嵌合小鼠模型在人乙肝病毒研究中的应用概况

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)引起的一种世界性疾病。据统计,全世界无症状乙肝病毒携带者(HBsAg阳性携带者)超过2.8亿,我国约占1.3亿。HBV属于嗜肝DNA病毒科,含有约3200 bp的部分双链DNA基因组,其复制经过转录和逆转录两个过程,HBV感染具有高度的宿主     

肝富集转录因子在HBV基因转录与复制中的作用研究

目的观察各种肝富集转录因子对乙型肝炎病毒（HBV）基因转录和病毒复制水平的影响，探讨其在HBV嗜肝性机理中的作用。方法用复制型HBV重组质粒pHBV4．1与肝富集转录因子HNF1、HNF3、HNF4、HNF6、C／EBP或RXRa／PPARa的表达质粒，分别共转染非肝源细胞株NIH3T3、HeLa、293T、SWl353、CV-1和COSl。用Northern吸印杂交检测HBV3．5kb、2．4／2．1kb、0．7kb mRNA的转录情况，Southern吸印杂交检测HBV DNA复制中间体水平。结果用pHBV4．1转染NIH3T3细胞后，在没有肝富集转录因子表达质粒共转染时未能检出3．5kb HBV RNA转录，也无HBV DNA复制；当用肝富集转录因子共转染时，HNF4和RXRα／PPARα的表达能够激活3．5kb HBV RNA转录和HBV DNA复制，而HNF1、HNF3、HNF6和C／EBP未能激活HBV复制。在HeLa、293T、SW1353、CV-1和COS1细胞中，HNF4、RXRα／PPARα对HBV的转录和复制也具激活作用。进一步用突变型HBV重组质粒研究发现，C启动子HNF4结合位点的突变明显减弱了HNF4和RXRα／PPARα对HBV复制的激活作用。结论肝富集转录因子HNF4和RXRα／PPARα可支持HBV在非肝源细胞中的转录与复制；肝特异性基因转录是HBV嗜肝性的决定因素之一。     

丁型肝炎病毒抗原抗体系统的检测及其临床意义

丁型肝炎病毒(Hepatitis D virus,HDV)是一种嗜肝RNA缺损病毒,其复制和表达需要乙型肝炎病毒(HBV)或其它嗜肝病毒(如鸭乙型肝炎病毒,旱獭乙型肝炎病毒,土拨鼠乙型肝炎病毒)的辅助,它能引起自亚临床型至暴发型肝炎的各种临床类型的急、慢性肝病,并对乙型肝炎病毒所致的肝脏病的临床表现及预后产生重要影     

乙型肝炎病毒变异的研究进展

乙型肝炎病毒（HBV）是一种高变异病毒，由于它在复制过程中，必须经过RNA中间体的逆转录复制，在这一逆转录复制过程中。因RNA聚合酶和逆转录酶缺乏校正功能，使病毒基因在复制过程中，可以发生一个核苷酸（点突变）和多个核苷酸的变异。发生变异的病毒常引起其生物学特性的改变，尤其HBV编码蛋白如抗原蛋白等发生变异，可以导致HBV感染发病机制的变化，在诊断和防治中带来一系列新的问题[1]。本文就近期国内外有关HBV变异的研究进展作简要概述。1HBV基因结构及功能HBV结构非常精致，可以最少容量发挥高效功能，核酸链仅有3．2kb…     

不同年龄段慢性乙型肝炎患者乙肝相关指标与肝纤维化的相关性研究

目的 分析不同年龄段慢性乙型肝炎（chronic B virus,CHB）患者乙型肝炎病毒血清标志物（hepatitis B-M,HBVM）、前S1抗原（Pre S1）和乙型肝炎病毒DNA(hepatitis B virus-DNA,HBV-DNA)与肝纤维化的相关性。方法 选取2020年1月至2022年8月安徽省六安市中医院收治的200例CHB患者，根据HBV-M[乙型肝炎病毒表面抗原（hepatitis B virus surface antigen,HBs Ag）、抗乙型肝炎病毒表面抗原抗体（antibody to hepatitis surface antigen,HBs Ab）、乙型肝炎病毒e抗原（hepatitis B virus e antigen,HBe Ag）、抗乙型肝炎病毒e抗原抗体（antibody to hepatitis B e-antigen,HBe Ab）、抗乙型肝炎病毒核心抗体（antibody to hepatitis B core antigen,HBc Ab）分别用a、b、c、d、e表示]检测结果分组，分析各组Pre S1定量与阳性率、HBV-DN...     

