树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞体外抗肺癌的实验研究

目的探讨树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）在体内外能否有效的抗肺癌。方法正常人外周血单个核细胞经不同细胞因子作用后培养成DC和CIK细胞,单个核细胞经贴附塑料平皿获得单核细胞,加入GM—CSF,IL-4及TNF—a诱导获得DC,悬浮细胞加入IFN—g,24h后IL-1a,IL-2及CD3McAb诱导获得CIK,将A549制备成肿瘤细胞冻融物．作为肿瘤抗原刺激DC,并将DC与CIK细胞联合培养（DC＋CIK,负载抗原的DC＋CIK）,以CIK细胞单独培养作为对照。CytotoxicityTOX96体外杀伤实验测定体外细胞毒活性。结果在培养的第15d．与负载抗原的DC共同培养的CIK与CIK细胞单独培养细胞相比,增殖速率明显提高[（23．4±2．3）倍vs（16．7±2．7）倍,P〈0．05],CD3＋CD56＋细胞表达水平也明显提高,[（64．3±3．6）％vs（43．9±2．1）％,P〈0．05],同时负载抗原的DC的CIK对A549细胞的体外下细胞毒活性增强。结论DC与CIK细胞共培养后可提高CIK细胞的增殖速率,提高CIK细胞表型的表达水平,增强CIK抗肺癌的活性．将来可作为一种临床有效的过继免疫治疗策略。     

CIK细胞杀瘤实验前后细胞表型与细胞毒性相关性研究

目的为了分析体外细胞因子诱导培养CIK细胞在体外杀瘤实验中的细胞表型变化与其杀瘤活性的相关性及为临床过继免疫治疗提供实验依据。方法采用体外诱导方法扩增培养正常人外周血淋巴细胞及单个核细胞,用CCK-8试剂检测培养14d的CIK细胞对SPC-A-1和BGC-823肿瘤细胞的细胞毒活性,应用流式细胞术测定杀瘤实验前后CD3＋等6种不同表型细胞百分率的变化。结果在与效靶比成正比的条件下,体外实验CIK细胞对两种肿瘤细胞的杀伤率都与CD3＋CD4＋,CD3＋CD4-CD8-细胞比例变化呈正相关（P〈0.05）,都与CD3＋CD25＋,CD3＋CD28＋,CD3＋CD25＋CD28＋细胞比例变化呈负相关（P〈0.05）,对SPC-A-1细胞的杀瘤率与CD3＋CD16＋CD56＋呈正相关（P〈0.05）。结论本研究表明靶细胞抗原在活化细胞中起重要作用,测定培养细胞活化相关表型可以间接监测其杀瘤能力,为临床CIK细胞过继免疫治疗的应用提供实验依据。     

自体细胞因子诱导杀伤细胞治疗肝硬变的临床疗效研究

目的观察自体细胞因子诱导杀伤细胞（CIK细胞）治疗HBVDNA阳性肝硬化患者的近期疗效。方法CIK细胞在体外培养前后以及回输体内后检测CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋、CD56^＋、CD25^＋细胞以及mDC和pDC。治疗肝硬化患者,比较治疗前后病毒学指标及肝脏功能的变化。结果培养结束以及回输体内后,CD3^＋细胞、CD3^＋CD8^＋细胞、CD3^＋CD8^＋细胞较培养前显著升高,mDC和pDC在回输后也明显增高,肝脏功能较治疗前有所好转。所有患者均能耐受治疗。结论CIK细胞可明显提高免疫效应细胞数量,具有一定的抗病毒效应作用,毒副作用低。     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞体内外抗肺癌的实验效应研究

目的探讨树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）在体内外对肺癌的影响。方法正常人外周血单个核细胞经不同细胞因子作用后培养成DC和CIK细胞,单个核细胞经贴附塑料平皿获得单核细胞,加入GM-CSF,IL-4及TNF-a诱导获得DC,悬浮细胞加入IFN-g,24h后IL-1a,IL-2及CD3McAb诱导获得CIK,将A549制备成肿瘤细胞冻融物,作为肿瘤抗原刺激DC,并将DC与CIK细胞联合培养（DC＋CIK,负载抗原的DC＋CIK）,以CIK细胞单独培养作为对照。用流式细胞仪分析细胞表型,自体混合淋巴细胞反应和异体混合淋巴细胞反应检测其刺激T细胞的的增殖活性。Cytotoxicity TOX96体外杀伤实验测定体外细胞毒活性,同时用A549细胞系建立荷瘤裸鼠模型研究其体内抗肺癌活性。结果在培养的第15d,与负载抗原的DC共同培养的CIK与CIK细胞单独培养细胞相比,增殖速率明显提高[（23.4±2.3）倍vs（16.7±2.7）倍,P〈0.05],CD3＋CD56＋细胞表达水平也明显提高,[（64.3±3.6）%vs（43.9±2.1）%,P〈0.05],同时负载抗原的DC的CIK对A549细胞的体外下细胞毒活性增强,体内实验显示,与单独培养的CIK细胞相比,与负载抗原的DC共同培养的CIK,可明显抑制接种瘤细胞的裸鼠成瘤率,DC＋CIK与负载抗原的DC＋CIK在抗六效应上没有明显差异。结论 DC与CIK细胞共培养后可提高CIK细胞的增殖速率,提高CIK细胞表型的表达水平,增强CIK体内抗肺癌的活性。将来可作为一种临床有效的过继免疫治疗策略。     

