Notch3及Notch基因细胞内区在卵巢上皮性癌组织中的表达及DAPT对卵巢上皮性癌细胞的作用

目的 了解卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中Notch3及Notch基因细胞内区(NICD)蛋白的表达水平及其临床意义,探讨γ分泌酶抑制剂--氮-[氮-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯(DAPT)对卵巢癌细胞系OVCAR3、A2780细胞的作用.方法 (1)选取2006年7月到2009年6月在北京大学第一医院因卵巢癌接受手术治疗且临床病理资料完整的患者共58例,选取同期因子宫肌瘤或子宫腺肌病及其他非卵巢病变行子宫全切除+双侧附件切除术者共21例作为对照,采用蛋白印迹法检测卵巢癌及正常卵巢组织中NICD蛋白的表达水平,免疫组化法检测卵巢癌及正常卵巢组织中Notch3蛋白的阳性表达率,并对不同临床病理特征的卵巢癌组织中NICD和Notch3蛋白表达进行比较.(2)体外培养卵巢癌OVCAR3、A2780细胞,加入不同浓度(分别为0.1、1、5、10μmol/L)的DAPT,设仅加溶剂二甲基亚砜(DMSO)者为空白对照,采用蛋白印迹法检测DAPT处理后卵巢癌OVCAR3、A2780细胞中NICD蛋白表达水平的变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测卵巢癌细胞的生长情况,流式细胞仪检测细胞增殖指数(PI)、S期细胞比例(SPF)和细胞凋亡率的变化.结果 (1)卵巢癌、正常卵巢组织中Notch3蛋白的阳性表达率分别为78%(45/58)、24%(5/21),两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).卵巢癌、正常卵巢组织中NICD蛋白的表达水平分别为1.64±0.19、0.98±0.20,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).卵巢癌组织中,NICD蛋白的表达水平,病理分化程度为低分化者(1.90±0.22)明显高于高～中分化者(1.25±0.21,P<0.05),手术病理分期为Ⅲ～Ⅳ期者(1.80±0.21)明显高于Ⅰ期者(1.21±0.15,P<0.05),而不同病理类型和是否行新辅助化疗间比较,差异则无统计学意义(P>0.05);Notch3蛋白的阳性表达率,不同病理类型、手术病理分期、病理分化程度及是否行新辅助化疗间比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(2)DAPT(5 μmol/L)处理不同时间(分别为24、48、72 h)后,OVCAR3、A2780细胞中NICD蛋白的表达水平均明显低于空白对照(P<0.05).不同浓度(分别为0.1、1、5、10 μmol/L)的DAPT处理不同时间(分别为0、6、12、24、36、48、72 h)后,OVCAR3、A2780细胞的生长均明显受抑制,分别与空白对照比较,差异均有统计学意义(P<0.05).不同浓度(分别为0.1、1、5、10 μmol/L)的DAPT处理不同时间(分别为24、48、72 h)后,OVCAR3、A2780细胞的SPF、PI明显下降,细胞凋亡率明显升高,分别与空白对照比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且随着药物浓度的升高,出现这种作用的时间越早.结论 Notch3、NICD蛋白可能在卵巢癌的发生、发展中起一定的促进作用;DAPT能抑制卵巢癌细胞的增殖,促进卵巢癌细胞的凋亡,其机制可能与抑制NICD蛋白的生成有关.     

