细胞因子IL-4对小鼠骨髓来源树突状细胞培养的影响

目的:建立从小鼠骨髓中分离、纯化、培养、扩增树突状细胞(DC)前体的方法,研究细胞因子IL-4对小鼠DC体外增殖、分化成熟的影响.方法:将健康小鼠股骨骨髓细胞分离,去除悬浮细胞,将贴壁细胞分为2组,第1组加入重组细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)培养;第2组加入GM-CSF和白细胞介素-4(IL-4)联合培养.诱导的DC经相差显微镜观察.结果:分离的DC前体经8～9d的培养,镜下随机取8个视野进行细胞计数,第1组细胞数量是85.38±3.42;第2组细胞数量是119.25±3.96,两组间DC数量有显著差异(t=3.19,P<0.05).且细胞纯度达90%以上,具有典型的树枝状或裙褶状突起.结论:用GM-CSF和IL- 4联合作用更能促进DC的体外扩增及分化.     

感染伯氏疟原虫的小鼠树突状细胞体外扩增培养及形态观察

目的:体外诱导和扩增感染伯氏疟原虫小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),并探讨其与疟疾发病机制的关系。方法:感染伯氏疟原虫的BALB/c实验小鼠组与正常对照组小鼠各7只,将其股骨骨髓细胞分离。去除悬浮细胞,贴壁细胞中加入细胞因子(IL-4和GM-CSF)继续进行培养,2周后,诱导的DC经相差显微镜进行观察。结果:DC在体外经细胞因子的刺激可增殖,但实验组小鼠DC增殖速度和数量明显低于对照组小鼠(P<0.05)。结论:感染伯氏疟原虫的小鼠DC形态和数量的改变,可能由此导致其功能的改变,这可能是造成疟疾患者感染持续发展的原因之一。     

鸡尾酒法体外培养人外周血来源的树突状细胞

目的 探讨从健康人外周血中体外诱导培养成熟树突状细胞(DC)的方法.方法 用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC),再用贴壁法获取单核细胞后加入人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4,培养6 d后分组:Ⅰ组为对照组,仅含上述细胞因子;Ⅱ组加入多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸(Poly I∶C);Ⅲ组加入钙离子载体(CI)A23187;Ⅳ组加入Poly I∶C和CI A23187.第8天收获细胞,显微镜下观察形态,流式细胞术检测DC表型,体外同种混合淋巴细胞反应检测DC刺激T细胞的增殖活性.结果 Ⅳ组细胞形态学观察可见典型DC特征,荧光激活细胞分离器(FACS)检测高表达CD83、CD80、CD86和CD40;混合淋巴细胞反应(MLR)表明Ⅳ组细胞具有较强的刺激T细胞增殖能力.结论 PBMC体外经过细胞因子序贯、联合诱导培养能够获得大量功能成熟的DC.     

人参三醇组甙对小鼠骨髓细胞体外诱导树突状细胞的影响

目的 研究人参三醇组甙对小鼠骨髓细胞体外诱导扩增树突状细胞的影响，为临床肿瘤治疗提供实验依据。方法 应用IL-4和GM-CSF培养小鼠骨髓细胞5-7d，光镜下观察细胞形态学变化；培养至第5-6d，加入黑色素瘤（B16）冻融抗原继续培养1．2d，流式细胞仪检测细胞表面分子CD83、CD86。结果 用IL-4和GM-CsF培养3d可见细胞形态发生改变，细胞形状不规则，培养5．6天时，有刺状突起、拉长，为典型树突状细胞形态学特征；抗原装载后流式细胞仪检测CD83、CD86表达，IL＋GM-CSF＋TNF-α组（68．32％。60．25％）及IL-4＋GM-CSF＋冻融抗原组（83．51％，75．89％）明显高于对照组（3．25％，4．37％）及单纯IL-4＋GM-CSF培养组（22．74％，27．49％）（P〈0．001），IL-4＋GM-CSF＋冻融抗原组及IL-4＋GM-CSF＋冻融抗原＋人参三醇组甙组（85．54％，78．96％）CD83表达高于IL-4＋GM-CSF＋TNF吨组，差异显著（P〈0．05）。结论 人参三醇组甙可以体外协同抗原负载诱导小鼠骨髓细胞的树突状细胞成熟。     

