蟾蜍灵的药理活性研究进展

蟾蜍灵(bufalin)属强心甙类物质,来源于中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans Cantor)和黑眶蟾蜍(Bufo melanostictus Schneider)耳后腺及皮肤腺分泌之浆液[1],是中药蟾酥中提取的一种毒性配基,分子式为C24H34O4,相对分子质量为386.5.研究表明,这种成分具有抗癌、强心、毒性、麻醉等作用,它对下丘脑-垂体-睾丸及中枢神经系统功能也有一定影响.现分别综述如下.     

蟾蜍灵对豚鼠心房的作用

<正> 蟾蜍灵(bufalin)为中药蟾酥的有效成分。曾报道这类物质对哺乳类动物心脏有正性肌力作用,但对其作用机理并未阐明。本文主要对蟾蜍灵的强心作用作进一步探讨。     

蟾蜍灵对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞IL-6和TGF-β1表达的影响

目的 探讨蟾蜍灵对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及白细胞介素6(IL-6)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为蟾蜍灵干预(A)组、LPS刺激(B)组和对照(C)组,应用台盼兰拒染法检测蟾蜍灵对GMC的细胞毒性作用,MTT观察LPS诱导的GMC增殖的变化,RT-PCR检测TGF-β1和IL-6 mRNA的相对表达.结果 与B组相比,A组蟾蜍灵10-8mol/L和10-7mol/L明显抑制GMC增殖,A492nm值分别为[(0.818±0.058)和(0.574±0.182),P<0.01].B组IL-6和TGF-β1 mRNA相对表达量较C组和A组明显减少(P<0.01).结论 蟾蜍灵明显抑制LPS诱导的大鼠系膜细胞增殖及其IL-6和TGF-β1的表达.     

花背蟾蜍耳后腺分泌物中化学成分的研究

作者对花背蟾蜍耳后腺分泌物的药效研究结果表明,其强心、升压等作用主要来自其氯仿提取物,作者应用中、低压液相色谱法,首次对花背蟾蜍分泌物的化学成分行进了分离,经UV,IR,~1H-NMR,MS鉴定确定了其中5种成分。分别为胆甾醇(Cholesterol),南美蟾毒精(Marinobufagin),日蟾毒它灵(Gamabufotalin),远华蟾毒精(Telocinobufagin),阿根廷蟾毒精(Arenobufagin). 另外,花背蟾蜍耳后腺分泌物有特臭,作者用水蒸汽蒸馏法提取,GC-MS鉴定,对其挥发性成分进行了研究。     

MAPK信号通路对蟾蜍灵抑制Jurkat细胞增殖及诱导其凋亡的影响

目的研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对蟾蜍灵(Bufalin)抑制急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖及诱导细胞凋亡的影响,初步探讨MAPK在蟾蜍灵治疗急性淋巴细胞白血病中的作用。方法WST-1法检测细胞的增殖活力,流式细胞术分析细胞凋亡。结果蟾蜍灵作用Jurkat细胞48 h,抑制细胞增殖50%的药物浓度(IC50)为44 nmol/L;5 nmol/L及以上蟾蜍灵以剂量依赖方式抑制Jurkat细胞增殖;20 nmol/L蟾蜍灵分别联合PD98059、SP600125,可显著增加对Jurkat细胞增殖的抑制,促进细胞凋亡;20 nmol/L蟾蜍灵联合SB203580作用于Jurkat细胞,可显著减少对Jurkat细胞增殖的抑制但对其凋亡无显著影响。结论 MAPK信号通路与蟾蜍灵抑制急性淋巴白血病Jurkat细胞增殖及诱导凋亡有相关性,表现为ERK和JNK促进增殖、抑制细胞凋亡;p38MAPK抑制增殖,但对凋亡无明显影响。     

一例蟾蜍中毒的急救护理

蟾蜍俗称癞哈蟆,其耳下腺和皮肤膜分泌物是有毒的,其分泌物制剂名蟾蜍酥,是强心中药之一.蟾酥有效成分为蟾蜍毒,对心脏作用类似洋地黄,其作用原理系通过兴奋迷走神经而引起,无蓄积作用,此外,尚有催吐、升压、刺激胃肠道及皮肤、粘膜的局部麻醉作用[1].我院急诊科于1999年9月17日成功救治一位急性蟾蜍中毒的患者,现将急救护理报告如下.     