卵巢上皮性肿瘤组织中KiSS-1、基质金属蛋白酶9和核因子κBp65蛋白的表达及其相关性

目的 探讨KiSS-1、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、核因子κB（NF-κB）p65蛋白3者在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及其相关性。方法 采用免疫组化方法检测50份卵巢上皮性癌（卵巢癌）、20份卵巢交界性肿瘤、20份卵巢良性肿瘤和10份正常卵巢组织中KiSS-1、MMP-9、NF-κBp65蛋白的表达,并分析其临床意义及3者间的相关性。结果 KiSS-1蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率（80％）明显高于良性肿瘤组织及正常卵巢组织（分别为35％、10％;P〈0．05）;在卵巢交界性肿瘤组织中阳性表达率（65％）明显高于正常卵巢组织（P〈0．05）。在卵巢癌组织中,KiSS-1蛋白阳性表达率与淋巴结转移有关（P〈0．05）,与手术病理分期、病理类型及病理分级均无关（P〉0．05）;MMP-9蛋白阳性表达率与手术病理分期及淋巴结转移有关（P〈0．05）,而与病理类型及病理分级均无关（P〉0．05）;NF-KBp65蛋白阳性表达率与手术病理分期、病理分级及淋巴结转移有关（P〈0．05）,而与病理类型无关（P〉0．05）。在卵巢癌组织中,KiSS-1与MMP-9、NF．KBp65蛋白表达呈显著负相关关系（rs=-0．547,P〈0．05;rs=-0．414,P〈0．05）;MMP-9与NF-κBp65蛋白表达呈显著正相关关系（rs=0．695,P〈0．05）。结论 KiSS-1基因可能对卵巢癌的转移起一定的抑制作用;KiSS-1基因可能通过抑制MMP-9、NF-κB基因,从而发挥抑制卵巢癌转移的作用。     

Aurora-A/STK15在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与预后的关系

目的探讨Aurora-A/STK15在上皮性卵巢癌组织中的表达变化及其与预后的关系。方法应用显微切割法从石蜡切片上提取总RNA,实时定量PCR和免疫组化方法检测80例原发性卵巢上皮性癌和29例正常卵巢组织中Aurora-A/STK15mRNA及蛋白水平的表达,分析其作为卵巢癌标志物的可行性以及与预后的相关性。结果上皮性卵巢癌组织中Aurora-A/STK15mRNA的表达明显高于正常卵巢组织[（60.5±74.2）对（2.19±1.4）,P〈0.01],但mRNA的表达水平与卵巢癌的分期和分级以及生存时间无关,P〉0.05;上皮性卵巢癌Aurora-A/STK15蛋白的阳性表达率也明显高于正常卵巢组织（87.3%对6.9%,P〈0.05）,蛋白表达水平随病理分级和手术分期增加而增加,与病理分级密切相关（P〈0.05）,而与手术分期的相关性无统计学意义（P〉0.05）;在行理想肿瘤细胞减灭术并行术后辅助泰素化疗的病例组,Aurora-A/STK15蛋白高表达预后好,总的生存时间较低表达病例生存时间长（P〈0.05）;在除泰素以外的铂类药物化疗组,Aurora-A/STK15蛋白高表达则与不良预后相关,高表达者总的生存时间短（P〈0.05）。结论Aurora-A/STK15在上皮性卵巢癌中存在异常表达,且与卵巢癌的分化程度以及手术联合辅助化疗的预后密切相关,有望成为卵巢癌个体化治疗疗效的预测因子。     

卵巢上皮性癌组织中磷酸化蛋白激酶B和PTEN蛋白的表达及其意义

目的探讨磷酸化蛋白激酶B（pAKT）和FYEN蛋白在卵巢上皮性癌（卵巢癌）组织中的表达及其相互关系,并分析两者与卵巢癌患者预后的关系。方法应用免疫组化法,检测12份正常卵巢、20份卵巢良性上皮性肿瘤、12份卵巢交界性上皮性肿瘤、80份卵巢癌组织中pAKT和PTEN蛋白的表达,并分析两者间的关系。采用单因素和多因素生存分析法分析pAKT和FYEN蛋白表达与卵巢癌患者预后的关系。结果pAKT蛋白在正常卵巢、卵巢良性上皮性肿瘤组织中的阳性表达率分别为8％、10％。显著低于卵巢癌组织的55％（P〈0．01）;而FYEN蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率为45％,显著低于正常卵巢和良性上皮性肿瘤组织的100％、80％（P〈0．01）。pAKT和FYEN蛋白在交界性肿瘤组织中的阳性表达率分别为25％、67％,分别与卵巢癌组织比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。pAKT和FYEN蛋白表达与卵巢癌手术病理分期、病理分级、有无淋巴结转移和远处转移有关（P〈O．05）,而与年龄、病理类型、有无腹水无关（P〉0．05）。卵巢癌组织中pAKT和PTEN蛋白间的表达呈明显负相关关系（r=-0．444,P〈0．01）。单因素生存分析显示,手术病理分期、病理分级、有无淋巴结转移和远处转移、pAKT和FrEN蛋白阳性表达与患者预后有关（P〈0．05）。Cox回归多因素分析表明,FYEN蛋白阳性表达和手术病理分期是影响卵巢癌患者预后的独立危险因素（P〈0．05）。结论pAKT蛋白过度表达伴随PTEN蛋白表达缺失可能参与卵巢癌的发生、发展,PTEN蛋白表达缺失是卵巢癌患者预后不良的独立危险因素。     