人外周血单核细胞体外诱导成熟和激活的树突状细胞

目的　建立从人外周血单核细胞体外诱导培养成熟和激活的树突状细胞 (dendritic cell,DC)的方法。方法　从健康成人外周血分离单核细胞 (PBM) ,加入粒单系集落刺激因子 (GM-CSF) 10 0 μg/L+重组白细胞介素 -4 (rh IL -4 ) 5 0 0 k U /L体外培养 14 d,并于培养结束前 1d加入或不加入肿瘤坏死因子α (TNF -α ) (10 0μg/L ) ,流式细胞仪测定树突状细胞 (DC)的主要组织相容性复合体 (MHC) - 类分子、粘附分子和协同刺激分子 ,分析其成熟度和激活度。结果　 PBM经 GM-CSF+ rh IL-4诱导培养 14 d后 ,细胞成簇 ,表型为 CD83 2 2 .6%、CD865 5 .5 %、CD11c 3 6.1%、CD64 3 .2 %、人类白细胞抗原 (HLA) -DR 13 .4% ;培养结束前 1d加入 TNF -α诱导后 ,细胞表型为 CD83 81.5 %、CD8699.3 %、CD11c 98.8%、CD64 3 .4%、HLA-DR 88.3 %。结论　 GM-CSF +rh IL-4诱导 PB-M14 d,可获得大量不成熟的 DC,该体系有利于 DC扩增 ;培养结束前 1d加入 TNF-α,DC成熟度高 ,激活性好 ,适合于肿瘤免疫治疗     

重组人IL-18对核辐射损伤小鼠脾细胞因子的影响

为了探讨重组人IL-18(rhIL-18)对核辐射损伤后小鼠脾细胞因子的免疫调节作用,对32只C57小鼠分4组进行核辐射损伤,2周后取小鼠脾淋巴细胞体外培养,用试剂盒测定其培养上清中IL-2、IFN-γ、GM-CSF、IL-4和脾细胞抗体形成量,观察rhIL-18对核辐射损伤小鼠脾细胞因子的免疫调节作用。结果表明与对照组比较,rhIL-18能够提高核辐射损伤前后小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ、GM-CSF和IL-2的能力,辐射损伤后应用rhIL-18组的细胞因子水平高于核辐射损伤前应用rhIL-18组;但对IL-4分泌能力和脾细胞抗体形成量没有影响。结论:rhIL-18具有促进核辐射损伤小鼠脾细胞分泌IL-2、IFN-γ和GM-CSF的作用。     

痤疮丙酸杆菌促树突状细胞前体细胞动员及其对胃癌的治疗效应

目的利用痤疮丙酸杆菌（P．aches）引起的炎症反应，促进小鼠外周血中树突状细胞（DC）的动员并研究P．aches动员的DC在体外对胃癌细胞的作用。方法C578BL／6J（B6）小鼠注射P．aches后外周血分离单个核细胞，用流式细胞仪分选F4／8013220-CD11c^＋细胞，在体外加入细胞因子GM-CSF、IL4和TNFα共培养，通过形态学观察、表型分析和混合淋巴细胞反应鉴定它们是否能分化为成熟DC。将P．aches动员的DC负载胃癌抗原后致敏T细胞，观察活化的T细胞在体外对胃癌细胞的杀伤效应。结果注射P．aches1h后外周血F4／80B220-CD11c^＋细胞数量即开始升高，24h后逐渐达到高峰。新鲜分离的细胞不具有成熟DC的特征。与细胞因子共培养后即具有典型的DC形态和表型，在混合淋巴细胞反应中具有极强的刺激T细胞增殖的能力。P．aches动员的DC负载胃癌抗原后致敏T细胞对胃癌细胞的杀伤率明显高于未致敏T细胞。结论P．aches可迅速动员F4／80-B220-CD11c^＋细胞进入小鼠外周血，经细胞因子的诱导后可分化为成熟DC，并可在体外诱导出针对胃癌细胞的特异性杀伤T淋巴细胞，对胃癌细胞有明显的杀伤作用，并伴有高水平的INF-γ分泌。     