实时荧光定量PCR检测HBVcccDNA临床应用研究

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)属嗜肝脱氧核糖核酸科(hepadnaviridae),不完全双链DNA病毒,是引起急慢性肝炎的最主要病原之一。乙型肝炎病毒与其他DNA病毒相比,不同之处在于它特殊的反转录复制形式,以及特殊的复制中间体共价闭合环DNA(covalently closed circular DNA,c     

乙型肝炎病毒基因变异的临床意义

1 乙型肝炎病毒基因组结构与功能 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因组由一松弛环状、部分呈双链结构、长度约3.2kb的小DNA分子构成.长链又称负链,代表完整的核酸序列,长度恒定;短链又称正链,为负链全长的50%～70%.HBV负链含有四个开放读码框,分别为S、C、P、X基因区[1].P区编码病毒DNA聚合酶,与病毒基因组的复制、转录和包装有关;C区有两个启始密码子,分别编码HBeAg和HBcAg;X区编码X蛋白(HBxAg),该蛋白具有转录反式激活功能,可能与肝癌的发生有关;S区由PreS1、PreS2和S基因组成,分别编码病毒外膜蛋白(SHBsAg、MHBsAg及LHBsAg).     

HBV x基因与肝癌的研究进展

全球约有3.5亿人感染乙肝病毒,乙肝病毒感染是肝脏疾病的主要原因.乙型肝炎病毒( hepatitis B virus,HBV)简称乙肝病毒,是一种DNA病毒,属于嗜肝DNA病毒科,基因组长约3.2 kb,为部分双链环状DNA.HBV基因组有4个开放读码框,分别为S、C、P、X,这四个开放读码框都能与细胞基因组整合,其中HBV x基因(HBx)整合率最高[1].HBx被认为是HBV致肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的重要因素,HBx能调节细胞的多个基因和蛋白,从而影响细胞信号转导、细胞增殖与分化、细胞凋亡、细胞癌变以及癌症转移等,本文就从以上几个方面介绍HBx与肝癌的关系.     

乙型肝炎抗病毒药物治疗进展

乙型肝炎病毒 ( HBV)是一种嗜肝 DNA病毒 ,感染肝细胞后松驰型部分双链环状基因组DNA进入细胞核内 ,变成共价闭环 DNA( ccc D-NA) ,并以后者的负链为模板转录为 m RNA,再以此 m RNA为模板逆转录为 DNA。这种独特的细胞内复制方式 ,决定了其治疗的困难性[1] 。近来在实验室及临床上有些发现提示 ,HBV有直接致病的可能性。随着对乙型肝炎免疫发病原理的深入研究 ,对其药物治疗的研究也取得了相当大的进展 ,抗乙肝病毒的新药开发如雨后春笋 ,并已有多种进入临床试验[2 ] 。近年来 ,国内外在应用生物反应调节剂 (如干扰素α和胸腺肽…     

乙型肝炎病毒的核酸检测技术

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）是乙型肝炎的病原体,自1965年Blumberg等发现“澳大利亚抗原”,1970年Dane等在电镜下鉴定了Dane颗粒,即HBV颗粒,从而阐明了颗粒的表面成分,病毒表面抗原（HBsAg）、核壳成分HBcAg和HBeAg。HBV属嗜肝DNA病毒,是不完全环状双链DNA病毒,全长约3．2kb,是目前已知对人类致病的最小双链DNA病毒,严重威胁着人类生命健康。我国HBV的人群携带率约10％,每年新发病例50万,而目前我国仍以HBsAg阳性与否作为筛查献血者HBV感染的指标,     

乙型肝炎病毒转基因研究进展

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）是一种嗜肝DNA病毒,可以引起急慢性肝炎、肝细胞癌。自从转基因技术出现以来,人们可以通过转基因动物的研制来建立转基因动物模型。研制的HBV转基因小鼠可以用来研究HBV的致病机制、肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的发生机理、评估药物治疗乙肝的效果。     

利用重叠延伸PCR快速构建中国株乙型肝炎病毒的感染性克隆

目的：体外扩增中国株乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）的基因组全长序列,快速构建中国株HBV感染性克隆,建立中国株HBV体外复制细胞模型。方法：设计保守引物,扩增HBV全长基因组序列。对扩增到的HBV基因组进行DNA测序及计算机辅助分析,确定病毒的基因型。通过重叠延伸PCR（splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR）技术,构建1.3倍基因组长度的HBV感染性克隆质粒pHBV1.3。将pHBV1.3质粒转染人肝癌细胞系HepG2,采用Western Blot、酶联免疫吸附试验及Real-PCR检测病毒复制及表达情况。检测该感染性克隆对临床抗病毒药物阿德福韦的敏感性。结果：成功扩增到1株C基因型HBV全长基因组,其GenBank登陆号为KF495606。构建了中国株HBV感染性克隆pHBV1.3（C）质粒,该质粒能在肝癌细胞株中进行有效的复制、转录和表达。阿德福韦能在体外抑制该HBV感染性克隆的复制,抑制程度依赖于药物浓度。结论：利用SOE-PCR可快速构建HBV感染性克隆,所构建的感染性克隆能介导高水平病毒复制,可用于HBV复制机制和抗病毒等方面的研究。     