宫颈癌及癌前病变组织中Notch1及HPV16 E6/E7表达的研究

目的 探讨Notch1受体和人乳头瘤病毒16感染在宫颈癌前病变和宫颈癌发生发展中的作用。方法 采用免疫组化SP法检测18例宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）和35例宫颈癌标本中Notch1受体及HPV16E6/E7蛋白的表达,以34例正常宫颈组织及慢性宫颈炎组织作为对照。比较各组间Notch1及HPV16E6/E7表达的差异,并分析Notch1与HPV16E6/E7表达的关系。结果 Notch1蛋白在细胞胞浆、胞核及胞膜中表达,HPV16E6/E7在细胞核中表达。从对照组到CIN组到宫颈癌组,Notch1及HPV16E6/E7的表达均逐渐增强（P〈0.01）。Notch1的阳性表达与宫颈癌不同分期、分化程度、淋巴结是否转移无关（P〉0.05）。在宫颈癌组中Notch1与HPV16E6/E7的表达均呈正相关性（P〈0.01）。结论 Notch1表达与HPV16E6/E7感染可能与CIN及宫颈癌的发生密切相关,两者在宫颈癌的发病机制中可能协同发挥作用。     

PARP-1与NF-κB在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及意义

目的:研究卵巢上皮性肿瘤组织中聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)、核转录因子κB(NF-κB)的表达及意义.方法:采用免疫组织化学SP法检测10例正常卵巢组织、30例卵巢良性肿瘤、30例卵巢交界性肿瘤和50例卵巢癌原发灶中的PARP-1和NF-κBp65蛋白表达.结果:①PARP-1蛋白和NF-κBp65蛋白在卵巢癌组织中阳性表达率均高于卵巢交界性肿瘤、卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织,差异均有统计学意义(P＜0.05);而两者的阳性表达率在卵巢交界性肿瘤、卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).②PARP-1和NF-κBp65蛋白与卵巢癌的病理分级、临床分期和有无淋巴结转移有关(P＜0.05).③卵巢癌组织中PARP-1与NF-κBp65表达呈正相关(r=0.596,P＜0.05).结论:PARP-1和NF-κB在卵巢癌组织中过表达,与卵巢癌的发生、发展有关.PARP-1可能通过作用于NF-κB促进卵巢上皮性肿瘤细胞的恶性转化.     

卵巢癌中微小RNA-210的表达及临床意义

目的：检测上皮性卵巢癌组织中微小RNA-210（miR-210）的表达水平,初步探讨miR-210在卵巢癌发病中的作用。方法：采用多聚腺苷酸加尾实时荧光定量反转录聚合酶链反应［ｐｏｌｙ（Ａ）－RT-qPCR]检测上皮性卵巢癌、良性上皮性卵巢肿瘤及正常卵巢组织标本中miR-210的表达。结果：miR-210在卵巢癌组中表达低于良性卵巢肿瘤组和正常卵巢组,3组间差异有统计学意义（F=893.213,P=0.000）;且随着卵巢癌组织临床分期及组织分化的进展,miR-210表达有下降的趋势。结论：miR-210在上皮性卵巢癌组织中低表达,在卵巢癌发生发展中发挥重要的抑癌基因作用,且与卵巢癌分期、组织分级及淋巴结转移密切相关。     