血液肿瘤自体造血干细胞移植后患者的DC/CIK培养及临床应用安全性观察

目的采用自体造血干细胞移植后完全缓解的血液肿瘤患者的外周血单个核细胞,经体外培养扩增出树突状细胞(dendritic cell DC)/细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell CIK),应用DC/CIK细胞免疫治疗自体造血干细胞移植后完全缓解血液肿瘤患者,观察其不良反应。方法采集10例血液肿瘤自体造血干细胞移植后完全缓解患者的外周血单个核细胞,在体外经GM-CSF、IL-4、TNF-α等诱导产生DC,经IFN-γ、抗CD3单抗、IL-2等诱导产生CIK,观察其细胞形态及临床应用的不良反应并分析其细胞免疫表型。结果培养产生形态学典型的DC/CIK。诱导成熟的DC经流式细胞仪分析显示CD80、CD83、CD86、CD1a等阳性细胞比率大幅上升。CIK随着培养时间的延长,CD3+CD56+、CD3+CD8+双阳性细胞的比率亦大幅度上升。在DC/CIK细胞免疫治疗过程中,3例患者DC注射部位出现轻微疼痛,可自行缓解。2例患者输注CIK后出现低热,持续时间2～6h,可自行消退。4例患者输注完CIK后出现乏力,约2h可自行缓解。结论自体造血干细胞移植后完全缓解患者的外周血单个核细胞对DC/CIK的培养不受影响。DC/CIK细胞免疫治疗自体造血干细胞移植后完全缓解的血液肿瘤患者,安全性好,不良反应少。     

树突状细胞在变应性鼻炎发病中的作用

目的 探讨树突状细胞(DC)在变应性鼻炎患者外周血中的变化及对Th1/Th2细胞诱导分化的效应.方法 用流式细胞术分析变应性鼻炎组(15例)、慢性鼻炎组(15例)及对照组(15例)患者外周血CD3-CD64+细胞和CD4+ CD3-CD11c-细胞.将培养成熟的两种细胞分别与CD4+ CD45RA+T细胞和抗CD3及抗CD28单抗共同培养,用ELISA法检测上清液细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-5和IL-10的含量.结果 在变应性鼻炎组外周血中,以CD4+ CD3-CD11c-细胞百分率增高为特征,经IL-3和CD40L等细胞因子培养后分化成熟成淋巴样细胞来源的树突状细胞(DC2);而慢性鼻炎组外周血中以CD3-CD64+细胞占优势,经用粒细胞集落因子(GM-CSF)+CD40L培养后分化成熟成髓样细胞来源的树突状细胞(DC1).结论 变应性鼻炎组外周血中DC的前体细胞(pDC1)/(pDC2)的失衡可能是导致变应性鼻炎患者外周血Th1/Th2失衡的重要原因之一,可能与变应性鼻炎发生密切相关.     

不同细胞因子诱导树突状细胞体外抗肿瘤效应研究

目的研究不同细胞因子诱导的树突状细胞(DC)体外抗肿瘤效应。方法常规分离健康人外周血单核细胞,分别采用粒巨噬集落刺激因子(GM-CSF),白细胞介素(IL)-4,肿瘤坏死因子(TNF),GM-CSF、IL-4、α干扰素(IFN-α)细胞因子组合将其诱导为DC,并分别负载SMMC7721细胞冻融抗原;用流式细胞仪检测第9天时细胞表面HLA-DR、CD1α、CD80、CD83的表达;采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测各组刺激自体淋巴细胞增殖能力,并检测各组DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对SMMC7721细胞株的杀伤率。结果第9天显微镜下观察各组细胞,其细胞形态无明显差异,但流式细胞仪显示IFN-α组DC其膜表面标志CD80、CD83、CD1a表达上调,在刺激同种T细胞增殖能力方面,较TNF-α组DC效果明显。且IL-12分泌明显增加。在肝癌细胞株SMMC7221杀伤实验中,培养液中加入IFN-α后杀伤效应明显。结论与TNF-α相比,IFN-α诱导DC一定程度上能增强其特异性杀伤能力。     

地塞米松对树突状细胞Toll样受体4信号通路的影响

目的：观察地塞米松对树突状细胞（den-dritic cells,DC）表面分子Toll样受体4（toll-like re-ceptor 4,TLR4）及转录因子NF-κB表达的影响,以探讨地塞米松抑制DC分化成熟和抗原提呈功能的作用机制。方法：常规培养小鼠DC,在培养体系中加入地塞米松作用后,通过流式细胞术分析DC TLR4表达情况;凝胶电泳迁移实验（EMSA）分析DC NF-κB活化情况。结果：地塞米松以剂量依赖方式抑制NF-κB表达,但对TLR4表达无抑制作用。结论：地塞米松影响DC分化成熟和抗原提呈功能的机制可能与其对NF-κB活化的抑制作用有关。     

Effect of water-soluble proteoglycan isolated from Agaricus blazei on the maturation of murine bone marrow-derived dendritic cells

