热休克蛋白-抗原肽复合物对移植黑色素瘤B16细胞小鼠的抑瘤效应

制备黑色素瘤B16细胞热休克蛋白-抗原肽复合物(HACs)及其粗提物(HAC-CEs),并进行其抑瘤效应的研究.结果表明应用凝胶过滤制备的HAC-CE3、HAC-CE4和HAC-CE5及应用亲和层析纯化的HAC60、HAC75和HAC97均不同程度地降低肿瘤发生率、延迟肿瘤发生时间和减少C57BL/6J小鼠死亡率.提示,60～97kD HACs具有抑瘤效应,而且为制备肿瘤疫苗提供了重要的实验依据.     

黑色素瘤B16细胞热休克蛋白 抗原肽复合物的体内外抑瘤效应 *

黑色素瘤B16细胞胞浆HSP-抗原肽复合物（HAC）的制备、免疫原性的诱导及其抑瘤作用的研究。方法:采用Tris-HCl提取和Sephacryl S-200凝胶过滤制备B16细胞HAC,通过C57BL/6J小鼠体内诱导特异性CTL,再经体内、体外实验检测其抑瘤作用。结果:凝胶过滤获得的含60～97 kD蛋白的41,47和53管的HAC可以降低肿瘤发生率、延长肿瘤出现时间及降低小鼠死亡率。结论: B16 细胞胞浆中的60～97 kD的HAC具有免疫原性及抑瘤作用,为制备肿瘤疫苗提供了实验依据。     

低剂量辐射适应性反应对辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤的影响

目的 探讨低剂量辐射对致癌剂量辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤的影响及其免疫学机理。方法 采用4次1.75GyX射线全身照射C57BL/6J小鼠诱发胸腺淋巴瘤模型, 观察不同剂量照后6个月小鼠胸腺淋巴瘤发生率, 照后1个月脾脏NK细胞毒活性、IL-2和γIFN分泌活性、腹腔巨噬细胞吞噬功能及其TNFα分泌活性以及胸腺细胞分化的变化。结果 每次1.75Gy照射前6h或12h接受25mGy或75mGy全身照射均可降低胸腺淋巴瘤发生率, 且预先接受75mGy全身照射的作用效果更为明显; 每次1.75Gy照射前12h接受75mGy照射小鼠, 上述免疫指标均比单纯1.75Gy照射组增强, 且多数指标接近假照射组; 其胸腺CD4^-CD8^-和CD4^-CD8⁺细胞较单纯1.75Gy照射组减少、CD4⁺CD8⁺细胞增多。结论 低剂量辐射可诱导辐射诱发胸腺淋巴瘤适应性反应, 对致癌剂量辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤有抑制作用, 其抑制作用的免疫学机理可能与低剂量辐射的免疫增强效应及诱导的免疫学适应性反应, 减轻致癌剂量辐射对机体免疫功能的损伤, 使胸腺淋巴瘤前体细胞在形成胸腺淋巴瘤之前被免疫系统清除有关。     

低剂量辐射对荷瘤小鼠免疫功能的刺激作用

目的：探讨低剂量电离辐射对荷瘤机体免疫功能的影响。方法：采用 Ｃ５７ Ｂ Ｌ／６ Ｊ小鼠右后肢腓肠肌内接种 ｌｅｗ ｉｓ 肺癌细胞做为实验动物模型,在肿瘤接种后 １０ ｄ,给予 ７５ ｍ Ｇｙ Ｘ 射线全身照射,于照射后 １８ ｈ 测定荷瘤小鼠胸腺、脾脏某些免疫学参数的变化,包括胸腺细胞自发增殖力、脾细胞数,脾细胞对 Ｃｏｎ Ａ、 Ｌ Ｐ Ｓ反应性,脾细胞白细胞介素（ Ｉ Ｌ ２）分泌量,脾脏自然杀伤细胞（ Ｎ Ｋ）、淋巴因子激活的杀伤细胞（ Ｌ Ａ Ｋ）、特异性细胞毒性 Ｔ 淋巴细胞（ Ｃ Ｔ Ｌ）杀伤活性。结果：与荷瘤假照射组相比,７５ ｍ Ｇｙ Ｘ 射线照射组小鼠的上述免疫学参数明显提高（ Ｐ＜ ００５～０１）。结论：低剂量电离辐射可明显增强荷瘤机体的免疫功能,可能具有肿瘤治疗的潜在临床意义。     

大豆皂甙对小鼠移植肿瘤生长的影响

目的探讨大豆皂甙（ＴＳ）对肿瘤细胞生长的影响及其机制。方法采用Ｃ５７ＢＬ／６小鼠皮下接种Ｓ１８０细胞后，经口连续７天注入胃内０（对照组）、１０、２０和４０ｍｇ／ｋｇＴＳ。结果第８天注入上述剂量ＳＴ组小鼠移植肿瘤平均重量分别为１．１８、０．８和０．８９ｇ，均较对照组２．２３ｇ明显减轻（Ｐ＜０．０５～０．０１）。小鼠腹腔注入Ｓ１８０细胞后，连续７天经腹腔分别注入上述剂量ＴＳ，第８天各组小鼠Ｓ１８０细胞周期进程均延缓，Ｇ０／Ｇ１期Ｓ１８０细胞平均百分数分别为３０．７６、４１．７４和３４．８４，均较对照组２４．７６增多，４０ｍｇ／ｋｇ组小鼠最明显（Ｐ＜０．０５）；Ｓ期Ｓ１８０细胞分别为１５．２８、１１．６４和１１．８０，均较对照组３０．３０明显减少（Ｐ＜０．０５）。结论ＴＳ对小鼠移植肿瘤生长有抑制作用，可能与肿瘤细胞从Ｇ０／Ｇ１期向Ｓ期进程受阻有关。     