卵巢上皮性肿瘤的临床病理特征及其细胞周期素D1和p53蛋白表达的研究

目的研究卵巢上皮性癌（卵巢癌）和交界性上皮性肿瘤的临床病理特征及其细胞周期素D1（cyclin D1）和p53蛋白表达的情况,探讨卵巢癌和交界性上皮性肿瘤在发病机制上的联系。方法分析45例卵巢癌（卵巢癌组）和54例卵巢交界性上皮性肿瘤（交界性肿瘤组）的临床病理资料,采用免疫组化法检测两组组织中cyclin D1、p53蛋白的表达情况,并分析其与临床病理特征的相关性。结果（1）临床病理特征：①年龄：交界性肿瘤组平均年龄为42．5岁（14～82岁）,中位数年龄41岁;卵巢癌组平均年龄为53．5岁（26～80岁）,中位数年龄51岁。②分期：按国际妇产科联盟（FIGO）分期标准,交界性肿瘤组Ⅰ期48例、Ⅱ期3例、Ⅲ期3例;卵巢癌组Ⅰ期6例、Ⅱ期8例、Ⅲ期26例、Ⅳ期5例。③病理类型：交界性肿瘤组以黏液型为主[占56％（30／54）],其次为浆液型[其中普通型11例,微乳头型5例;占30％（16／54）];卵巢癌组以浆液型（其中低度恶性19例,高度恶性3例）为主[占49％（22／45）]。④病理分化程度：卵巢癌组高分化5例,中分化17例,低分化或未分化23例。⑤预后：交界性肿瘤组5年生存率为98％,卵巢癌组为51％,两组比较,差异有统计学意义（P=0．000）。（2）cyclin D1和p53蛋白的表达及其与卵巢癌和交界性肿瘤临床病理特征的相关性：卵巢癌组cyclin D1和p53蛋白的阳性表达率分别为31％（14／45）和56％（25／45）,p53蛋白表达强度与病理分化程度呈正相关（r=0．320,P=0．032）;交界性肿瘤组cyclin D1和p53蛋白的阳性表达率分别为69％（37／54）和6％（3／54）。其中,普通型浆液性交界性肿瘤与高度恶性浆液性癌比较（两者cyclin D1蛋白阳性表达率分别为91％和26％,p53蛋白分别为0和58％）,差异有统计学意义（P〈O．01）;而微乳头型浆液性交界性肿瘤与低度恶性浆液癌比较（两者cyclin D1蛋白阳性表达率分别为3／5和2／3,p53蛋白分别为1／5和1／3）,差异则无统计学意义（P〉0．05）。结论cyclin D1蛋白的过度表达常见于卵巢浆液性交界性肿瘤及低度恶性浆液性癌组织中,而p53蛋白的过度表达更多见于高度恶性浆液性癌组织中。卵巢浆液性交界性肿瘤与高度恶性浆液性癌具有不同的发病机制,而微乳头型浆液性交界性肿瘤与低度恶性浆液性癌的关系可能更为密切。     

GPNMB在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的探讨非转移性黑色素瘤糖蛋白B（GPNMB）在上皮性卵巢癌组织中的表达,及其与卵巢癌临床病理学特征的关系。方法采用免疫组织化学染色和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测116例卵巢癌、42例卵巢良性肿瘤和40例正常卵巢组织中GPNMB的表达。结果免疫组织化学染色和RT-PCR结果显示卵巢癌患者GPNMB表达水平明显升高,与正常对照组、卵巢良性肿瘤组相比差异均有统计学意义（P〈0.05）。GPNMB表达水平与卵巢癌的组织学类型相关（P〈0.05）,而与年龄、病理分级、FIGO分期、大网膜转移、淋巴转移及腹水量无相关性（P〉0.05）;结论卵巢癌患者中GPNMB明显升高,并与组织学类型相关,提示可能参与了卵巢癌的发病。     

CDH1基因异常甲基化在上皮性卵巢癌中的检测及临床意义

目的 探讨CDH1基因异常甲基化在上皮性卵巢癌发生发展中的作用及临床意义。方法 对中国医科大学附属第一医院妇科、辽宁省肿瘤医院妇科1999年至2006年63例上皮性卵巢癌组织原发灶、41例相应的盆腹腔转移灶、10例癌旁卵巢组织及20例正常卵巢组织,采用甲基化特异性聚合酶链式反应（MSP）法检测CDH1基因启动子区甲基化状态。结果 上皮性卵巢癌组织原发灶及相应的盆腹腔转移灶中存在CDH1基因启动子区异常甲基化,发生率分别为28.6%、39.0%,显著高于正常卵巢组织（P〈0.01）。10例癌旁卵巢组织中1例检测到CDH1基因启动子区甲基化,20例正常卵巢组织未检测到CDH1基因启动子区甲基化。CDH1基因启动子区甲基化的发生率在临床Ⅰ期和Ⅱ期显著低于Ⅲ期和Ⅳ期（P〈0.05）,在高分化癌中低于低分化癌（P〈0.05）。结论 CDH1基因启动子区异常甲基化与上皮性卵巢癌发生密切相关,并可能与上皮性卵巢癌转移、临床分期及分化程度有关。     