Water-soluble proteoglycan (WSPG) of Agaricus blazei Murill has been known to stimulate the non-specific complements and humoral immune functions to act as polyclonal activators of B cells and to inhibit tumor growth and metastasis. However, little is known about its immunomodulating effects on murine bone marrow (BM)-derived dendritic cells (DC). In the present study, we examined the maturation process of murine BM-DC. BM cells were cultured in the presence of IL-4 and GM-CSF and the generated immature DC were stimulated with WSPG or LPS (WSPG-DC and LPS-DC, respectively) for 24 h. WSPG significantly enhanced the expression of co-stimulatory molecules (CD80 and CD86) and major histocompatibility complex (MHC) II, as did LPS. IL-12p70 production in WSPG-DC was also identical to that in LPS-DC. The antigen-uptake capacity of WSPG-DC was determined by FITC-labeled dextran uptake. WSPG-DC lost dextran uptake capacity comparable to LPS-DC. The antigen-presenting capacity of WSPG-DC as analyzed by allogeneic T cell proliferation was significantly increased in comparison with immature DC, was identical to LPS-DC, and induced higher levels of IL-2 in responding T cells. These results indicate the immunomodulatory properties of WSPG, which might be therapeutically useful in the control of cancers and immunodeficient diseases through the up-regulation of DC maturation.     

灵芝孢子粉对荷瘤小鼠树突状细胞的影响及其抗瘤效应

目的通过研究灵芝孢子粉对荷H22肝癌小鼠髓源性树突状细胞(DC)的影响及其抗肿瘤效应,探讨其抗肿瘤机制。方法应用不同浓度灵芝孢子粉(1、2、3g·kg-1·d-1)连续14d灌胃荷瘤小鼠后,处死小鼠,无菌获取骨髓细胞,粒细胞巨噬细胞刺激因子(GMCSF)和白细胞介素(IL)4体外诱导骨髓细胞生成DC,同时培养液中继续加入不同浓度灵芝孢子粉(0.8、3.2、12.8mg/L)。通过显微镜、流式细胞仪检测技术及细胞毒性实验观察不同浓度灵芝孢子粉对DC的影响,并通过脾指数、胸腺指数及肿瘤抑制率来观察其抗肿瘤效应。结果灵芝孢子粉能够促进荷瘤小鼠髓源性DC的分化、成熟及表面分子CD11a、CD86的表达,增强DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞反应;灵芝孢子粉能够使荷瘤小鼠免疫器官脾脏和胸腺的重量增加,并明显抑制肿瘤的生长,存在量效关系。结论本实验表明灵芝孢子粉能够通过刺激DC的分化成熟,提高其抗原提呈能力,进而起到提高机体细胞免疫,抑制肿瘤生长的作用。     

儿茶素对骨髓细胞周期及造血生长因子基因表达的作用儿茶素对骨髓细胞周期及造血生长因子基因表达的作用

目的探讨中药鸡血藤Spatholobus suberectus Dunn活性成分儿茶素对小鼠骨髓细胞增殖周期及其脾细胞内造血生长因子IL-6和GM-CSF mRNA表达的影响,以初步阐明其造血调控作用机理。方法用流式细胞仪检测技术观察儿茶素对正常及骨髓抑制小鼠骨髓细胞增殖周期的影响,同时采用RT-PCR技术,检测在儿茶素刺激条件下,小鼠脾细胞内IL-6和GM-CSF mRNA表达的变化。结果儿茶素可促使正常及骨髓抑制小鼠骨髓细胞G₀/G₁期细胞比例下降,S+G₂/M期细胞比例增加,并可使正常及骨髓抑制小鼠脾细胞内IL-6 mRNA和GM-CSF mRNA表达显著上调。结论儿茶素可通过诱导脾细胞内IL-6 mRNA和GM-CSF mRNA的表达,促进正常小鼠骨髓细胞进入增殖周期,并促使骨髓抑制小鼠的骨髓细胞跳出“G₁期阻滞”,进入细胞增殖周期,从而加速造血干/祖细胞的增殖和分化。     