乙型肝炎病毒S基因多样性的研究进展

乙型肝炎病毒 (HBV)属于嗜杆DNA病毒科。在感染的肝细胞中 ,HBV主要以RNA为中间体逆转录复制 ,复制时利用的是病毒本身的DNA聚合酶 ,此酶缺乏校对修复活性 ,发生变异后难以修正 ,所以造成复制过程中的反转录失真。HBV基因的突变率较一般DNA病毒为高。据估计 ,嗜杆DNA病毒的突变率接近于 2× 10 - 4·位 - 1·年 - 1[1] ,这比RNA病毒的突变率低 1～ 2个数量级 ,但却比一般的DNA病毒高出 4个数量级[2 ] 。S基因编码的HBsAg可以诱导保护性抗体的产生 ,是乙型肝炎疫苗的主要成分 ,也是诊断HBV感染的主要依据之一 ,所以S基因变异…     

时问分辨与酶联免疫检测乙型肝炎表面抗体的结果分析

我国现有1亿多乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染者,是乙型病毒性肝炎感染大目,目前尚没有能够有效治疗乙型病毒性肝炎的药物,一旦感染HBV,慢性乙型肝炎感染者大多数终身携带病毒。控制HBV感染流行的最有效方法是接种乙型肝炎疫苗,接种乙型肝炎疫苗是否有效,     

乙型肝炎病毒致病机制的研究现状

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）属嗜肝DNA病毒科原型，为环状部分双链DNA病毒，呈球状．完整的HBV颗粒的直径为42nm，由蛋白质包膜及核心颗粒组成，其中包膜主要由脂多糖蛋白构成，核心颗粒以蛋白质包膜包裹，组成完整的病毒体．HBV具有感染性，可引起各种急、慢性病毒性肝炎及肝硬化等疾病，     

基因工程肝炎疫苗研究新进展

病毒性肝炎是世界性的严重传染病。肝炎病毒至少有五种,甲型肝炎病毒(HAV),乙型肝炎病毒(HBV),丙型肝炎病毒(HCV),丁型肝炎病毒(HDV),戊型肝炎病毒(HEV)。HBV是一DNA病毒属嗜肝DNA病毒科。HDV是依赖于HBV的缺陷型病毒,其基因组是一单链RNA环状分子,包膜是HBV的包膜抗原。HAV、HCV、HEV均为RNA病毒,     

乙型肝炎病毒复制对肝细胞Id家族表达的影响

目的：研究肝细胞中乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）复制对分化抑制因子（inhibitor of differentiation,Id）家族表达的影响。方法：利用qRT-PCR、Western blot检测分析Id家族在HBV瞬时或稳定复制的肝癌细胞中表达水平的变化,并在HBV复制质粒PCH9-HBV1.1转染的正常肝细胞和HBV转基因小鼠肝组织细胞模型中进一步验证。将乙型肝炎病毒S蛋白（hepatitis B virus S protein,HBs）、乙型肝炎病毒核心蛋白（hepatitis B virus core protein,HBc）、乙型肝炎病毒DNA聚合酶（hep－atitis B virus DNA polymerase,HBp）、乙型肝炎病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein,HBx）的过表达质粒转染HepG2细胞,检测各组与载体对照组细胞中Id家族表达水平的变化,分析比较乙肝病毒编码的4种蛋白对Id家族的调控作用。利用荧光素酶报告基因检测病毒各组分蛋白对Id蛋白启动子活性的影响。结果：瞬时转染HBV表达质粒的HepG2细胞较对照组细胞,Id1、Id3的mRNA和蛋白表达水平均降低（mRNA：t=3.952、3.189,P=0.017、0.033;蛋白：t=10.532、4.155,P=0.000、0.014）;HepG2.2.15中Id1、Id3 mRNA和蛋白的表达水平较HepG2对照组均下降（mRNA：t=5.553、7.211,P=0.005、0.002;蛋白：t=4.193、3.849,P=0.014、0.018）;HepAD38（Tet-）中Id1、Id3蛋白的表达量较 HepAD38（Tet+）组均降低（t=3.052、3.712,P=0.038、0.021）。同时,HBV的复制可以抑制LO2细胞及小鼠肝组织中Id1、Id3的表达（mRNA：t=14.564、3.281、3.489、3.495,P=0.000、0.030、0.025、0.025;蛋白：t=5.651、5.336、4.948、5.149,P=0.005、0.006、0.008、0.007）。转染HBV病毒各编码蛋白质粒的HepG2细胞中,HBc组Id1、Id3较载体对照组的mRNA表达水平降低最明显（77.7%、76.2%,F=9.945、37.528,t=6.481、10.915,P=0.000、0.000）,Western blot结果显示HBx组Id1、Id3蛋白表达量下降最明显（86.2%、68.4%,F=38.225、7.159,t=12.550、5.295,P=0.000、0.001）。双荧光素酶报告基因检测结果表明,HBc组Id1、Id3启动子活性较对照组降幅最大（62.2%、56.3%,F=16.530、5.210,t=5.442、3.222,P=0.000、0.019）。结论：乙型肝炎病毒可以抑制肝组织、细胞中Id1及Id3的表达,其中HBc对Id1、Id3 mRNA的下调最明显,HBx则对Id1、Id3 蛋白水平上的抑制作用最明显。     