上皮性卵巢癌患者外周血中RRM2的表达及临床意义

目的:探讨核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)在上皮性卵巢癌患者外周血中的表达,初步探讨其作为肿瘤标记物在上皮性卵巢癌诊断中的意义。方法:应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测70例上皮性卵巢癌、16例低度潜能卵巢恶性肿瘤、15例卵巢良性肿瘤患者和15例健康外周血标本单个核细胞中的RRM2相对表达量。结果:(1)上皮性卵巢癌患者与低度潜能恶性肿瘤患者外周血中的RRM2 mRNA相对表达量显著高于良性卵巢肿瘤患者和正常对照组(P<0.05),后两组比较则无显著差异(P>0.05);(2)RRM2 mR-NA表达随临床分期的进展呈上升趋势(P<0.05),RRM2 mRNA表达量与FIGO分期、腹水、组织分化、淋巴转移及大网膜转移有关(P<0.05),与患者年龄、组织学分型无关(P>0.05);(3)上皮性卵巢癌患者外周血中RRM2 mRNA与血清中CA125、HE4的表达呈正相关(P<0.05);(4)ROC曲线分析显示,RRM2 mRNA临界值为1.759时诊断指数最大(敏感性94.3%,特异性76.6%),AUC=0.896(95%CI 0.819～0.948,P=0.000)。结论:RRM2 mRNA可能在上皮性卵巢癌的发生发展中发挥癌基因的作用,有望成为诊断上皮性卵巢癌的新指标。     

雌激素受体β与磷酸化细胞外信号调控蛋白激酶1、2在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的:探讨上皮性卵巢癌组织中雌激素受体β(ERβ)与磷酸化细胞外信号调控蛋白激酶1、2(p-ERK1/2)的表达及其与临床病理参数的关系。方法:选取2010年10月至2011年12月青岛大学医学院附属医院经病理证实的上皮性卵巢癌组织标本70例,卵巢良性肿瘤24例,正常卵巢组织24例。采用RT-PCR和免疫组织化学SP法检测上述组织中ERβ和p-ERK1/2的表达。结果:(1)卵巢癌组织中ERβmRNA相对表达水平(0.3764±0.9826)显著低于卵巢良性肿瘤(0.4900±0.3742)及正常卵巢组织(0.4980±0.0434)(P<0.05)。卵巢癌组织中ERβ表达与组织学分型、细胞学分级及淋巴转移有关(P<0.05);ERβ蛋白阳性表达率及其与临床病理特征关系与ERβmRNA一致;(2)ERK1/2 mRNA相对表达水平(0.6007±0.1554、0.6951±1.3694)显著高于卵巢良性肿瘤(0.3575±0.0479、0.5125±0.0411)及正常卵巢组织(0.3027±0.1024、0.5431±0.0811)(P<0.05);ERK1/2表达与细胞学分级、临床分期及腹水有关(P<0.05);p-ERK1/2蛋白阳性表达率及其与临床病理特征与p-ERK1/2 mRNA一致。ERβ蛋白与p-ERK1/2蛋白表达呈负相关(r=-0.282,P<0.05)。结论:ERβ低表达和p-ERK1/2高表达于卵巢癌组织,可能在卵巢癌的发生、发展中有重要作用。     