GM-CSF／IL-3融合蛋白对环磷酰胺引起的猕猴骨髓造血功能抑制的影响

目的观察粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）／白细胞介素3（IL-3）融合蛋白对环磷酰胺（L-TX）引起的造血系统抑制的缓解作用。方法连续2d静脉注射CTX50mg·kg^-1·d^-1后将21只猕猴分为4组,其中3组分别皮下注射GM—CSF／IL-3融合蛋白20、40、80μg·kg^-1·d^-1,连续16d,剩余一组为溶剂对照组。停药后10d抽取猕猴骨髓,做骨髓涂片检查及进行骨髓祖细胞半固体培养。结果GM—CSF／IL-3融合蛋白各剂量组明显促进CTX应用后猕猴骨髓有核细胞增生。GM-CSF／IL-3融合蛋白低、中剂量促进猕猴骨髓粒-巨噬系（CFU—GM）、红系（早期BFU-E、晚期CFU—E）及巨核系（CFU-MK）祖细胞的增殖;高剂量对三系祖细胞的增殖无促进作用。结论GM—CSF／IL-3融合蛋白促进CTX所致猕猴造血功能抑制的恢复。     

多抗甲素对脐血树突状细胞体外扩增、成熟的影响

目的观察多抗甲素(polyactin A,PA)对脐血树突状细胞(dendritic cell,DC)体外扩增、成熟的影响。方法分别用加有PA、GM-CSF+TNF-α+IL-4(GTI)及GTI+PA(GTIP)的RPMI-1640培养液体外诱导培养脐血单核细胞,培养d7,Elivision免疫组化方法检测各组细胞CD1a、CD83、HLA-DR、CD34抗原表达情况,透射电镜观察细胞形态。结果PA组、GTI组及GTIP组均有一定数量的典型DC,电镜观察该细胞表面有大量粗细不等的树枝状突起;PA组CD1a+、CD83+细胞比例分别达19·63%±3·61%、14·52%±5·79%,高于对照组(即单纯培养液组);GTIP组CD1a+细胞比例升高最明显,高于GTI组。结论PA不仅能促进脐血DC体外扩增、成熟,还能协同GM-CSF、TNF-α、IL-4促进DC生成,PA是一种实用的DC活化剂。     

他克莫司对体外培养的大鼠树突状细胞成熟过程及其同种免疫刺激活性的影响(英文)

目的研究他克莫司对体外培养的大鼠树突状细胞(DC)成熟过程和同种刺激活性的影响。方法20只大鼠随机分为对照组、他克莫司、脂多糖(LPS)及LPS+他克莫司组,分别取骨髓细胞,加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4(IL-4)培养6d,收集贴壁细胞即DC。对照组不再加其他试剂,他克莫司组在开始培养时即加入他克莫司10μg·L-1,LPS组在细胞培养结束前18h加入LPS100μg·L-1,他克莫司+LPS组分别按上述要求加入他克莫司和LPS。用流式细胞术测定DC表面CD80和CD86的表达,ELISA方法检测其培养上清IL-12的浓度,用混合淋巴细胞培养法观察其对同种T细胞的刺激能力。结果与对照组比较,LPS刺激后,DC表面CD80和CD86表达明显增加,培养上清中IL-12浓度升高,其刺激同种T细胞的能力增强。与对照组和LPS组比较,他克莫司可使DC表面CD80和CD86表达明显降低,IL-12分泌减少,刺激同种T细胞的能力减弱。结论他克莫司可抑制体外培养的DC成熟及其同种刺激活性。     

Effects of neopterin on the hematopoietic microenvironment of senescence-accelerated mice (SAM)

The pteridine neopterin (NP) is produced by monocytes and is known to be a useful marker of immunological activation, although, it remains elusive whether neopterin itself exhibits biological functions. Recently, we found that NP stimulates hematopoietic cell proliferation and differentiation by activating bone marrow stromal cell function. In order to elucidate the biological effect of NP on stromal cells, its effects on hematopoiesis was determined in the mouse model of age-related stromal impairment, senescence-accelerated mice (SAMs). An intraperitoneal administration of NP increased the number of peripheral leukocytes and CFU-GM in the bone marrow and spleen of young SAMs, however, no increase of CFU-GM in old SAMs (stromal impairment) was observed when compared with young SAMs. NP also increased the CFU-GM colony formation of bone marrow and spleen cells from young SAMs in a soft agar culture system, but it did not enhance CFU-GM colony formation of cells from old SAMs cultured in this system. Treatment with NP induced the production of hematopoietic stimulating factors, including IL-6 and GM-CSF, by bone marrow stromal cells from young SAMs but stromal cells from old SAMs did not respond to NP stimulation. Further studies will be required to clarify the mechanism by which NP stimulates the production of hematopoietic growth factors from stromal cells, the results of this study indicate that NP is a potent hematopoietic regulatory factor by activating stromal cell function(s).