化疗联合CIK输注对晚期NSCLC患者T细胞哑群及生存的影响

目的：探讨化疗联合细胞因子诱导的杀伤细胞（ cytokine induced killer ,CIK）治疗晚期非小细胞肺癌（ non small cell lung cancer,NSCLC）患者的近期疗效。方法将61例确诊的晚期非小细胞肺癌患者给予化疗联合CIK治疗,观察治疗前后外周血中T细胞亚群及细胞因子的变化和临床疗效,并观察其对1年总生存率和无进展生存期的影响。结果 CIK回输后患者CD3、CD8、CD56的比例较治疗前明显上调（P＜0．05）,且CIK输注可明显提高患者Th1类细胞因子IFN-γ和TNF-α的水平（P＜0．05）。治疗总体有效率为47．3％,临床获益率为67．3％。该研究患者的中位总生存期为10．3个月,1年生存率为22．9％,而无进展生存期7．2个月,1年无进展生存为14．0％。结论化疗CIK治疗能提高患者的免疫功能及生活质量,有望成为非小细胞肺癌有效的过继免疫治疗方法。     

应用自体细胞因子诱导杀伤细胞治疗肝硬化对肝功能影响的研究

目的观察自体细胞因子诱导杀伤细胞（CIK细胞）治疗慢性HBV DNA阳性肝硬化患者对肝功能的影响。方法CIK细胞在体外培养前后以及回输体内后检测CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD3^＋、CD56^＋细胞以及mDC和pDC。治疗肝硬化患者,比较治疗前后病毒学指标及肝脏功能的变化。结果培养结束以及回输体内后,CD3^＋细胞、CD3^＋CD8^＋细胞、CD3^＋、CD56^＋细胞细胞较培养前显著升高,mDC和pDC在回输后也明显增高,肝脏功能较治疗前有所好转。所有患者均能耐受治疗。结论CIK细胞可明显提高免疫效应细胞数量,具有一定的抗病毒效应作用,毒副作用低。没有加重肝脏损伤,而对于肝功能有一定的改善作用。     

NSCLC患者术后CIK细胞免疫治疗联合化疗疗效观察

目的评价细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer,CIK）免疫治疗联合化疗治疗术后非小细胞肺癌（NSCLC）患者的近期疗效。方法选取82例Ib-IIIa期NSCLC患者,经手术治疗后随机分为两组,常规化疗组和CIK细胞治疗联合化疗组,每组41例。观察比较两组患者生活质量及外周血CD3＋,CD4＋,CD4＋/CD8＋比值,自然杀伤细胞（Na-ture-Kille）r比率以及Th1/Th2细胞因子水平免疫功能指标的变化。结果生活质量：CIK细胞治疗联合化疗组和常规化疗组生活质量总提高率分别为90.0%与73.2%,研究组患者生活质量高于对照组（P〈0.05）。免疫功能指标：CIK细胞治疗联合化疗组于CIK细胞治疗后2周,外周血CD3＋,CD4＋T细胞,NK细胞和CD4＋/CD8＋的比值、白细胞介素-2,干扰素γ水平较治疗前升高（P〈0.01）,于治疗后4周达高峰,此后逐渐回落;而Th2细胞因子于CIK细胞治疗后2周下降,治疗后4周降至低谷。CIK细胞治疗联合化疗组于CIK细胞治疗后2、4、8周CD3＋,CD4＋,CD4＋/CD8＋,NK细胞,IL-2,IFN-γ,白细胞介素-4和白细胞介素-10与常规治疗组各时点比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 CIK细胞免疫治疗联合化疗能增强NSCLC患者术后的免疫功能,改善其生活质量。     