上皮性卵巢癌患者肿瘤局部微环境中Treg/Th17比例平衡的研究

目的:探讨上皮性卵巢癌(EOC)患者外周血、卵巢癌组织和癌旁腹膜中Treg/Th17是否存在失衡。方法:选取2011年9月至2013年12月同济大学第一妇婴保健院收治的16例EOC(EOC组)、11例良性上皮性肿瘤(良性肿瘤组)及14例健康成年女性(对照组),收集患者外周血并分离淋巴细胞;收集4例EOC患者腹水并分离淋巴细胞。流式细胞术检测外周血及腹水中Th17、Treg细胞占CD4+T细胞的比例。选取同一时间段在本院手术患者术中留取的卵巢肿瘤组织、腹膜组织及转移灶组织,包括13例EOC、16例EOC种植灶癌旁腹膜、5例良性卵巢肿瘤组织及腹膜,用免疫荧光染色分析Th17及Treg细胞在良性卵巢肿瘤、EOC原发灶和癌旁腹膜中的浸润情况。结果:(1)EOC患者外周血中Treg比例为(5.16±3.85)%,显著高于对照组[(2.41±1.76)%])和良性肿瘤组[(2.3873±2.336)%](P=0.025,P=0.043),后两组比较无统计学差异。EOC患者外周血中Th17细胞比例为(3.15±3.045)%,显著高于对照组[(1.22±1.13)%](P=0.044);良性肿瘤患者[(1.93±1.745)%]与EOC患者和对照组比较,差异均无统计学意义;Treg/Th17细胞比值在3组间均无统计学差异。EOC患者腹水与外周血中的Th17、Treg细胞比例及Treg/Th17比值比较,差异均无统计学意义(P0.05)。(2)EOC组肿瘤组织中Treg和Th17细胞比例及Treg/Th17比值分别为(0.1062±0.077)%、(0.143±0.056)%和0.80±0.56,与良性肿瘤组织[0%、(0.0789±0.11)%、0]比较,均显著增高(P均0.05)。(3)卵巢良性肿瘤腹膜中未见Treg及Th17细胞浸润,EOC腹膜种植灶癌旁腹膜中Treg、Th17细胞比例及Treg/Th17比值分别为(0.1024±0.1)%、(0.2254±0.23)%和0.8113±1.097,较良性肿瘤组均显著提高(P0.05)。(4)早期和晚期EOC组织中Th17、Treg比例以及Treg/Th17比值比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:卵巢癌患者外周血Treg和Th17比例升高,但并未发现失衡。卵巢癌组织及癌旁腹膜微环境中存在失衡,这一失衡可能促进肿瘤增殖与迁移。     

血小板反应素-1在卵巢上皮癌组织的表达及与p53肿瘤抑制蛋白和肿瘤血管形成的关系

目的：检测血小板反应素-1（TSP-1）和p53肿瘤抑制蛋白在卵巢上皮癌的表达，并探讨其表达与肿瘤血管形成及患者预后的关系。方法：用免疫组化法检测57例原发性卵巢上皮癌组织和22例正常卵巢组织中TSP-1和p53蛋白的表达，并用CD34抗体免疫染色后对微血管密度（MVD）计数。结合随诊资料，回顾分析上述指标与卵巢上皮癌临床病理特征及3年存活率之间的关系。结果：卵巢上皮癌组织中TSP-1的阳性表达率低于正常卵巢组织（分别为47．4％和72．7％，P=0．042），且多为弱阳性表达；卵巢上皮癌组织中p53的阳性率为61．4％，正常卵巢组织未检测到p53蛋白。TSP一1表达和p53蛋白阳性与卵巢上皮癌的手，术病理分期、大网膜转移和癌性腹水相关。卵巢上皮癌组织的MVD高于正常卵巢组织（分别30．3土8．5和20．1±8．1，P=0．014）。TSP-1表达与MVD呈负相关（P〈0．001），p53蛋白阳性与MVD呈正相关（P〈0．001）。TSP-1表达与患者的3年存活率呈正相关（P=0．001），p53蛋白阳性与3年存活率呈负相关（P=0．002）。TSP-1阴性而p53蛋白阳性组患者的3年存活率明显低于TSP-1阳性而p53蛋白阴性组（分别为13．6％和78．6％，P〈0．001）。结论：卵巢上皮癌组织TSP-1和p53蛋白的表达与肿瘤血管形成有关，对上述分子的检测有助于临床判断卵巢上皮癌的生物学行为。     

SREBP1、ACLY在卵巢上皮性癌中的表达及临床意义

目的:研究胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达,探讨其与患者临床病理参数和预后的相关性。方法:采用免疫组织化学法检测SREBP1、ACLY在卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤和卵巢上皮性癌中的表达。结果:SREBP1、ACLY蛋白在卵巢上皮性癌组织中的阳性表达率(67.71%,70.83)显著高于卵巢良性肿瘤(31.25%,37.5%)、卵巢交界性肿瘤(13.33%,13.33%)(P<0.05)。卵巢上皮性癌组织中SREBP1、ACLY蛋白阳性表达率与FIGO分期、组织学分级明显相关(P<0.05);卵巢上皮性癌中SFEBP1蛋白表达与ACLY蛋白的表达呈正相关(r=0.83,P<0.001)。卵巢上皮性癌组织学分级、FIGO分期、SREBP1和ACLY表达水平均与患者预后有关(P<0.05),FIGO分期是影响卵巢癌患者预后的独立因素(P<0.05)。结论:SREBP1、ACLY蛋白与卵巢上皮性癌的发生、发展和预后有关。SREBP1、ACLY可能成为治疗卵巢癌的新靶点。     

