APE1 siRNA增强卵巢癌细胞铂类敏感性的实验研究

目的:本研究通过观察脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1/Ref-1)小分子干扰核糖核酸(siRNA)对卵巢癌细胞中APE1表达水平及顺铂敏感性的影响,探讨以APE1为靶点的基因治疗在卵巢癌化疗增敏中的临床应用前景。方法:应用RNAi技术抑制卵巢癌顺铂敏感株A2780和顺铂耐药株A2780/CP70中APE1的表达,并用MTT法及TUNEL等技术检测APE1 siRNA对卵巢癌细胞铂类敏感性的影响。结果:MTT药物敏感试验表明,20MOI和40MOI APE1 siRNA处理后,A2780细胞顺铂IC50值由对照组的31.62μmol/L分别降低为13.38μmol/L和3.48μmol/L,有统计学差异(P<0.01)。20MOI和40MOI APE1 siRNA处理后,A2780/CP70细胞的顺铂IC50值分别为39.73μmol/L和12.43μmol/L,较对照组(64.20μmol/L)分别下降了38.12%和80.64%,有统计学差异(P<0.01)。TUNEL凋亡原位检测表明,40MOI APE1 siRNA处理后,A2780和A2780/CP70细胞的凋亡指数分别为(42.16±3.61)%和(46.11±3.81)%,分别是DDP组的3.57倍、4.94倍,有统计学差异(P<0.01)。结论:抑制APE1表达能显著增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,APE1可能是逆转卵巢癌铂类耐药的有效靶点。     

KLF4在宫颈癌中的表达与临床意义

目的:探讨转录因子KLF4在宫颈癌中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测78例宫颈癌、14例宫颈原位癌、15例慢性宫颈炎及13例正常宫颈组织中KLF4蛋白的表达并分析其与临床病理指标间的关系。结果:KLF4在宫颈癌、宫颈原位癌、慢性宫颈炎及正常宫颈组织中的阳性表达率分别为26.9%,71.4%,73.3%和84.6%,在宫颈癌中的阳性表达较其它各组明显下降（P<0.05）。KLF4在宫颈癌中的表达与组织分型无关(P>0.05),在不同细胞分化等级与临床分期间KLF4表达有明显差异（P<0.05）,主要表达于分化较好的组织中,随着分化程度的降低及临床分期的进展KLF4阳性表达率呈下降趋势,在伴有淋巴结转移的宫颈癌组织中KLF4的阳性表达率较不伴转移者显著下降（P<0.05）。结论:KLF4在宫颈癌中的表达与其进展呈负相关,在宫颈癌的发生发展过程中发挥抑癌基因作用,有望成为预测宫颈癌发生及判断患者预后的新的参考指标。     

Notch1信号蛋白在卵巢癌中的表达及临床意义

目的：检测Notch1在卵巢上皮性肿瘤的表达,探讨其在卵巢癌的形成和转化过程中的表达特点及其与卵巢癌临床病理学参数的关系。方法：采用免疫组化法、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法及Western blot法检测109例卵巢癌（其中65例为单侧卵巢癌）、65例单侧卵巢癌患者健侧卵巢（配对对照）及48例正常卵巢组织（正常对照）中Notch1的表达。结果：（1）卵巢癌中Notch1阳性表达率[95.4%（104/109）]显著高于配对对照组[7.7%（5/65）]和正常对照组[6.3%（3/48）]（P〈0.01）,而后两组则无显著差异（P〉0.05）。（2）卵巢癌中Notch1的表达与临床分期（FIGO）及病理分化程度有关（P〈0.01）,临床分期越高、分化程度越低,Notch1的表达越高;而与年龄、家族史、肿瘤位置、有无腹水、有无周围组织浸润、有无淋巴结转移、病理类型无关（P〉0.05）。结论：Notch1在卵巢癌的发生发展过程中起着促癌基因作用,为卵巢癌的深入研究提供了一条新思路。     

survivin基因RNA干涉对宫颈癌裸鼠移植瘤生长及凋亡和顺铂化疗敏感性的影响

目的观察survivin基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长、凋亡和化疗敏感性的影响。方法随机选择雌性BALB/C-nu/nu裸小鼠24只,细胞接种法建立4组人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,每天观察裸鼠一般状况及肿瘤生长情况,通过绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤生长抑制率,观察survivin基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响;通过免疫组化SP法检测各组移植瘤组织中survivin蛋白表达情况,TUNEL染色观察survivin基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤凋亡的影响;当肿瘤体积达0.2cm3时给予顺铂化疗以观察survivin基因RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤化疗敏感性的影响。结果成功建立4组人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤体积在每个检测点均明显小于接种HeLa组;观察结束时,接种HeLa-s2组裸鼠瘤重明显小于接种HeLa组,分别为：（0.369±0.043）g和（1.150±0.136）g（P〈0.05）;接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤生长抑制率为67.9%。免疫组化结果显示：接种HeLa-s2组裸鼠survivin蛋白表达显著下降;TUNEL染色结果显示：接种HeLa-s2组裸鼠细胞凋亡明显增多,凋亡指数（AI）值达（22.73±1.37）%。顺铂化疗后不同检测点接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤体积明显小于接种HeLa组,肿瘤生长明显受抑;观察结束后,接种HeLa-s2组裸鼠瘤重明显小于接种HeLa组,分别为：（0.323±0.058）g和（1.347±0.173）g（P〈0.05）;接种HeLa-s2组裸鼠肿瘤细胞凋亡明显增多,与接种HeLa组AI比较,接种HeLa-S2组AI明显升高,分别为：（37.38±1.01）%和（5.19±0.61）%（P〈0.05）。结论 survivin基因RNAi可通过下调移植瘤组织survivin蛋白表达抑制移植瘤生长并促进其凋亡,并通过增加顺铂化疗诱导的细胞凋亡,增强顺铂化疗对移植瘤的生长抑制,进而提高移植瘤对顺铂化疗的敏感性。     