毒性中药蟾酥质量检测方法研究

目的:建立蟾蜍中多种药效及毒性成分蟾蜍毒素的定性定量检测方法。方法:采用液相色谱-质谱/质谱联用方法检测蟾酥中多种蟾蜍毒素成分。结果:建立了华蟾毒它灵、蟾蜍灵、华蟾毒配基及脂蟾毒配基的LC-MS/MS检测方法。比较了蟾酥样本的液相色谱-质谱/质谱联用分析数据。对4个不同来源中华大蟾蜍及黑眶蟾蜍的蟾酥样本进行检测,检出华蟾毒它灵、蟾蜍灵、华蟾毒配基及脂蟾毒配基的含量范围为0.05%~5.12%(w/w)。结论:液相色谱-质谱/质谱联用方法可用于蟾酥定性定量检测,并为质量评价提供参考。     

中华大蟾蜍皮化学成分的研究

从中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans Cantor)皮水溶性部分应用制备型反相HPLC分离得到一个新蟾蜍毒素,根据光谱(UV,IR,¹HNMR,¹³CNMR,EIMS,FDMS)、氨基酸分析及化学性质,确定其结构为Ⅰ所示,命名为蟾毒它灵3-丁二酰精氨酸酯,同时还分到三个已和蟾蜍毒素;蟾毒灵3-丁二酰精氨酸酯(Ⅱ),华蟾毒精3-丁二酰精氨酸酯(Ⅲ),脂蟾毒配基3-丁二酰精氨酸酯(Ⅳ)。     

HPLC法测定蟾皮中蟾毒配基类成分的含量

目的用HPLC法测定蟾皮中蟾蜍灵、脂蟾毒配基、华蟾蜍精等成分的含量。方法样品经乙醇室温浸渍提取,采用HPLC法测定。色谱柱为DiamonsilTMC18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-水(体积比为4∶1∶5),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为296 nm,柱温为40℃。结果蟾蜍灵、脂蟾毒配基和华蟾蜍精分别在0.0848~0.5088、0.0884~0.5304和0.2000~1.2000μg内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数r分别为0.9999、0.9992和1.0000。蟾蜍灵、脂蟾毒配基和华蟾蜍精的平均回收率分别为99.3%、99.6%和99.0%,RSD分别为0.5%、0.2%和0.6%(n=9)。结论HPLC法可用于蟾皮中蟾蜍灵、脂蟾毒配基和华蟾蜍精的含量测定。     

蟾蜍灵对肝癌细胞SMMC 7721的细胞毒作用及生长相关基因表达的影响

为探讨蟾蜍灵的抗癌作用机理 ,以肝癌SMMC772 1细胞为靶细胞 ,应用噻唑蓝还原法检测细胞毒作用 ,双荧光染色法和DNA电泳技术检测细胞凋亡与坏死 ;免疫组织化学方法检测细胞生长相关基因p2 1waf1/cip1和增殖细胞核抗原 (PCNA)蛋白表达 .结果表明 ,0 .0 1μmol·L- 1及以上浓度蟾蜍灵对SMMC772 1细胞具有显著细胞毒作用 ,形态学和DNA片段化检测证实蟾蜍灵诱导的细胞死亡以凋亡为主 ;p2 1waf1/cip1在蟾蜍灵诱导下表达上调 ,同时PCNA的表达下降 ,两者呈负相关 (P <0 .0 1) .提示蟾蜍灵通过上调p2 1waf1/cip1表达 ,下调PCNA表达 ,从而抑制肝癌细胞生长     

蟾蜍灵诱导结肠癌SW620细胞凋亡过程中的信号传导

目的研究蟾蜍灵诱导结肠癌细胞的凋亡作用,并探讨其治疗结肠癌的作用机制。方法:以不同浓度的蟾蜍灵处理结肠癌SW620细胞后,采用四唑蓝比色试验检测癌细胞增殖,分别采用光镜和琼脂糖凝胶电泳检测癌细胞凋亡情况,采用Fura-2荧光复合技术测结肠癌细胞内[Ca2 ]i浓度。结果:蟾蜍灵对结肠癌细胞增殖具有很强的抑制作用。蟾蜍灵能够诱导结肠癌细胞凋亡。在结肠癌细胞凋亡过程中,胞内[Ca2 ]i明显升高,以凋亡早期更为明显。1h时为288.56±8.46nmol/L,明显高于对照组(125.56±5.25)(P<0.01)。结论:蟾蜍灵对结肠癌细胞生长具有很强的抑制作用,与诱导凋亡有关。Ca2 在蟾蜍灵诱导结肠癌细胞凋亡过程中起重要的作用。     