加强乙型肝炎的预防，减少乙型肝炎的发病率

乙型肝炎病毒（HBV）为专一的嗜肝病毒，近年由于核酸分子杂交技术的进展，在肝外器官细胞也能检出HBV—DNA，通过北京鸭乙肝肝病毒试验研究提供了在肝外细胞复制的证据。HBV感染者血清经电镜检查有3种病毒颗粒：①Dane颗粒（HBV颗粒），外壳蛋白为HB—sag，核心含有HBV—DNA及HBVDNAp（DNA-多聚酶）、HBcAg、HBeAg；②小球形颗粒；③管形颗粒。后二者为HBV复制过程中过剩的病毒外壳（HBsAg），不含核酸。     

乙型肝炎病毒复制对肝癌细胞Arid2基因表达的影响

目的:初步研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染及其复制对肝癌细胞中抑癌基因Arid2(AT-rich interactive domain 2)表达的影响。方法:采用携带HBV基因组1.1倍体的复制型重组腺病毒Ad-HBV1.1感染Huh7细胞,或者四环素诱导的HBV复制细胞模型Hep AD38细胞,观察HBV瞬时或稳定复制细胞模型中Arid2的表达变化;进一步采用HBV各元件乙型肝炎病毒S蛋白(hepatitis B virus S protein,HBs)、乙型肝炎病毒DNA聚合酶(HBV-pol)、乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)、乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)的过表达质粒转染Huh7细胞,明确病毒自身编码蛋白对Arid2表达的调控作用。在上述细胞模型中,运用Southern-blot、ELISA、real-time PCR的方法验证HBV的感染与复制情况,通过RT-PCR、Western blot检测肝癌细胞抑癌基因Arid2表达水平的变化。结果:HBV瞬时转染或稳定复制细胞模型中,Ad-HBV1.1感染的Huh7细胞m RNA和蛋白表达水平明显降低,Western blot结果显示Arid2蛋白表达水平降低了46.10%(P<0.05);在HBV稳定复制的Hep AD38细胞中,Arid2蛋白表达水平降低了37.63%(P<0.05)。转染HBV 4种病毒编码蛋白过表达质粒的Huh7细胞中,过表达HBs、HBx组较其他实验组Arid2表达水平明显降低,Western blot结果显示Arid2蛋白表达水平在HBs组降低了54.55%(P<0.05),在HBx组降低了46.38%(P<0.05)。结论:HBV的感染和复制导致肝癌细胞中Arid2的表达水平下调,Arid2基因的表达与HBV复制水平呈负相关,其中HBs、HBx对Arid2的下调作用较明显。     

乙型肝炎病毒感染模型应用新进展

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染具有明显的种属特异性，是目前知道的最小的嗜肝DNA病毒，在易感宿主细胞内易于附着、侵入和复制，并可长期持续感染。然而，HBV的易感宿主范围很狭窄，仅限于人、黑猩猩等灵长类动物，故很难在普通实验动物中建立疾病模型。因此，建立适合于HBV研究、简单易得的实验模型一直是研究者们追求的目标。在过去的20多年间，国内外学者陆续建立了多种相应的嗜肝DNA病毒模型，但尚无一个理想的模型可准确地代表人HBV感染的所有特征。自转基因技术出现以后，HBV转基因小鼠的研制使HBV研究取得了很大的发展。近年来，人-鼠嵌合模型的研究成为热点。本文将从细胞模型和动物模型两方面对模型在HBV研究中的应用作系统综述。