NF-κBp65,c-IAP2,Caspase-3在宫颈癌中的表达及意义

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)p65、细胞凋亡抑制蛋白-2(c-IAP2)和半胱氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)在宫颈癌组织中表达的意义。方法:应用免疫组织化学方法检测NF-κBp65、c-IAP2和Caspase-3在44例宫颈癌、50例宫颈上皮内瘤变(CIN)及30例正常宫颈组织中的表达情况。结果:宫颈癌和CIN中NF-κBp65,c-IAP2的阳性表达率高于正常宫颈组织(P<0.05),而Caspase-3的表达率低于正常宫颈组织(P<0.05),3个指标在CINⅠ和正常宫颈组织中的表达无差异(P>0.05),在CINⅡ～Ⅲ中NF-κBp65,c-IAP2的表达高于正常宫颈组织(P<0.05),而Caspase-3的表达低于正常宫颈组织(P<0.05);NF-κBp65,c-IAP2,Caspase-3在宫颈癌的不同临床分期中的表达无差异(P>0.05),NF-κBp65,c-IAP2在低分化和有淋巴结转移组宫颈癌组织中的表达高于高分化组织和无淋巴结转移组(P<0.05),而Caspase-3的表达低于高分化组织和无淋巴结转移组(P<0.05);NF-κBp65与c-IAP2在宫颈癌中的表达呈正相关,NF-κBp65,c-IAP2在宫颈癌中的表达与Caspase-3的表达呈负相关。结论:宫颈癌中NF-κBp65、c-IAP2高表达而Caspase-3低表达可能和宫颈癌的发生发展有关。     

乙酰肝素酶mRNA在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其临床病理相关性研究

目的探讨乙酰肝素酶（Hpa）mRNA在卵巢上皮性癌中的表达及与临床病理的相关性。方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测41例卵巢上皮性癌、17例卵巢良性肿瘤和22例正常卵巢组织中Hpa mRNA表达，并分析其与卵巢癌临床病理的相关性。结果①卵巢上皮性癌组织、良性肿瘤组织和正常组织Hpa mRNA阳性表达率分别为58．54％、29．41％和22．73％。癌组织Hpa mRNA阳性表达率显著高于良性组及正常组（P〈0．01），良性组与正常组Hpa mRNA阳性表达率比较，差异无显著性（P〉0．05）。②Ⅲ～Ⅳ期卵巢恶性肿瘤患者中Hpa mRNA的阳性表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者（P〈0．05）。低分化肿瘤组织中Hpa mRNA的阳性表达率显著高于中、高分化者（P〈0．05）。③Long-rank分析显示Hpa mRNA表达阳性者的累积生存率明显低于阴性者，差异有显著性（P〈0．05）。结论卵巢上皮性癌中Hpa mRNA阳性表达率明显增高，并与卵巢上皮性癌病情进展有关，可作为卵巢上皮性癌转移和预后的一个重要预测指标。     

上皮性卵巢肿瘤组织中膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)的表达及临床意义

目的:研究膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化EnVision法检测40例上皮性卵巢癌(A组)、20例交界性上皮性卵巢肿瘤(B组)、20例良性上皮性卵巢肿瘤(C组)和20例正常卵巢组织(D组)中MT1-MMP的表达和预后。结果:MT1-MMP在上皮性卵巢癌中的阳性率(95%)显著高于良性卵巢肿瘤(45%)和正常卵巢(35%),A组中的强阳性率(77.5%)显著高于B组(30%)、C组(10%)和D组(10%)(P<0.05);D组中未绝经者的阳性率(66.7%)显著高于绝经者(9.1%)(P<0.05);晚期上皮性卵巢癌中的强阳性率(100%)显著高于早期的强阳性率(52.6%)(P<0.05);中低分化(G2～G3级)上皮性卵巢癌中的强阳性率(86.7%)显著高于高分化(G1级)的强阳性率(50%)(P<0.05);有淋巴转移的上皮性卵巢癌中的强阳性率(94.4%)显著高于无淋巴转移组的强阳性率(63.6%)(P<0.05)。在单因素生存分析中,A组中MT1-MMP的表达与患者预后不良有关;B组中MT1-MMP表达强阳性组(++～+++)的复发率(66.7%)显著高于MT1-MMP表达阴性～弱阳性组(-～+)的复发率(7.1%)(P<0.05)。结论:MT1-MMP可能参与卵巢的正常生理功能,它的异常高表达在上皮性卵巢癌的浸润、转移和交界性上皮性卵巢肿瘤的复发中起了重要作用,MT1-MMP的表达与患者预后不良有关。     