共焦显微镜在不典型虹膜角膜内皮综合征诊断中应用

目的 探讨共焦显微镜检查在虹膜角膜内皮综合征临床诊断中的应用价值.方法 对8例(其中6例单眼患病,2例双眼患病)常规检查无法确诊的疑似虹膜角膜内皮综合征病例进行共焦显微镜检查.观察角膜内皮层病变结构.结果 活体共焦显微镜检查发现患眼角膜内皮细胞均偏大而且形状不规则,细胞核反光明显增高,可见散在双核、多核、偏位核及分叶核等改变,7例细胞边界模糊,部分病例有局灶内皮细胞缺失、胞内环形暗区、分裂状细胞等改变.此外,3例单眼患病病例的对侧眼在共焦显微镜下发现内皮细胞密度下降、大小不均等改变.最后确诊为原发性进行性虹膜萎缩型2例、Chandler综合征4例、Cogan-Reese综合征2例.结论 共焦显微镜可以在细胞水平上无创、高分辨率地观察到虹膜角膜内皮综合征患眼角膜内皮层特征性的显微结构改变,且不受角膜水肿的影响,大大提高了虹膜角膜内皮综合征诊断的准确性,并有助于早期诊断,具有很高的应用价值.     

携带人可溶性TRAIL基因的重组腺病毒在肺癌细胞中的转染效率及表达特性研究

目的研究重组腺病毒感染肺腺癌细胞A549的转染效率及重组腺病毒介导的人可溶性肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(hTRAIL95-281)基因的体外表达。方法用不同感染滴度(MOI)(0-10 000 VP/cell)的重组腺病毒Ad-CMV-EGFP转染A549细胞后48 h收集细胞,经流式细胞仪检测其转染效率,并在共聚焦荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达;用MOI为5 000 VP/cell的Ad-CMV-EGFP感染肿瘤细胞后不同时间(24 h、48 h、72 h和96 h)收集细胞,经流式细胞仪检测其转染效率;用重组腺病毒Ad-CMV-hTRAIL95-281感染293T细胞后不同时间收集培养物用ELISA方法检测上清中的TRAIL表达。结果重组腺病毒载体对A549细胞的转染效率和绿色荧光蛋白表达在一定范围内随着MOI的增加而增高,MOI为5 000 VP/cell时转染效率达峰值,MOI为10 000 VP/cell时转染效率反而降低。重组腺病毒转染A549细胞后72 h内转染效率随时间的变化而增高,峰值为98%,96 h有所降低(P0.05)。转染重组腺病毒Ad-CMV-hTRAIL95-281的293T细胞在转染后24 h表达量最高(P0.001),达到131.45 pg/ml,48 h时TRAIL蛋白表达量明显降低(P0.01),72小时也有继续降低的趋势。结论重组腺病毒在适宜的MOI值下,在A549细胞中96小时内均有较高的转染效率,且重组腺病毒介导的可溶性hTRAIL基因在体外能够有效表达。     

辐射诱导表达载体pEgr-hTRAIL的构建及其对肿瘤细胞的体外诱导凋亡作用

目的：构建携带人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（hTRAIL）基因的辐射诱导表达载体pEgr-hTRAIL,并研究其在人肺腺癌细胞株A549中的表达及促凋亡作用。 方法：采用常规分子生物学方法构建表达质粒pEgr-hTRAIL,体外通过脂质体转染A549细胞,经G418筛选稳定转染细胞A549-shTRAIL,利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测目的基因的表达,采用Annexin-V-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞早期凋亡。 结果：经限制性内切酶酶切鉴定pEgr-hTRAIL表达质粒构建正确;稳定转染细胞A549-shTRAIL的hTRAIL mRNA表达量明显增加;稳定转染细胞A549-shTRAIL的凋亡细胞百分数明显增加,是A549细胞的1.8倍（P<0.05）。 结论：成功构建pEgr-hTRAIL表达质粒,体外稳定转染细胞A549-shTRAIL具有明显诱导凋亡作用。     

纤维化拮抗和敏感小鼠胸部照射后IL-1α、IL-1β及肿瘤坏死因子-α mRNA水平表达的早期和持续改变

目的:探讨照后所致肺损伤潜伏期肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1α(IL-1α)和白介素-1β(IL-1β)mRNA表达水平的变化;在肺炎和肺纤维化发生过程中这些变化是否持续存在;这些变化在纤维化拮抗和敏感小鼠之间的差异。     

小鼠B16黑色素瘤细胞HACs的提纯及其抑瘤作用和机理的探讨

目的：从小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞胞浆中提纯热休克蛋白抗原肽复合物（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ－ａｎｔｉｇｅｎ ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｍｐｌｅｓｅｓ．ＨＡＣＣｓ）,并观察其抑瘤作用及探索其机制。方法：ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析法纯纯Ｂ１６ ＨＡＣｓ,应用体内免疫法检测ＨＡＣ的抑瘤作用,结晶紫染色法检测γ－ＩＦＮ分泌活性,ＣｏｎＡ诱导的淋巴母细胞增殖法检测ＩＬ－２分泌活性,＾３Ｈ－