自体 CIK 细胞联合化疗二线治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察

目的：观察自体细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）联合培美曲塞二线治疗晚期非小细胞肺癌的疗效。方法回顾性分析经病理学确诊的晚期非小细胞肺癌患者71例,一线化疗后复发或进展。随机分为2组,治疗组35例,采用 CIK 细胞联合培美曲塞单药化疗。患者每1个化疗周期结束后序贯1个周期的自体 CIK 细胞回输为1个疗程治疗,连续2个疗程;对照组36例,采用单药培美曲塞化疗,疗程为2周期。治疗结束后对2组的近期疗效、免疫功能、不良反应进行评价。结果治疗组客观缓解率（ORR）为48．57％,对照组为41．67％,差异无统计学意义（P ＞0．05）;治疗组疾病控制率（DCR）为85．71％,对照组为63．89％,差异有统计学意义（P ＜0．05）。治疗组 T 细胞亚群CD ＋3、CD ＋4、CD56升高,CD ＋4／CD ＋8比值上升,差异有统计学意义（P ＜0．05）;CD ＋8治疗前后变化不大（P ＞0．05）。在不良反应方面,治疗组白细胞减少、血红蛋白减少和胃肠反应发生率明显低于对照组,差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论自体 CIK 细胞回输安全,副作用小,与培美曲塞联合二线治疗晚期非小细胞肺癌可以提高近期疗效,减轻化疗不良反应,提高患者免疫功能,值得临床推广。     

放疗联合免疫治疗头颈癌的疗效观察

目的评价放疗联合细胞因子诱导杀伤（CIK）细胞对头颈癌疗效。方法分离外周血单个核细胞体外定向诱导CIK细胞,扩增后回输。结果CIK组缓解率73.68%高于单独放疗组36.84%（P〈0.05）;CIK组细胞免疫水平好于单独放疗组为,其中CD3＋CD4＋T、CD3＋CD8＋T及CD4＋CD25＋T细胞免疫水平差异有统计学意义（P〈0.05）。结论放疗联合CIK细胞显著提高对头颈癌的疗效,增强免疫功能。     

DC-GPC3联合CIK 细胞的体外抗肝癌作用

摘要： 目的 探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3 （GPC3） 基因转染的树突状细胞 （DC-GPC3） 与细胞因子诱导杀伤细胞（CIK） 共培养 （DCIK-GPC3） 后, 对 CIK 的生物活性及体外抗肝癌细胞作用。方法 流式细胞术检测 DCIK-GPC3、 DC-CIK 及 CIK 各组效应细胞免疫表型, MTT 法检测各组效应细胞培养上清液中白细胞介素 （IL） -2 生物活性, 酶联免疫吸附试验 （ELISA） 检测细胞培养上清液中 IL-2、 干扰素 γ （IFN-γ） 浓度。乳酸脱氢酶释放实验分别检测各组效应细胞对肝癌 HepG2 细胞的细胞毒活性。结果 DCIK-GPC3 表面高表达 CD3+ CD8+ 和 CD3+ CD56+ 双阳性细胞, 与 DCIK 及 CIK 比较差异有统计学意义 （P＜0.05）; CIK、 DCIK、 DCIK-GPC3 培养上清液中 IL-2 生物活性、 浓度以及 IFN-γ 浓度均依次升高, 组间多重比较差异有统计学意义 （P＜0.05）; 在 20∶1 及 50 ∶1 效靶比, CIK、 DCIK、 DCIK- GPC3 对 HepG2 细胞的细胞毒活性依次升高, 组间多重比较差异均有统计学意义 （P＜0.05）。结论 CIK 与 DC- GPC3共培养可获得更强的体外杀伤肝癌细胞活性, 为DCIK-GPC3用于临床免疫治疗提供了理论和实验依据。     

