肿瘤相关抗原肽与低剂量全身照射的协同抑瘤作用

目的观察低剂量X射线照射对小鼠肝癌H-22细胞膜相关抗原肽(TAP)提取物的抑瘤作用及免疫学功能的影响,为低剂量辐射(LDR)与肿瘤疫苗联合治疗肿瘤提供实验依据。方法采用微酸洗脱法制备相对分子质量≤3×106的细胞膜TAP提取物,先给予小鼠75mGyX射线全身照射,12h后以TAP提取物皮下免疫小鼠,检测脾细胞CD3、CD69和TCRαβ表面标记、脾T细胞亚组百分数的变化、脾细胞ConA反应性、IL-2和IFN-γ活性、CTL杀伤活性的变化及抑瘤效应。结果小鼠经TAP提取物免疫后,移植肿瘤的发生率降低,肿瘤平均出现时间延迟,生长速度减慢;脾细胞CD3分子和CD69分子的表达显著升高,脾细胞ConA反应性、IFNγ分泌活性和CTL杀伤活性显著增强,IL-2分泌增多。而同时给予LDR的小鼠不仅上述功能不同程度增强,脾CD8+细胞百分数显著增高。结论LDR与细胞膜TAP具有协同抑瘤作用,细胞免疫力的明显增强可能为其机制之一。     

pEgr.p-TNFα的构建及其在NIH3T3细胞中的辐射诱导表达

目的分离和扩增Egr-1启动子,构建pEgr p-TNFα质粒,探讨不同辐射剂量对被转染的NIH3T3细胞中TNFα表达的影响.方法用PCR方法从小鼠基因组DNA中分离并扩增出Egr-1启动子,构建pEgr.p-TNFα表达质粒,脂质体介导的转染法转染小鼠NIH3T3细胞,用ELISA方法检测不同剂量X射线照射后的TNFα表达水平.结果本实验得到的Egr-I启动子序列与报道基本一致,Egr-1启动子和TNF α cDNA正确插入表达载体;各照射组在不同剂量X射线照射后8 h,TNFα表达水平均高于假照射组(P＜0.05～0.001).结论本实验分离和扩增的Egr-1启动子具有辐射激活和诱导下游基因表达增强的功能,低剂量辐射可激发并启动下游基因表达,在基因-放射联合治疗中有重要意义.     

细胞遗传学损伤与辐射诱导的G1时相阻滞

目的:通过辐射诱导的G₁时相阻滞是否改变照后首次有丝分裂细胞染色体重排的类型和频率,以验证G₁时相阻滞为DNA损伤提供修复时间这一假说。     

辐射诱导人胃癌上皮肿瘤细胞凋亡及有丝分裂死亡与凋亡的关系

7种人类胃上皮癌细胞系(HSC-39K6,HSC-40Al、HSC-43Cl、HSC-45M2、HSC-41E6、HSC-42H和SH101-P4)和2种人类正常成纤维细胞(ST-Fib、ST-Fib2)分别于体外接受剂量率为71.5cGy/min的不同剂量60Coγ射线照射,照后不同时间检测细胞数、有丝分裂活性、植入效率(PE)、活存分数(SF);根据凋亡细胞显微镜下染色质凝固、边缘化及核断片等形态学特点,检测凋亡细胞发生率;同时,采用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期分布。     

PTEN基因稳定转染联合辐射对肿瘤细胞周期进程及G1期激酶抑制蛋白P27kip1表达的影响

目的：研究辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN体外转染对人脑胶质瘤SHG-44细胞周期进程及G₁期激酶抑制蛋白P27表达的影响。方法：脂质体包裹重组载体体外转染肿瘤细胞并经G418筛选稳定表达细胞株,光学显微镜和透射电镜观察稳定转染细胞形态,以Western blotting 法检测PTEN基因的辐射诱导表达情况,应用流式细胞术研究稳定转染联合0~10Gy X-射线照射对胶质瘤细胞周期进程及P27^kip1的表达。结果：稳定转染PTEN基因的SHG-44细胞PTEN蛋白的相对表达量可被辐射诱导增强,5Gy以内PTEN蛋白的相对表达量随照射剂量增加而增加;稳定转染细胞超微结构有明显的退行性改变,可见核内染色质趋边的类似早期凋亡的改变;稳定转染联合X-射线照射细胞周期发生明显改变,细胞从G₁期到S期发生阻滞,细胞周期相关蛋白P27表达上调。 结论：PTEN基因稳定转染联合辐射可诱导肿瘤细胞G₁期阻滞,并与P27^kip1表达上调有关。     

