p150glued缺失对神经元中Rab蛋白表达水平的影响

目的探讨家族性运动神经元病致病基因DCTN1编码的p150glued蛋白缺失对于原代培养的皮质神经元细胞活性及Rab蛋白表达的影响。方法以野生型(WT)和p150glued缺失(p150glued KO)新生小鼠为细胞来源,体外培养皮质神经元7d和14d后,分别利用MTT法和Western blot法检测皮质神经元存活率以及Rab蛋白家族成分表达水平。结果与WT小鼠皮质神经元相比,p150glued KO小鼠皮质神经元在体外培养7d和14d时,细胞活力无明显差异,14d时Rab4、Rab5、Rab9、Rab11、Rab24蛋白表达水平未发生显著变化,而Rab7蛋白表达水平显著降低(P0.001)。结论 p150glued缺失对原代皮质神经元存活以及调控囊泡运输的Rab蛋白家族中Rab4、Rab5、Rab9、Rab11、Rab24的表达水平无明显影响,但特异性减弱晚期内体标志物Rab7蛋白的表达,可阻碍胞内溶酶体降解通路。     

骨质疏松椎体压缩性骨折MRI STIR黑色线信号与PVP疗效的相关性

[目的]探讨胸腰椎骨质疏松压缩性骨折MRI STIR黑色线信号与PVP术后疗效的相关性。[方法]2014年5月～2016年1月来本院就诊并接受PVP手术治疗的单椎体骨质疏松压缩性骨折患者482例,根据MRI STIR上是否出现黑色线信号187例列入阳性组,295例列入阴性组。比较两组围手术期资料、VAS评分和JOA评分、伤椎高度比和局部Cobb角变化,以及末期随访时再发骨折、椎体高度丢失和Cobb角变化及发生率。[结果]两组患者年龄、性别构成、累及节段构成和骨密度值的差异均无统计学意义(P0.05)。所有患者均顺利完成手术,两组在骨水泥注射量、骨水泥渗漏发生率的差异无统计学意义(P0.05),但阴性组骨水泥弥散度优于阳性组,差异有统计学意义(P0.05)。两组患者的VAS评分随时间延长而显著减少(P0.05),而JOA评分则随时间延长显著增加(P0.05);但是,相应时间点两组间VAS和JOA评分的差异均无统计学意义(P0.05)。末次随访时,阳性组再骨折发生率显著高于阴性组[(25/162) vs(23/272),P0.05)],阳性组椎体高度丢失发生率显著高于阴性组[(43/144) vs(23/272), P0.05],阳性组Cobb角增加的发生率显著高于阴性组[(25/162) vs(42/253),P0.05]。[结论]PVP手术是治疗胸腰椎骨质疏松压缩性骨折的重要有效手段,椎体骨质疏松压缩性骨折MRI STIR黑色线信号对PVP术后疗效具有一定预判性,术中应充分把握骨水泥弥散情况,提高术后疗效,减少丢失率。     