宫颈鳞癌组织中AQP1和AQP4的表达及意义

目的:探讨水通道蛋白1、4(AQP1、AQP4)在宫颈鳞癌组织的表达及意义。方法:免疫组化染色检测AQP1和AQP4在20例正常宫颈组织、10例CINⅠ级、10例CINⅡ级、8例CINⅢ级组织及45例浸润性宫颈鳞癌组织的分布和表达特点。结果:AQP1主要于血管内皮细胞表达,它在正常宫颈组织、宫颈CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级组织及宫颈浸润性鳞癌组织的阳性表达指数分别为10.14±1.48、10.61±1.23、10.46±0.92、10.64±0.52和11.85±2.74,宫颈鳞癌组织AQP1表达明显高于正常组织(P<0.05),FIGOⅡ期宫颈鳞癌组织中AQP1的表达指数(13.15±2.38)明显高于I期(11.06±2.68)(P<0.05),肿瘤伴淋巴结转移者AQP1表达指数(13.37±2.91)明显高于淋巴结未转移者(11.30±2.50)(P<0.05);AQP4主要于鳞状上皮细胞以及肿瘤细胞表达,它在正常宫颈组织、宫颈CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级组织及宫颈鳞癌组织的阳性表达指数分别为3.26±0.99、3.79±1.22、3.68±1.47、3.92±1.48和4.23±2.03,宫颈鳞癌组织AQP4表达高于正常组织(P<0.05),淋巴结转移肿瘤组织AQP4表达指数(5.32±1.69)高于淋巴结未转移者(3.84±1.02)(P<0.05);AQP1和AQP4于肿瘤组织中表达无相关性(P>0.05)。结论:AQP1、AQP4过表达可能在宫颈癌变及进展过程中起重要作用,并分别通过增加血管内皮细胞和肿瘤细胞对水的通透性,促进肿瘤侵袭和转移。     

CA125阴性卵巢癌血清标志物差异蛋白质组学的研究

目的:通过二维差异凝胶电泳(2-DEDIGE)和基质辅助激光解吸离子化-飞行时间(MALDI-TOF/TOF)串联质谱差异蛋白质组学方法寻找CA125阴性卵巢上皮癌血清标志物,以提高卵巢上皮癌诊断的灵敏度和特异度。方法:收集103例卵巢上皮癌,60例正常对照,63例卵巢良性肿瘤、63例盆腔良性病变的血清。按年龄匹配,选取6例CA125阴性卵巢癌和6例正常对照组的血清等容积混合。祛除血清高丰度白蛋白和IgG后进行2-DEDIGE。实验重复3次。通过DeCyder软件分析得出有显著差异的蛋白质点,MALDI-TOF/TOF鉴定差异蛋白质。分别用WesternBlot和ELISA方法验证获选的血清标志物。结果:(1)经2-DEDIGE实验得出有显著差异的蛋白质点41个,MALDI-TOF/TOF成功鉴定了其中的28个蛋白质点。上调最显著的蛋白质点为结合珠蛋白(haptoglo-bin,Hp),下调最显著的蛋白质为转铁蛋白(transferrin,Tf);(2)WesternBlot和ELISA验证结果显示,CA125阴性卵巢上皮癌血清Hp和Tf与正常对照有显著差异(P<0.001);(3)CA125+Hp+Tf联合检测(两者或两者以上阳性判断为阳性)诊断卵巢上皮癌的灵敏度和特异度高于CA125、Hp和Tf单独检测。结论:Hp和Tf是卵巢上皮癌血清中差异表达的蛋白质,可作为卵巢上皮癌的血清标志物。CA125+Hp+Tf联合检测有助于提高卵巢上皮癌诊断的灵敏度和特异度,有助于提高CA125阴性卵巢上皮癌的检出率。