负载抗原DC与CIK共培养对富集培养乳腺癌CTCs杀伤作用研究

[Abstract]ObjectiveTo study the kill activity of the whole tumor cell antigen (Ag) pulsed dendritic cell (DC) coculture with cytokine induced killer cell (CIK) for breast cancer circulating tumor cells (CTCs).Methods Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were isolated from breast cancer patients with CTCs using a blood cell separator instrument. The epidermal cell adhesion molecule (EpCAM ) (+) breast cancer CTCs enriched by MACS were cultured in vitro. The nested RT-PCR, cell immunofluorescence imaging (CK8/18), and immunohistochemistry (CK8/18and CK19) methods, were used for the detection and identification of the cells. EpCAM (-) cells were routinely induced to DC and CIK, which were grouped into Ag-DC-CIK group, DC-CIK group, DC group and CIK group. The cytotoxic activity of co-cultured DC-CIK against breast cancer CTCs was detected by flow cytometry and MTT assay. The cell morphology was observed by light microscopy and transmission electron microscopy.ResultsThe target band of CK19mRNA can be detected by nested RT-PCR. The expressions of CK8/18and CK19of EpCAM (+) cells in vitro were positive by immunofluorescence staining and immunohis?tochemical staining. The proliferative activity of co-cultured DC-CIK was higher than that of CIK (P＜0.001). The positive rates of CD1α+, CD83+CD86+, CD83+CD11C+, CD86+CD11C+DCs and CD3+CD8+, CD3+CD56+CIKs were significantly higher in Ag- DC- CIK group than those of DC- CIK group, DC group and CIK group (P＜0.05). The apoptosis of breast cancer CTCs was induced in Ag-DC-CIK, DC-CIK and CIK3groups, and apoptotic rates were (56.83±3.07)%,(31.43±1.77)% and (24.70±1.51)%, showing significant differences between them (P＜0.05). Transmission electron microscopy showed the typical micro-structure of breast cancer CTCs induced apoptosis.ConclusionMACS in combination with cell immunological methods can improve significantly the detective sensitivity of breast cancer CTCs. The co-cultured Ag-DC-CIK is highly effective immune cells,which shows a high er proliferation and cytoxicty against breast cancer CTCs. This may be used as a clinically immunotherapy means of anti-breast cancer recurrence and metastasis.     

Preclinical and clinical studies on cytokine-induced killer cells for the treatment of renal cell carcinoma

Renal cell carcinoma (RCC) is the most common malignancy of adult human kidney, which accounts for more than 2 % of all cancers. RCC generally does not respond well to conventional chemotherapy and radiotherapy. Cytokine-induced killer (CIK) cells are ex vivo activated lymphocytes with potent activity against various tumors and minimal side effects. Here, we summarize the data on preclinical and clinical efficacy of CIK cells for RCC treatment. Our preclinical data show that CIK cells have potent anti-tumor activity in vitro and in an in vivo nude mouse xenograft model. Clinical studies for the treatment of RCC patients indicate that CIK cell therapy can induce favorable responses with no serious side effects. These studies suggest that CIK cells may become a valuable strategy for the treatment of patients with RCC.     

耐药乳腺癌免疫治疗的实验研究

目的:探讨耐药乳腺癌抗原负载的树突细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合培养后对同种乳腺癌荷瘤小鼠的可能治疗机制.方法:分离健康人外周血获得单个核细胞,分别诱导为DC和CIK细胞,将人类乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR细胞的冻融物抗原冲击DC(AP-DC),分别将DC与CIK细胞共培养(AP-DC+CIK组、DC+CIK组),将细胞经尾静脉注入裸鼠体内,观察不同组荷瘤标本中MDR1的表达、肿瘤细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达.结果:AP-DC+CIK组、DC+CIK组、CIK组及生理盐水组MDR1/β-actin比值分别为0.14、0.57、0.81及0.98.生理盐水组、CIK组、DC+CIK组和AP-DC+CIK组平均凋亡指数差异有统计学意义(P＜0.001).各组Bcl-2及Bax蛋白表达的OD值差异有统计学意义(P＜0.01),Bcl-2/Bax值AP-DC+CIK组＜DC+CIK组＜CIK组＜生理盐水组.结论:经耐药乳腺癌抗原负载的DC与CIK共同作用后,诱导同种乳腺癌细胞凋亡强于单纯DC与CIK共同作用后及单独CIK的治疗效果.     

不同冻存条件对细胞因子诱导的杀伤细胞的细胞表型及杀伤活性的影响

目的 探讨不同冻存条件下细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)细胞表型的变化及对K562细胞杀伤活性的影响.方法 收集培养12 d的CIK细胞,分别冻存于-80℃冰箱及液氮中,于冻存后4、12、24周复苏,通过流式细胞仪检测CIK细胞表型变化,CCK-8法测定其对K562细胞的杀伤活性,并与未冻存CIK细胞进行比较.结果 液氮冻存4、12、24周及-80℃冻存4周后复苏培养的CIK细胞增殖、细胞存活率、免疫细胞表型及对K562的杀伤活性与未冻存组比较差异无统计学意义(P＞0.05).-80℃冻存12周及24后复苏培养的CIK细胞与未冻存组比较,细胞增殖明显抑制,细胞存活率低,CD3+、CD3 +/CD4+、CD3 +/CD8+、CD3 +/CD56+细胞比例显著降低,对K562细胞杀伤活性显著抑制(P＜0.05).结论 临床治疗中CIK细胞应尽量冻存于液氮中,如冻存于-80℃时冻存时间应≤4周.     