人野生型抑癌基因PTEN/MMAC1的巢式PCR法克隆、测序及表达载体的构建

目的 :克隆人野生型抑癌基因 PTEN/MMAC1 c DNA序列并构建其表达载体。方法 :利用RT- nested PCR法从正常人胎盘组织中扩增出约 1 2 0 0 bp的 DNA片段 ,与 p UCm- T载体连接 ,作全自动测序确证 ,并将其重组入 pc DNA 3.1载体中 ,构建为表达质粒 pc DNA- w P。结果 :对 PCR产物进行测序 ,序列基本正确。结论 :利用 RT- nested PCR法成功克隆了人野生型抑癌基因 PTEN/MMAC1c DNA序列并构建了表达质粒 pc DNA- w P。     

pEgr-ssEndostatin重组质粒瘤内辐射诱导表达及其抗肿瘤作用

目的 观察pEgr-ssEndostatin基因-放射治疗对移植黑色素瘤B16小鼠的抗肿瘤作用及其在瘤内辐射诱导表达。方法 肿瘤局部注射脂质体包裹的pEgr-ssEndostatin重组质粒后42h，接受20Gyx射线照射，观察放疗后不同时间肿瘤大小，检测放疗后第2天瘤内Endostatin转录水平。结果 pEgr-ssEndostatin基因-放射治疗荷瘤小鼠能够增强放疗疗效；单纯接种pEgr-ssEndostatin质粒组和接种pEgr-ssEndostatin质粒 20Gy照射组小鼠的肿瘤组织内有Endostatin mRNA表达，且pEgr-ssEndostatin质粒照射组的EndostatinmRNA水平高于单纯pEgr-ssEndostatin质粒组。结论 pEgr-Endostatin基因-放射治疗抗肿瘤作用明显优于单纯放疗和单纯基因治疗，肿瘤局部转染重组质粒后照射瘤内Endostatin表达增强。     

人类第6号染色体NOTCH_4基因位点多态性与精神分裂症的关系

目的 :探讨人类第 6号染色体上与精神分裂症有关的易感基因位点。方法 :应用 PCR-RFLP方法检测 88个精神分裂症患者及其健康父母组成的核心家系单核苷酸多态性 ( SNP)rs3870 71。结果 :精神分裂症患者健康父母 rs3870 71等位基因频率的分布符合 Hardy- Weinberg平衡 ;单倍型相对风险分析 ( HRR)表明 ,该基因位点与精神分裂症无关联 ( χ2 =0 .5 4 9,P>0 .0 5 ) ;传递不平衡检验 ( TDT)显示 ,父母和患者之间不存在传递不平衡 ,杂合父母传递给受累子女与非传递等位基因频率分布无差异 ;该基因位点与精神分裂症的关系妄想症状密切相关 ( χ2 =7.1 89,P=0 .0 2 8)。结论 :rs3870 71本身不是决定精神分裂症易感的 SNP位点 ,但是其位点多态性与精神分裂症的关系妄想症状密切相关     

从大鼠睾丸组织学变化看人参三醇组甙的辐射防护作用

本文报道大鼠受5Gy X线全身照射腹腔注入人参三醇组甙后14天,观察单纯照射组、人参三醇组甙照射组、人参三醇组甙组和正常对照组睾丸组织学变化,发现人参三醇组甙照射组未出现单纯照射组睾丸组织的异常变化,证明人参三醇组甙可保护睾丸生殖和内分泌功能,或促进其辐射损伤的恢复过程。本文还简要的分析了人参三醇组甙辐射防护作用的可能机理。     

人肝再生增强因子FAD辅助的巯基氧化酶活性测定及其活性位点研究

目的:建立一种灵敏、简便、有效的判断人肝再生增强因子蛋白(ALRp)巯基氧化酶活性的方法，并分析ALRp的CXXC活性结构域在其发挥酶活性中的作用。方法:通过定点突变将ALRp的CXXC结构中的一个半胱氨酸突变为丙氨酸。巯基氧化酶实验分4组：①ALR组；②ALR-FAD组；③ALR突变体-FAD组；④无蛋白对照组。以还原型谷胱甘肽(GSH)为底物，于不同时点测定每组巯基浓度。结果:ALR-FAD组巯基浓度随时间的推移不断下降；其它3组巯基浓度在整个实验中均无明显变化。结论:建立了一种半定量分析ALRp巯基氧化酶活性的方法；并证明ALRp必须在FAD辅助下发挥酶活性，且ALRp的CXXC结构是ALRp具有该酶活性必不可少的部分。