As2O3下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制分子分泌的体外研究

目的 体外研究As2O3下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制分子分泌的作用。方法 获取体外经As2O3作用后再培养的Colon26培养上清，以不经As2O3作用的Colon26同步培养上清作对照，定量ELISA法测定这些上清中TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6和IL-10 5种免疫抑制分子的含量，实验研究这些上清对小鼠脾细胞MTT法测定的NK杀伤和Con A诱导转化以及流式细胞计数分析的IL-2Rα、CD3ε^＋ζ^＋和CD3ε^-ζ^＋4表达5项免疫功能指标的影响。结果 不经As2O3作用同步培养的Colon26上清，5种免疫抑制分子均可被测到，以TGF-β1含量最高；该上清对小鼠脾细胞5项免疫功能指标，均有显著抑制作用。As2O3作用后的Colon26，其第一次再培养上清，5种免疫抑制分子含量及对除CD3ε^-ζ^＋表达外的其余4项免疫功能指标的抑制，均明显降低；与第一次再培养上清相比，其第二次再培养上清，TGF-β1、VEGF和IL-4含量及对NK杀伤、ConA诱导转化和CD3ε^＋ζ^＋表达的抑制，均明显提高，其余无明显变化。相关分析显示，TGF-β1和IL-10与抑制ConA诱导转化及IL-2Rα表达正相关；IL-4与抑制ConA诱导转化、NK杀伤及CD3ε^＋ζ^＋表达正相关；VEGF和IL-6与5项免疫功能指标的抑制不相关。结论 As2O3可明显下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制分子的分泌，下调TGF-β1、VEGF和IL-4分泌的作用可持续48h，下调IL-6和IL-10分泌的作用可持续96h，可能是As2O3抗瘤效应机制之一。     

rhIL-15表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的 获得rhIL-15基因工程菌，方法 从肺癌细胞株A549中提取细胞总RNA，用RT-PCR法扩增编码人IL-15成熟区基因的片段，经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后，插入融合表达质粒pGEX-4T-2的相应酶切位点，构建重组融合蛋白表达质粒，并转化感受态大肠杆菌BL2l而得到工程菌。结果 重组质粒插入片段核酸序列测定的结果，与文献报道的IL-15蛋白成熟区的核酸序列相一致，该工程菌所表达的融合蛋白多数以包涵体的形式存在，占菌体蛋白总量的39%。复性后，纯化的rhIL-15蛋白经MTT比色法初步测定，具有促进CTLL-2细胞增殖的能力，结论 获得了具有生物学活性的rhIL-15高效表达菌株。     

中药黄芪抗肿瘤研究进展

通过系统查阅近年来的相关文献,对中药黄芪的抗肿瘤活性成分以及其抗肿瘤作用研究、作用机理探讨等进行了较为系统的归纳和综述,以期为该药物进一步的研究和开发提供参考.     

胃癌组织精蛋白抗原GP_2的提取与初步分析鉴定

本研究结合超声粉碎、超速离心与ＤＥＡＥ阴离子交换届析等方法，从手术切除的人胃癌组织中提取了一种糖蛋白抗原ＧＰ２。分析结果表明ＧＰ２为一分子量在６７－１００ＫＤ范围、非均一的糖蛋白。进一步的研究表明其在生化特征等方面都与已报道的ＣＥＡ、ＣＡ１９－９及其它胃癌抗原不同。     

活检组织尿素酶试验检测幽门螺杆菌感染阴性结果的探讨

目的：探讨活检组织尿素酶试验检测幽门螺杆菌感染的阴性问题。方法：在胃癌高发区取ＣＬＯｔｅｓｔ检测阴性的１０２血清标本，以ＥＬＩＳＡ法检测了血清抗Ｈｐ尿素酶抗体ＩｇＧ。     