恶性腹腔积液来源的树突状细胞与CIK共培养后对结肠癌细胞体外杀伤作用的研究

目的探讨恶性腹腔积液来源的树突状细胞（DC）与CIK细胞共培养后对SW620结肠腺癌细胞的体外杀伤作用。方法分离15例结肠癌患者的腹腔积液培养获得成熟DC,分离健康人外周血培养获得CIK细胞,DC细胞与CIK细胞共培养,流式细胞仪鉴定表型,MTT法检测各组对结肠癌细胞的体外杀伤作用。结果恶性腹腔积液中存在DC前体细胞,经体外细胞因子诱导培养后可获得成熟的DC细胞,高表达HLA—DR、CD80、CD83、CD86分子。DC与CIK共培养对SW620结肠腺癌细胞的杀伤作用较单独CIK组有明显差异（P〈0．05）。结论腹腔积液中存在DC前体细胞在体外诱导培养可获得功能正常的成熟DC细胞,与CIK共培养后可增强其体外杀伤毒性。     

CIK 细胞的生物特性和应用研究新进展

免疫细胞过继性治疗是一种新的肿瘤治疗技术,是对传统的手术、化疗、放疗等肿瘤治疗方法的有力补充。细胞因子诱导杀伤（CIK）细胞是应用最为广泛的免疫细胞之一,其克服了以往免疫治疗细胞在体外扩增难、对肿瘤的细胞毒性不强和可能潜在致癌性等缺陷。CIK细胞是体外扩增的异质淋巴细胞,具有非MHC限制的抗肿瘤活性,主要的效应细胞是表达CD3＋CD56＋的NK样T细胞。虽然,到目前为止,CIK细胞的杀伤机制尚不完全清楚,但NKG2D及其配体的相互作用在CIK抗肿瘤中发挥了重要作用。大量的临床试验证明了CIK细胞治疗的可行性、有效性和安全性：CIK细胞体外培养简单,扩增能力强,容易获得足够的细胞;治疗效果明显,多数患者病情得到缓解,免疫功能提高,生活质量评分提高;副作用少且轻微,如恶心、呕吐、低烧、发抖等,都可以通过简单的治疗得到缓解。本文综述了CIK细胞的生物学特性、杀伤机制、动物实验、临床应用、以及应用CIK细胞治疗的开拓研究等方面的研究进展。     

Anti-tumor activity of ex vivo expanded cytokine-induced killer cells against human hepatocellular carcinoma

Cytokine-induced killer (CIK) cells are ex vivo expanded T cells with natural killer cell phenotypes and functions. In this study, the anti-tumor activity of CIK cells against hepatocellular carcinoma was evaluated in vitro and in vivo. In the presence of anti-CD3 antibody and IL-2 for 14 days, human peripheral blood mononuclear cell population changed to heterogeneous CIK cell population, which comprised 96% CD3(+), 3% CD3( inverted exclamation mark(c))CD56(+), 32% CD3(+)CD56(+), 11% CD4(+), 75% CD8(+), and 30% CD8(+)CD56(+). CIK cells produced significant amounts of IFN-gamma and TNF-alpha; however, produced only slight amounts of IL-2, IL-4, and IL-5. At an effector-target cell ratio of 30:1, CIK cells destroyed 33% of SNU-354 human hepatocellular carcinoma cells, which was determined by the (51)Cr-release assay. In addition, a dose of 1x10(6) CIK cells per mouse inhibited 60% of SNU-354 tumor growth in irradiated nude mice. This study suggests that CIK cells may be used as an adoptive immunotherapy for patients with hepatocellular carcinoma.     

Antitumor activity of cytokine-induced killer cells against human lung cancer

Lung cancer is the leading cause of cancer-related death among men and women in the world. Despite the aggressive treatment with surgery, radiation and chemotherapy, the long term survival for lung cancer patients remains low. In this study, the anti-tumor activity of cytokine-induced killer (CIK) cells against human lung cancer was evaluated in vitro and in vivo. Although CD3(+)CD56(+) CIK cells were rare in fresh human peripheral blood mononuclear cells, they could expand more than 1000-fold on day 14 in the presence of anti-CD3 antibody plus IL-2. At an effector-target cell ratio of 30:1, CIK cells destroyed 98% of NCI-H460 human lung cancer cells, which was determined by the (51)Cr-release assay. In addition, CIK cells at doses of 3 and 30 million cells per mouse inhibited 57% and 77% of NCI-H460 tumor growth in nude mouse xenograft assay, respectively. This study suggests that CD3(+)CD56(+) CIK cells may be used as an adoptive immunotherapy for patients with lung cancer.