淫羊藿总黄酮改善自然衰老大鼠睾丸支持细胞分泌功能衰退的作用

目的研究淫羊藿总黄酮(TFE)对衰老睾丸支持细胞(Sertoli细胞)分泌功能衰退的影响,并从肌醇需酶1α(IRE1α)/X盒结合蛋白1(XBP1)信号通路探讨其分子机制。方法将36只SPF级18月龄SD雄性大鼠随机分为自然衰老组和TFE 10及40 mg·kg~(-1)组,每组12只;另取10只2月龄大鼠作为壮龄对照组。每天定时ig给TFE 1次,每5 d间隔2 d再继续ig给药,给药共计4个月。计算睾丸指数;HE染色观察睾丸组织形态;实时定量PCR和Western印迹法检测睾丸组织中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、骨形态形成蛋白4(BMP4)及干细胞因子(SCF)mRNA和蛋白表达水平;检测睾丸组织中磷酸化IRE1α(p-IRE1α)和XBP1蛋白表达水平;免疫荧光法检测睾丸组织内Sertoli细胞数量和p-IRE1α定位。结果与壮龄对照组比较,自然衰老组大鼠睾丸指数显著降低(P<0.01);与自然衰老组相比,TFE 40 mg·kg~(-1)组睾丸指数显著升高(P<0.05)。HE结果显示,自然衰老组睾丸曲细精管的形态结构紊乱,部分生精细胞发生脱落;TFE给药组能改善睾丸曲细精管的形态结构。实时定量PCR结果显示,与壮龄对照组比较,自然衰老组Sertoli细胞分泌因子GDNF和SCF mRNA表达水平均显著下调(P<0.01);Western印迹结果显示,GDNF,BMP4和SCF蛋白显著下调(P<0.01)。与自然衰老组相比,TFE给药组分泌因子mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.05,P<0.01)。Western印迹结果显示,与壮龄对照组比较,自然衰老组睾丸组织中p-IRE1α和XBP1蛋白表达均显著下调(P<0.01);与自然衰老组相比,TFE给药组p-IRE1α和XBP1蛋白表达显著上调(P<0.01)。免疫荧光结果显示,壮龄对照组、自然衰老组和TFE给药组Sertoli细胞数量无显著差异。不仅在生精细胞胞质广泛表达,在Sertoli细胞胞质亦有表达。结论 TFE可显著改善自然衰老所致大鼠睾丸Sertoli细胞分泌功能衰退,其机制可能与调节IRE1α/XBP1信号通路有关。     

卡培他滨通过STAT3信号通路对乳腺癌细胞凋亡、侵袭的机制研究

目的探讨卡培他滨通过STAT3信号通路对乳腺癌细胞凋亡、侵袭的影响及机制,为更合理的应用于乳腺癌的临床治疗提供参考。方法选择不同浓度卡培他滨(0. 1875、0. 375、0. 75、1. 5、3μg/ml)处理乳腺癌MCF-7细胞48h,通过MTT法检测细胞活力; 3μg/ml卡培他滨处理细胞48h,流式细胞术及Transwell小室分别检测细胞凋亡率及侵袭能力; Western bloting检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、信号转导与转录因子3 (STAT3)、p-STAT3蛋白表达。结果不同浓度的卡培他滨均可抑制细胞活力,且随剂量增加细胞活力降低,差异有统计学意义(P0. 05)。卡培他滨组细胞凋亡率显著高于对照组,细胞侵袭能力显著低于对照组,Caspase3蛋白表达显著高于对照组,MMP-2、MMP-9、p-STAT3蛋白表达显著低于对照组,差异均有统计学意义(P0. 05);两组间STAT3蛋白表达差异无统计学意义(P0. 05)。结论卡培他滨通过抑制STAT3信号通路降低乳腺癌细胞活力和侵袭能力,并诱导细胞凋亡。     

腺苷信号通路在肾纤维化中调节作用

肾纤维化是肾实质逐渐瘢痕化,肾功能逐渐丧失的病理过程。作为各种肾脏疾病的后期改变,肾纤维化严重影响着患者的预后。因此,延缓及逆转肾纤维化的进展是慢性肾脏病(CKD)的重要治疗目标。腺苷是细胞外的一种小分子核苷,近年来发现CKD患者肾组织间隙腺苷浓度与纤维化程度相一致,提示腺苷信号通路在肾纤维化中发挥了重要的调节作用。细胞膜上主要有4种腺苷受体亚型,A1AR、A2AAR、A2BAR与A3AR。这4种腺苷受体在肾组织的分布以及相应的生物学效应有很大的差异,不同的腺苷受体可以促进或抑制肾纤维化的病变进展。并且,腺苷信号通路在肾组织内与其他信号通路相互联系,共同调控肾损伤修复以及CKD患者肾纤维化的进展。因此,腺苷信号通路可能成为治疗肾纤维化的重要靶点,但是其具体信号作用及下游通路仍有待更多的研究。此外,中医药对腺苷信号通路的调控作用也是中医药治疗CKD的重要作用机制,有待于进一步的探索与证实。