一氧化氮合酶抑制剂的研究进展

一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ,ＮＯ）是一种能调节细胞多种功能的信息分子,它参与心血管、外周和中枢神经以及免疫等系统生理过程和生物信号的调节。体内组织中的ＮＯ由ＮＯ合酶（Ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ,ＮＯＳ）催化左旋精氨酸而合成,合成后的ＮＯ迅速跨膜扩散释放。各种调节ＮＯ释放的因素均作用于ＮＯＳ催化的化学反应过程,而体内影响该反应的ＮＯＳ在各组织的表达不同。特异性ＮＯＳ抑制剂通过调控ＮＯ的合成,对ＮＯＳ表达相关的各种疾病的预防和治疗具有重要的临床意义。本文对近年来ＮＯＳ抑制剂的研究进展作一概述。     

eIF3S10与肿瘤

eIF3S10是真核细胞翻译起始因子eIF3最大的亚基，可与多个起始因子亚基相互作用，然而对于其具体的功能意义尚未完全阐明。最近的研究发现，eIF3S10在各肿瘤细胞株以及多种肿瘤，尤其是在各种肺癌组织中过度表达，认为其是细胞分化与增殖调节过程中重要的功能基因，其异常表达有可能在肿瘤发生发展和维持恶性表型的过程中发挥重要作用。     

人β_3-AR和PPAR-γ2基因真核表达载体及β_3-AR稳定表达细胞株的构建

目的构建高效表达人β3-肾上腺素受体(hβ3-AR)的真核细胞表达载体,为进一步研究hβ3-AR的功能以及与过氧化物酶体增殖体激活受体-γ2(PPAR-γ2)调控基因之间的相互影响奠定基础。方法从人肾旁脂肪组织提取总RNA,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增hPPAR-γ2、hβ3-AR cDNA全长序列。将EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后的hβ3-AR cDNA与同样进行EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切的pcDNA3·1(+)载体连接形成重组载体pcDNA3·1(+)/hβ3-AR。将XbaⅠ和AflⅡ双酶切后的hPPAR-γ2cDNA与同样进行XbaⅠ和AflⅡ双酶切的pcDNA3·1(+)载体连接形成重组载体pcDNA3·1(+)/hPPAR-γ2。通过限制性内切酶酶切鉴定后对DNA序列进行测序,鉴定重组质粒中hβ3-AR和hPPAR-γ2基因的完整性和可靠性。运用定点诱变方法,对野生型hPPAR-γ2和hβ3-AR质粒进行定点诱变,构建Pro12Ala突变的hPPAR-γ2和Trp64Arg突变的hβ3-AR的pcDNA3·1(+)载体,电穿孔法将人hβ3-AR重组表达载体pcDNA3·1(+)/hβ3-AR(突变型和野生型)转染到SH-SY5Y细胞中,用G418筛选获取稳定转染细胞株,并用RT-PCR、Western blot方法进行鉴定。结果酶切和测序分析显示重组质粒构建正确,并在转染的SH-SY5Y细胞中获得hβ3-AR的高效表达。结论成功克隆了人PPAR-γ2、β3-AR基因全长cDNA,并成功构建了人野生型和突变型的hPPAR-γ2和hβ3-AR的真核表达重组体〔pcDNA3·1(+)/hPPAR-γ2和pcDNA3·1(+)/hβ3-AR〕。成功获得了稳定表达hβ3-AR基因的SH-SY5Y细胞株。     

依诺沙星分散片的人体相对生物利用度研究

目的:研究依诺沙星分散片(受试制剂)和依诺沙星片(参比制剂)的生物等效性。方法:采用双周期随机交叉试验设计。分别予20名男性健康志愿者依诺沙星受试制剂或参比制剂各0.4 g单剂量口服。用HPLC法测定给药后血样中依诺沙星的浓度。用DAS软件计算药动学参数。结果:受试制剂与参比制剂的Cm ax分别为(5 320±1 275)和(5 163±1 241)ng.mL-1;Tm ax(0.88±0.37)和(0.89±0.37)h;AUC0→24 h(23 317±7 187)和(22 904±7 098)ng.h.mL-1;AUC0→∞(24 502±7 396)和(24 085±7 377)ng.h.mL-1。受试制剂的相对生物利用度为(102±9)%。结论:依诺沙星分散片与依诺沙星片生物等效。     

组胺在肥胖发病中的作用及其机制研究进展

脑内组胺主要对脑的整体功能起调节作用，中枢组胺能神经可以调节下丘脑的许多功能，如饮食、咀嚼、饮水、神经内分泌、体温调节等。而IL-1β、饥饿、胰岛素引起的低血糖也可以刺激组胺能神经，下丘脑组胺能神经的激活又可以刺激肾上腺素能区的儿茶酚胺的分泌以调节外周能量代谢。     

A strategy for detecting absorbed bioactive compounds for quality control in the water extract of rhubarb by ultra performance liquid chromatography with photodiode array detector

Objective:To detect absorbed bioactive compounds of the water extract whose pharmacodynamic effect was craniocerebral protection for quality control assessment.Methods:Anthraquinones in water extract of rhubarb(WER),in cerebrospinal fluid(CSF) of patients with traumatic brain injury(TBI) and in ipsilateral cortex of TBI rats following oral WER were respectively explored by ultra performance liquid chromatography with photodiode array detector(UPLC-PDA) method developed in the present study.The effects of anthraquinones absorbed into injured cortex on superoxidase dismutase(SOD) activity in TBI rats were detected.The antioxidative anthraquinones absorbed into target organ were evaluated for quality control of WER.Results: Anthraquinones in WER were aloe-emodin,rhein,emodin,chrysophanol,and physcion.Only the last anthraquinone was found in CSF and in ipsilateral cortex under this chromatographic condition.Physcion increased SOD activity in TBI rats significantly.Conclusions:Physcion was the main active compound of rhubarb against craniocerebral injury via antioxidant pathway.According to our strategy,the exploration of physcion suggested the possibility of a novel quality control of WER in treating TBI injury.     