蟾皮化学成分的分离与结构鉴定

蟾皮为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor的干燥皮，在我国民间多用来治疗原发性肝癌、肺癌、肠癌等，其水溶性成分制剂华蟾素注射液临床上用于消化道中晚期癌症，疗效确切，体外抗肿瘤活性筛选也表明蟾皮水提取物对结肠癌细胞HCT-8、肺癌细胞A-549生长均有明显的抑制作用。为了阐明其活性成分，对其水溶性成分进行了系统研究，采用Sephadex LH-20、硅胶柱色谱结合结晶法，从其水提物中分离得到6个化合物，分别鉴定为4-氨基-3-羟甲基-环辛酰胺骈四氢-α-呋喃酮(蟾蜍环酰胺B，I)、蟾蜍环酰胺C(II)、蟾蜍噻咛(III)、去氢蟾蜍色氨氢溴酸盐(IV)、辛二酸(V)和丁二酸(VI)，其中化合物I和II为新化合物。     

蟾酥临床应用近况

蟾酥,又名蟾蜍眉脂(《药性论》)、蟾蜍眉酥(《日华子本草》)、癞蛤蟆浆(新疆)、蛤蟆酥(山东)。为蟾蜍科动物中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans Cantor)或黑眶蟾蜍(Bufo m ela-nostictus Schne ider)或花背蟾蜍(Bufo radde i strauch)等的耳后腺及背部皮肤腺分泌的白色浆液,经现     

蟾酥活性成分及其药理作用的研究进展

目的 对蟾酥活性成分及其药理作用的研究进展进行综述。方法 通过查阅近十年来国内外的文献，对蟾酥的活性成分及其药理作用进行归纳和分析。结果 蟾酥的化学成分包括蟾蜍二烯内酯类、吲哚生物碱类、甾醇类及其他类化合物，近年来关于蟾蜍二烯内酯类活性单体成分的研究较多。蟾酥及其活性成分具有抗肿瘤、强心、抗炎、镇痛、抗菌等药理作用，目前的研究主要集中于抗肿瘤作用及强心作用。结论 蟾酥作为中国传统中药材之一，在临床上具有广泛的应用。本文详细地归纳了蟾酥的活性成分，综述了其药理作用，特别是其抗肿瘤作用，以期为基于蟾酥及其活性成分的研究提供一定的依据。     

中华大蟾蜍皮化学成分研究

从中华大蟾蜍 (BufobufogargarizansCantor)皮水溶性部分应用制备型反相HPLC分离得到 5个化合物 ,根据光谱分析、氨基酸分析及化学性质 ,确定为蟾蜍灵 3 丁二酰精氨酸酯 (Ⅰ )、华蟾毒精 3 丁二酰精氨酸酯 (Ⅱ )、脂蟾毒配基 3 丁二酰精氨酸酯 (Ⅲ )、蟾蜍噻咛 (Ⅳ )、光色素(Ⅴ ) ;其中Ⅳ、Ⅴ为首次从该属动物中得到 ;并提出了蟾蜍毒素和蟾毒配基在13 C NMR谱中C 16位取代情况的化学位移特征     

