高糖刺激血管平滑肌细胞血管内皮生长因子的表达

平滑肌细胞可分泌血管内皮生长因子 (ＶＥＧＦ) 〔1〕,在糖尿病视网膜组织中ＶＥＧＦ表达明显增高〔2〕。ＶＥＧＦ的主要功能是增加血管通透性、促进内皮细胞增生和促进新血管增殖。推测ＶＥＧＦ与糖尿病视网膜血管病的病理变化直接相关。本研究探讨Ｄ 葡萄糖浓度、作用时间以及波动糖浓度刺激对ＶＥＧＦ表达的影响。一、材料和方法1.血管平滑肌细胞培养 :无菌条件下取大鼠胸主动脉段 ,按Ｈｏｆｍａｎ的贴片法原代培养血管平滑肌细胞。本实验选用 5～ 10代细胞进行实验。2 .细胞总ＲＮＡ的提取 ,ＲＮＡ变性电泳 ,转膜 :采用异硫氰酸胍一步法…     

重组腺病毒相关病毒携带人血管内皮生长因子165诱导家兔缺血心肌血管生成的研究

目的　将携带人血管内皮生长因子 16 5 (hVEGF 16 5 )cDNA的重组腺病毒相关病毒 (rAAV)载体注入家兔缺血心肌 ,观察血管内皮生长因子 (VEGF)的血管生成效应。方法　制作家兔急性心肌梗死模型 ,将rAAV hVEGF 16 5注入缺血心肌。 4周后取注射部位心肌 ,用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)和免疫组织化学、Westernblot方法检测目的基因的表达 ,并计数注射部位心肌毛细血管数目 ,评价外源VEGF的生物学活性。结果　注射rAAV VEGF部位心肌VEGFmRNA及其蛋白的表达可持续 8周 ,而且比对照组增加。远隔脏器未见外源VEGF的播散和表达。注射rAAV VEGF部位毛细血管密度比对照组增加。结论　rAAV hVEGF 16 5可以有效地转染成年家兔心肌组织 ,外源基因稳定长期表达 ,同时能够刺激新血管生成 ,并具有良好的安全性。     

再狭窄的细胞和分子生物学(三)

癌基因与抗癌基因癌基因是一类能编码生长因子、生长因子受体、细胞内生长信息传递分子以及转录调节因子的基因，亦称原癌基因，现有100多种，它们是一类编码关键性调控蛋白质的正常细胞基因，其主要功能是调节细胞的增殖与分化。1．几类常见的癌基因1．1src癌基因族：c－src由17个外显子组成，人的c－src分布于第20号染色体，其转录产物全长3．9-4．0kb。大多数正常细胞或组织中c－src表达水平很低，但细胞增殖时表达增高。src编码分子量为60kDa的蛋白质，称PP60src，具有酪氨酸蛋白激酶（tyrosineproteinkinase，TPK）活性。除src外，…     

血管内皮生长因子基因治疗小型猪冠状动脉闭塞的实验研究

目的探讨应用血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗动物实验性冠状动脉闭塞的疗效.方法中国实验用小型猪19只,结扎左冠状动脉前降支中远段,心肌内多点注射自行构建的pcD2/hVEGF121真核表达质粒.应用逆转录聚合酶链反应、VEGF免疫组化染色、Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色等方法检测VEGF基因在心肌中的表达及其生物学作用,用常规冠状动脉造影观察VEGF基因治疗对闭塞冠脉侧支循环建立的作用.结果转移VEGF基因后,小型猪心肌内VEGF mRNA高表达,VEGF免疫组化染色提示VEGF蛋白表达水平升高;Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色显示心肌毛细血管增加;冠状动脉造影证明VEGF基因治疗能够促进闭塞冠脉侧支循环的建立.结论心肌内注射pcD2/hVEGF121真核表达质粒能够获得VEGF mRNA和蛋白的有效表达,促进心肌毛细血管增生,促进侧支循环建立.     

同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的机制

同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的机制杨立华△田清萍唐朝枢周爱儒汤健刘乃奎（北京医科大学心血管研究所，北京１０００８３）同型半胱氨酸（ＨＣＹ）是甲硫氨酸代谢过程中产生的一种含硫氨基酸。大量流行病学资料和临床观察表明，ＨＣＹ与动脉粥样硬化形成密切相关。然而，...     

大力加强分子心血管病学的研究

大力加强分子心血管病学的研究汤健，周爱儒心血管系统可以从整体、器官、细胞和分子四个水平进行研究。近年来的研究证明，心血管生理、病理最本质、最核心的问题是基因及其调控的问题。分子心血管病学就是用分子生物学的理论、技术和方法来研究心血管的结构、功能及调节...     

胃液蛋白质定量分析对胃癌的诊断价值——与胃液CEA的联合研究

本文系统测定了胃液蛋白质浓度和CEA水平,结果表明:胃癌患者胃液蛋白质浓度显著升高,敏感性65.0％,特异性86.7％,准确性81.6％。胃癌患者CEA水平升高显著,敏感性58.8％,特异性83.6％,准确性79.0％。用判别函数y=0.446·PQA+0.003·CEA将二者联合起来,使胃癌的敏感性提高为82.4％,特异性86.0％,准确性85.0％,2例早期胃癌均阳性。     

Adenovirus mediated gene transfer of vascular smooth muscle cells and endothelial cells in vitro.

Introducing foreign gene(s) into vascular smooth muscle cells (VSMCs) and endothelial cells (ECs) is the pre-require-ment of gene therapy for cardiovascular diseases. We have explored the use of adenoviral vectors (Adv-CMV / LacZ) to transfer LacZ gene into cultured VSMCs and ECs. Our results demonstrated that adenoviral vectors transfered foreign gene into VSMCs and ECs high-efficiently with dose-dependent response pattern. The frequencies of transfection reached 100% at the viral titer of 109 pfu / ml. Comparing the sensitivities of VSMCs and ECs to adenoviral vectors, we found that ECs were more sensitive than VSMCs, of which the frequencies of transfection in ECs reached 80% while in VSMCs only 40% for 8 hrs after transfection. In addition, the transfection of ECs and VSMCs with adenoviral vectors was partly blocked by monoclonal antibodies to Fiber and Core protein of the adenoviral capsid, but not by monoclonal antibody to Hcxon protein. It is suggested transfection of ECs and VSMCs with adenovirus     

制备性SDS—PAGE纯化大肠杆菌表达的重组人VEGF

在以基因工程方法实现大肠杆菌表达外源重组人ＶＥＧＦ的基础上，应用制备性ＳＤＳ—ＰＡＧＥ从包含体中分离纯化了这一因子。纯化蛋白在含有氧化型与还原型谷胱甘肽和肝素的缓冲液中复性，复性后的ＶＥＧＦ蛋白成为同源双体，经Ｍｉｌｅｓ方法检测，证明可提高血管通透性，具有生物活性。这一研究为制备具有生理与病理意义的研究奠定了基础。