WISP1 基因多态性与肺癌易感性及铂类药物化疗敏感性的关系（摘要）

wnt诱导信号通路蛋白1（wntinduciblesignalingpathwayprotein1,WISPl）是生长因子CCN家族的成员。前期研究发现WISPl基因多态性与多种肺疾病的发生发展相关,包括哮喘、急性肺损伤等。本研究旨在探索WISPl基因多态性是否与肺癌易感性及肺癌铂类药物化疗敏感性相关。我们在中南大学湘雅医院收集了325例肺癌患者及254例健康对照血样。根据实体瘤化疗敏感性评价指南（RECIST）筛选出118例化疗敏感和174例化疗耐药的患者。所有血液样本均用Promega公司生产的基因组DNA纯化试剂盒提取基因组DNA。我们根据以下原则挑选了47个候选单核苷酸多态性位点（singlenucleotidePolymorphism,SNP）：（1）在中国人群中最小等位基因频率（MinorAlleleFrequency,MAF）不小于5％;（2）2基因区域的标签SNP;（3）位于启动子、3’非翻译区（UTR）和外显子区的SNPs。基因区域的标签SNPs（r^2≥0．8）运用Haploview4．2软件来挑选,所有SNPs都通过飞行质谱（sequenom）方法进行分型。所有SNP位点都进行Hardy—Weinberg平衡检验,并通过非条件Logistic回归计算OR值来评价多态与肺癌易感性及化疗敏感性的关系。OR值的计算校正了以下因素：年龄、性别、吸烟状况、肿瘤病理类型、肿瘤分级和化疗方案,并且运用Bonferroni校正法进行多重检验校正。所有统计分析采用SPSS130和PLINK1．07软件完成。经统计学分析,我们发现rs2977549与非小细胞肺癌患者化疗敏感性显著相关（P≤0．001）,并且与小细胞肺癌患者化疗敏感性（P=0．017）及肺癌易感性（P=0．026）也具有相关性,但后两者经校正后差异无统计学意义。因此,我们认为WISPrs2977549有可能是非小细胞肺癌铂类药物化疗敏感性的一个诊断标志物。     

Let-7a-2 rs629367和pri-miR-218 rs11134527与肺癌铂类联合化疗毒副反应的相关性研究

目的：探讨Let-7a-2 rs629367及pri-miR-218 rs11134527与肺癌铂类联合化疗毒副反应的相关性,探索其作为毒副反应预测生物标志物的可能。方法：纳入467例2011年11月至2013年5月期间在中南大学湘雅医院和附属肿瘤医院住院,并接受至少2个周期铂类联合化疗的肺癌患者,使用飞行时间质谱对rs629367和rs11134527进行基因分型,采用卡方检验分析毒副反应与临床特征的相关性,并采用非条件逻辑回归分析评估基因型与化疗后毒副反应的相关性。结果：rs629367及rs11134527位点的等位基因与肺癌铂类联合化疗的总毒副反应、胃肠道毒副反应及血液毒副反应均无显著相关性。通过分层分析发现,rs11134527在女性人群与总毒副反应（加性模型：校正OR=0.442,95%CI=0.214～0.914,P=0.028;显性模型：校正OR=0.283,95%CI=0.109～0.732,P=0.009）和胃肠道毒副反应（加性模型：校正OR=0.388,95%CI=0.182～0.826,P=0.014;显性模型：校正OR=0.231,95%CI=0.089～0....     

丹参乙酸镁对人胚肾细胞内血红素加氧酶表达的影响

目的:以人胚肾细胞(HEK293T)为研究对象,进一步证实丹参乙酸镁(magnesium litho-spermate B,LAB)对氧化应激下细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生的影响;以血红素加氧酶-1(heme oxygenase,HO-1)为靶点,观察LAB对高糖诱导下HO-1表达的影响。方法:运用流式细胞仪检测细胞内ROS水平,RT-PCR和Western blotting分别检测高糖和LAB干预下,HEK293T细胞内HO-1基因mR-NA和蛋白表达水平。结果:高糖和H2O2可使HEK293T细胞内ROS产生明显增多,LAB能够明显抑制应激状态时HEK293T细胞内ROS产生。HEK293T细胞给予高糖刺激后,HO-1 mR-NA表达和蛋白质表达均上调,于24 h达到高峰。HEK293T细胞预先30 min给予10、50和100 mol/L 3个不同浓度的LAB干预后,与高糖对照组比较,HO-1 mRNA和蛋白质表达水平均有显著性的增加。结论:LAB不但可以直接清除氧化应激下细胞内过多的ROS,而且还可以通过激活下游基因HO-1的表达而发挥抗氧化作用。