顺铂诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡后氧自由基水平的变化

 目的 探讨顺铂诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡后氧自由基水平的变化特点.方法 应用MTT比色法、流式细胞术、电子显微镜观察化疗前后Hela细胞活性、细胞周期,以及凋亡形态的改变;用化学比色法检测细胞凋亡前后细胞内丙二醛(MDA)、超氧化歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的含量.结果 顺铂处理Hela细胞48 h的IC50值为3 mg/L,当DDP浓度在3 mg/L以下时,对Hela细胞无明显毒性作用,超过此浓度时,其毒性呈剂量效应关系(P<0.001);与亲本细胞相比较,Hela+DDP细胞的G2期细胞数增多,为(90.80±8.37)%,而G1、S期的细胞数明显减少,分别为(30.84±8.02,5.30±0.60)%.扫描及透射电镜下可观察到典型的凋亡早期细胞形态学改变;当DDP作用48 h后,细胞内SOD的活性比对照组显著降低(P<0.05),细胞内的脂质过氧化产物MDA的含量与对照组相比显著升高(P<0.01),抗氧化剂GSH的含量较对照组明显降低(P<0.05).结论 经DDP可诱导Hela细胞的凋亡,其机制可能与细胞的氧化损伤有关.     

人卵巢浆液性囊腺癌侵袭转移与β—catenin相关性的实验研究

目的:从β-catenin(β-cat)在人卵巢浆液性囊腺癌高低转移细胞株HO-8910PM及HO-8910中的表达情况探讨其与卵巢癌侵袭转移的关系.方法:分别运用免疫荧光法,Western Blotting以及RT-PCR检测细胞中β-catenin表达水平,MTT法、Transwell小室法检测细胞侵袭能力、迁移能力及黏附能力.结果:β-catenin在人卵巢浆液性囊腺癌高低转细胞株中表达水平具有显著性差异(P<0.05,P<0.01).结论:β-catenin的表达与人卵巢浆液性囊腺癌细胞的侵袭、转移密切相关.     

血管内皮生长因子和碱性成纤维生长因子在子宫内膜异位症中的表达及临床意义

 目的 探讨有关血管生长因子在血管生成及子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法 应用免疫组织化学法分析血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)与子宫内膜组织中微血管密度及其阳性表达率的关系。结果 在异位内膜中VEGF、bFGF的阳性表达率分别为75％和63.89％,明显高于正常内膜组42.86％和39.29％(P<0.01,P<0.05)。VEGF、bFGF的阳性表达率在卵巢子宫内膜样囊肿组织、子宫肌腺症组织中无差异(P>0.05)。微血管密度在VEGF、bFGF的阳性组表达明显高于VEGF、bFGF的阴性表达组(P<0.01)。结论VEGF、bFGF与子宫内膜异位症的血管生成密度相关,VEGF、bFGF在子宫内膜异位症的发生发展中发挥作用。     

人反义VEGF基因表达载体的构建及其对卵巢癌细胞增殖的影响

目的：构建人反义VEGF基因真核表达载体,进行抗血管生成治疗卵巢癌实验。方法：RT－PCR法获得人VEGF基因,将VEGF基因反向克隆入真核表达载体pcDNA3中,酶切鉴定结果。用此真核表达载体转染人卵巢癌细胞HO－8910,G418筛选获得阳性克隆,RNA斑点杂交鉴定HO－8910细胞中VEGF表达。Western blot及间接免疫荧光法检测转染前后HO－8910 细胞中VEGF蛋白表达。检测转染前后瘤细胞的生物学性状及裸鼠体内致瘤性。结果：RT－PCR法得到VEGF基因,并获得反向构建的VEGF真核表达载体。VEGF反义RNA部分阻断了HO－8910细胞中VEGF表达,转染后单个细胞的克隆形成能力明显减弱;细胞周期中,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞增殖能力降低;形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀,核染色质边集,凝集成块,可见明显的凋亡改变。裸鼠体内致瘤性降低。结论：成功构建了反义VEGF基因真核表达载体,该载体可明显抑制卵巢癌细胞增殖,为卵巢癌的基因治疗提供了一定的实验依据。     

肝细胞生长因子及其受体c-Met在卵巢癌细胞侵袭转移中的作用

肝细胞生长因子(HGF)是一种多肽生长因子,具有促进包括肝细胞、上皮细胞、内皮细胞、造血细胞等多种类型细胞的生长、迁移和形态发生的作用. 它还参与多种细胞的增殖、迁移,对各类肿瘤的侵袭转移有着重要的诱导作用. 本文通过对近年来国外有关文献的回顾,希望能够为进一步探讨HGF及其受体在卵巢癌治疗中的具体意义提供新的思路.