠骨密度、骨代谢、骨生物力学性能和骨结构的影响。结果补肾方能够对抗因雌激素缺乏导致大鼠骨量的丢失,骨结构的恶化和骨生物力学的减退,同时补肾方还能够改善骨内Ⅰ型胶原交联形式的组份。结论补肾方似乎可以通过改善骨基质结构,从而改善骨质量、提高骨强度。