胎儿胸腺细胞对OKT3反应性的研究

<正>OKT3对成熟T细胞有很强的促增殖作用,其对T细胞作用有赖于CD3分子的存在.据报道17周龄后胎儿胸腺细胞(FT)中CD3~+细胞已达60%以上,但关于FT对OKT3的反应性少有报道,本文对此进行了研究,旨在进一步了解FT的功能特性.1 材料和方法1.1 FT和胎儿脾单个核细胞(FSMC)制备 取18～28周龄胎儿胸腺,经200目铜同研磨,Hanks液洗涤后,用含10%小牛血清的1640培液制成FT悬液;胎脾制成单细胞悬液后,经淋巴细胞分离液分出FSMC,洗涤,制成FSMC悬液.1.2 细胞增殖测定 采用~3H-TdRn掺入法.FT和FSMC培养浓度为1×10~6/ml;OKT3(北医大提供小鼠腹水)和IL-2(中科院上海生化所产品)最终浓度分别为10~(-4)稀释和10U/ml;设立OKT3单独和OKT3+IL-2联合刺激两种培养条件,并设相应对照,每组为3个复孔.1.3 免疫荧光技术和流式细胞仪分析 采用间接免疫荧光染色法.抗CD25单抗和FITC标记的羊抗鼠IgG均为DAKO产品.用FACS420进行表型分析.2 结果     

OKT3＋rhIL－2激活胎儿脾细胞的研究

观察了１８～２８周龄胎儿脾单个核细胞（ＦＳＭＣ）在体外对ＯＫＴ３＋ｒｈＩＬ－２联合刺激的反应性，结果发现：ＯＫＴ３单独能活化ＦＳＭＣ，最适浓度ＯＫＴ３与ｒｈＩＬ－２联合对ＦＳＭＣ有强协同刺激作用。ＯＫＴ３刺激ＦＳＭＣ后明显促进ＩＬ－２Ｒ表达，表明ＯＫＴ３对ＦＳＭＣ的括化作用与ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒ途径相关。ＯＫＴ３＋ｒｈＩＬ－２协同诱导的ＦＳＭｃ能产生ＮＫ和ＬＡＫ活性，且ＬＭ活住较单用ｒｈＩＬ－２诱导者强，间接免疫荧光染色ＦＡＣＳ分析显示，ＯＫＴ３＋ｒｈｌＬ－２协同激活的ＦＳＭＣ主要是ＣＤ８￣＋Ｔ细胞。结果表明ＦＳＭＣ与成人ＰＢＭＣ－样能被ＯＫＴ３活化。     

抑瘤饮增加小鼠S180移植瘤巨噬细胞浸润及TNF-α和iNOS表达

目的动态研究中药复方抑瘤饮对小鼠S180移植瘤内巨噬细胞（Mφ）浸润及TNF-α和iNOS表达的影响，揭示其体内抗瘤免疫机制。方法Balb／c小鼠右腋皮下接种S180肿瘤细胞，24h后，抑瘤饮组小鼠每日灌服抑瘤饮，对照组小鼠每日灌服等量凉开水。分别于第10、加、30天和第40天杀鼠取瘤制成切片，免疫组化染色法检测肿瘤组织内Mφ浸润及TNF-α和iNOS表达，以图像分析系统对染色结果进行测定。结果所有4个时间点抑瘤饮组Mφ浸润均显著高于对照组；第10天时抑瘤饮组TNF-α和iNOS表达与对照组无差异，第20、30天和第40天时高于对照组。结论抑瘤饮体内抗瘤作用可能与增加肿瘤组织中Mφ浸润及TNF-α和iNOS表达有关。     

不同IL-15基因转染对 NCI-H446肿瘤细胞增殖的影响

目的探讨不同形式IL-15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCI—H446细胞增殖的影响。方法用本室已构建的3种转染不同IL-15基因（原型、成熟肽及以IL-2信号肽替代IL-15信号肽的改型IL-15基因）的NCI．H446细胞模型：CIL-15、CIL-15mp和CIL-2sp-IL-15mp,以野生株NCI-H446细胞（CW）为对照，台盼蓝拒染计数法测定细胞生长曲线、MTT法检测细胞增殖、流式细胞术分析细胞周期的变化、RT-PCR法检测cyclin D1和cyclin E的表达。结果与CW相比，CIL-15、CIL-15mp和CIL-2sp-IL-15mp增殖速率依次减慢、G0／G1期细胞比例依次增加、S期细胞和细胞周期蛋白cyclin E表达依次减少、cyclin D1表达无变化。结论3种IL-15基因转染均有使NCI—H446细胞增殖明显减慢的作用，强度依次为改型〉成熟肽〉原型；这种作用与降低NCI-H446细胞cyclinE的表达有关（r=0．953，P〈0．05），与cyclin D1的表达无关（r=0．155，P〉0．05）。