携带TIMP-4 cDNA的重组腺病毒载体的构建

目的 克隆细胞外基质金属蛋白酶组织抑制因子4(tissue inhibitor-4 of metalloproteinases,TIMP-4)基因,构建包装携带TIMP-4基因的重组腺病毒载体(Ad/T4),为基因治疗血管再狭窄的实验研究打下基础.方法 以人心脏cDNA文库为模板,应用PCR克隆TIMP-4基因,经DNA测序确定克隆结果.构建具有强启动子CMV,携带TIMP-4和报告基因GFP的穿梭质粒pAdTrack-T4,利用AdEassy系统,在大肠杆菌BJ5183经同源重组产生重组腺病毒质粒pAd/T4.脂质体介导转染293细胞,包装重组腺病毒载体(Ad/T4).结果 克隆出含TIMP-4全部编码序列的cDNA片断,并通过亚克隆和同源重组等将其重组入腺病毒,构建包装了重组腺病毒载体Ad/T4.结论 Ad/T4中含有TIMP-4和GFP的完整表达盒,可用于基因治疗的实验.     

白介素-2对自发性高血压大鼠血压的影响

实验结果表明:一次或多次皮下注射重组白介素-2均不能阻止卒中易感型自发性高血压大鼠(SHR_((?)p))形成高血压,且主动脉对去甲肾上腺素的反应性以及血浆血管紧张素Ⅱ浓度与对照动物相比,均未发现显著差异。说明皮下给予白介素-2无对抗SHR_((?)p)高血压的作用。     

高盐负荷对高血压大鼠主动脉平滑肌细胞及肾皮质的心钠素受体基因mRNA表达的影响

成年卒中型自发性高血压大鼠（SHRsp）与正常大鼠（WKY）各32只,分为高盐组与对照组。高盐组从8周开始喂1.8％盐水。两组大鼠12周时从主动脉平滑肌（ASM）与肾皮质（KC）中提取总RNA。应用RT-PCR技术对心钠素A、B型受体mRNA水平分别进行比较。结果显示,（1）ASM中,高血压大鼠心钠素A、B型受体mRNA水平分别为正常大鼠的2.2倍和1.6倍;（2）高盐负荷引起两种大鼠ASM中的A型受体mRNA明显下降（SHRsp降低53％;WKY降低23％）,而B型受体mRNA水平明显升高（SHRsp升高69％;WKY升高29％）,（3）肾皮质的心钠素受体mRNA水平,在高盐负荷前后及两种大鼠之间均未发现显著性差异。结果说明,高血压大鼠ASM的心钠素受体基因表达增加,高盐引起该受体基因转录调控的改变,可能是高盐导致血压升高的机制之一。     

人心肌特异表达基因Nelin蛋白的血清水平测定及其意义

目的探讨Nelin蛋白在心血管病患者和正常对照血清表达水平的差别及其意义。方法使用自制的一株Nelin单克隆抗体(MA-H409H5),建立ELISA法标准曲线。通过检测灵敏度(最小检出量)、精确度(批内、批间变异系数)、回收率等以优化实验反应条件,并以此方法测定了580例人血清Nelin蛋白浓度。结果直接ELISA法检测Nelin蛋白的最小检出量为7.8ng/ml,标准曲线在7.8～250.0ng/ml范围内线性良好(r0.99)。精确度测定:平均批内变异系数为4.78%,平均批间变异系数为9.56%。测得回收率为(100±5)%。580例人血清中均可检测到Nelin蛋白的表达,其中正常对照组为(9.34±3.07)μg/ml,冠心病组为(8.57±2.76)μg/ml,该两组Nelin蛋白含量相比有显著性差异(P0.05),而其他各心脏病组与正常组相比均无显著性差异。结论成功建立了人血清Nelin蛋白的ELISA测定法,该方法敏感、特异、可靠。正常对照组和各心血管病患者组均有Nelin蛋白表达,但冠心病组明显低于正常对照组,提示Nelin基因的表达水平可能与冠心病有一定的关系。     

家族性原发性高血压与血管紧张素原基因M235T突变关系的研究

目的：探讨血管紧张素原基因Ｍ２３５Ｔ突变与家族性原发性高血压（ＥＨ）的关系。　　方法：应用脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）杂交和测序检定方法,对一个典型原发性高血压大家系１００名成员［分直系亲属高血压组（ｎ＝ ４５）、直系亲属正常血压组（ｎ＝ ３８）及非直系亲属正常血压组（ｎ＝ １７）］和正常血压对照家系直系亲属２１ 名（为正常对照组）成员按＜ ３５岁和≥３５岁２个年龄层的Ｍ２３５Ｔ突变进行分析。　　结果：比较４组在＜ ３５ 岁和≥３５ 岁２个年龄层的Ｍ２３５Ｔ分布。表明各年龄层中,４组间Ｍ２３５Ｔ基因型及基因频率分布未见显著不同。　　结论：血管紧张素原基因Ｍ２３５Ｔ突变与该家族性原发性高血压没有显著关联;Ｍ２３５Ｔ突变可能不是该家族性原发性高血压的遗传易感因素。     

培养的大鼠血管平滑肌细胞中bFGF基因表达与血管紧张素Ⅱ释放的相互关系

采用Northern杂交检测培养的自发性高血压人鼠（SHR）和正常血压WKY大鼠的血管平滑肌细胞（VSMC）中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因表达，用紫外法和放免法分别测定培养液中血管紧张素转换酶（ACE）活性和血管紧张素Ⅱ（Aug11）含量。发现AugⅡ能明显促进VSMC中bFGF基因表达，而bFGF则能明显诱导ACE活性和提高AugⅡ释放，臣SHRVSMC的bFGF基因表达、ACE活性和AugⅡ释放均显著高于WKY大鼠。结果提示，VSMC中bFGF基因表达和AugⅡ释放间存在相互促进的正反馈联系。     

心血管疾病的分子生物学简介（1）

心血管疾病的分子生物学简介（１）编者按自４０年前Ｊ．Ｄ。Ｗａｔｓｏｎ及Ｆ．Ｈ．Ｃ．Ｃｒｉｃｋ发现脱氧核糖核酸双螺旋结构后，生物学进入分子生物学时代，揭示了许多重要的生命运动规律。而今基因工程技术在医学方面的应用已得到累累硕果，并预示随着对基因结构、功...     

离血压病的病因与发病机制

高血压病的病因和发病机制一直是人们十分关注的问题。几十年来大量研究从不同角度提出各自论点。随着生理学、遗传学、神经内分泌学和分子、细胞生物学的发展及酷似人高血压病的自发性高血压大鼠(SHR)模型的建立,研究已逐步深入到细胞和分子水平。     

Bartter's综合征(附2例报告)

本文报告两例Bartter's综合征并结合文献简要介绍本病的临床特点、病理改变、病因、发病机理、诊断和治疗方法的近代观点.本病的特点是肾小球旁器增生肥大,低血钾、低血氯性碱中毒,R-A-A系统和P-Gs分泌增多,血压正常或偏低,对外源性AT-I的升压反应低下及肾小管回吸氯障碍;诊断主要靠综合分析临床特点和实验室各项检查结果,排除各种“假征”;尚无满意疗法,补钾及应用醛固酮拮抗剂、前列腺素合成酶抑制剂和β-阻断剂虽有一定疗效,但停药后症状复现.