蟾蜍灵在体内外抑制急性红白血病细胞K562增殖及下调WT1表达的研究

目的研究蟾蜍灵在体内外抗K562细胞增殖及对WT1表达影响。方法半固体集落形成实验检测蟾蜍灵对K562细胞的增殖抑制作用,流式细胞术分析蟾蜍灵对K562细胞周期的影响,Western blot观察蟾蜍灵对WT1表达作用。通过高致瘤性K562细胞制备裸鼠皮下荷瘤模型,分组为模型组、蟾蜍灵组及高三尖杉酯碱组,比较各组皮下瘤体积与重量、病理形态学改变及WT1蛋白表达情况。结果①半固体集落形成实验、流式及Westem blot结果显示,蟾蜍灵能明显抑制K562细胞增殖,阻滞细胞在G_0/G_1期,并下调其WT1蛋白表达,呈剂量依赖性;②蟾蜍灵组和阳性对照组裸鼠肿瘤的抑瘤率均明显高于模型组(P<0.05),且蟾蜍灵组和阳性对照组裸鼠皮下瘤重量均明显低于模型组(P<0.05);③病理切片显示,蟾蜍灵导致K562皮下瘤组织内肿瘤细胞大量坏死、凋亡,继发出血及纤维化等改变;并明显抑制K562皮下瘤组织中WT1蛋白表达水平。结论蟾蜍灵在体外可抑制K562细胞增殖及阻滞细胞周期于G_0/G_1期并下调其WT1蛋白表达,在体内可明显抑制裸鼠K562皮下瘤体积和重量,导致皮下瘤组织坏死、凋亡,并可下调其WT1蛋白的表达。     

日本蟾蜍皮中强心甾体化合物的研究

本文对日本蟾蜍(Bufo vulgaris formo sus Boulenger)鲜皮中的强心甾体成分作了系统的研究。结果除分离得已知辛二酰精氨酸酯类的蟾酥毒外,并新分离和鉴定了三种新型的蟾酥毒(Bufotoxin),即琥珀酰(Succinoyl)、己二酰(Adipoyl)和庚二酰(Pimeloyl)精氨酸酯蟾酥毒。此外,并发现蟾酥毒甙     

强心甾的合成研究进展

本文综述了强心甾毛地黄毒甙元和蟾蜍甙元的合成工艺路线，对每一种工艺路线进行了评述，并对强心甾的合成研究进行了展望。     

蟾酥活性成分协调索拉非尼通过下调Akt/NF-κB信号途径抑制肝癌HepG2细胞生长

目的探讨蟾酥活性成分蟾蜍灵和华蟾毒配基协调索拉非尼抑制肝癌HepG2细胞生长的机制。方法 MTT法检测HepG2细胞经药物作用12、24、48 h后的增殖活性;Hoechst 33342荧光染色检测细胞形态学变化;流式细胞仪检测药物对HepG2细胞周期的影响;Western blot检测Akt、p-Akt(Ser473)、IκB、NF-κB、p-NF-κB p65、Bcl-2、Bax、cyclin A、PCNA蛋白表达水平。结果蟾蜍灵、华蟾毒配基和索拉非尼作用组均能抑制HepG 2细胞增殖,且药物联合作用组的增殖抑制率明显高于单独药物作用组,呈时间依赖性,用金氏公式得出在24 h具有协同作用(P<0.01);荧光染色结果显示,HepG 2细胞经药物处理24 h后,细胞呈现出核染色质凝集的凋亡形态特征;细胞周期检测结果显示,索拉非尼作用组使细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.01),蟾蜍灵、华蟾毒配基作用组使细胞周期阻滞于S期(P<0.01),药物联合作用组使细胞周期阻滞于S期(P<0.01);Western blot结果显示,蟾蜍灵、华蟾毒配基和索拉非尼单独药物作用组和联合作用组Akt、NF-κB总蛋白表达均无明显变化,p-Akt(Ser473)、p-NF-κB p65、Bcl-2、cyclin A、PCNA蛋白表达水平逐渐降低,联合作用组比单独药物作用组降低更为明显(P<0.01)。IκB、Bax蛋白表达水平逐渐升高,联合作用组比单独药物作用组升高更加明显(P<0.01)。结论蟾酥活性成分蟾蜍灵和华蟾毒配基协调索拉非尼通过下调Akt/NF-κB信号通路,抑制肝癌HepG 2细胞增殖。     

抗肿瘤新星蟾蜍毒素的临床应用及其机制的研究进展

蟾蜍毒素作为传统中药具有多种功效,被广泛应用临床,研究表明其具有抗肿瘤,增强机体免疫力,提高中晚期癌症患者生存质量等作用。本文就蟾蜍毒素抗肿瘤作用及其研究机制方面的最新研究进展作一综述。