巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤小鼠造血干细胞移植后重建造血能力的影响简

目的 研究藏药巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤后机体骨髓造血干细胞功能的影响,探究其“补益”作用机制.方法 将经60Co γ射线照射＋环磷酰胺腹腔注射方法得到的放射线-化学复合损伤小鼠分为巴桑母酥油丸组、生理盐水组、空白组,分别灌胃巴桑母酥油丸、生理盐水及自然恢复14d后,将其骨髓作为供体移植给受致死剂量γ射线照射的同种受体小鼠,再检测受体小鼠外源性脾集落、骨髓造血祖细胞集落产率、骨髓细胞造血干细胞抗原-1（Sca-1）阳性细胞率,并与灌胃.结果 巴桑母酥油丸组的外源性脾集落、骨髓早期红系祖细胞集落（BFU-E）、粒-巨噬系祖细胞集落（CFU-GM）产率均显著高于空白组和生理盐水组（P＜0.05）,而晚期红系祖细胞集落（CFU-E）、巨核系祖细胞集落（CFU-Meg）、骨髓细胞Sca-1＋细胞率并不离于自然恢复的空白组（P＞0.05）.结论 巴桑母酥油丸可以提高放射线-化学复合损伤小鼠骨髓造血干细胞移植后造血重建能力,提示巴桑母酥油丸可经改善骨髓造血干细胞功能发挥其对放射线-化学复合损伤机体“补益”作用.     

罗汉果和熟地增加小鼠造血干细胞的数量和功能

目的罗汉果和熟地具有增强机体免疫力,延年益寿的作用。本文研究罗汉果和熟地对造血干细胞的影响。方法各组小鼠连续喂养罗汉果或熟地3个月,流式细胞仪测量小鼠的外周血、脾脏和骨髓中免疫细胞和造血干细胞的变化;小鼠用半致死剂量的放射线照射后,连续喂养罗汉果或熟地1个月后,流式细胞仪测量罗汉果或熟地对于免疫细胞和造血干细胞损伤修复的作用。结果分析检测结果发现,与对照组相比,长期喂养罗汉果或熟地的小鼠骨髓和外周血中B细胞的比例降低,粒细胞的比例增加,T细胞没有明显变化;骨髓中造血干细胞的数量增加,尤其是长期造血干细胞数量增加显著。半致死剂量的放射线照射后,罗汉果或熟地喂养1个月,小鼠的粒细胞和T细胞都有明显的改善,造血干细胞的数量明显增加。结论罗汉果或熟地长期服用会增加小鼠造血干细胞的数量和功能,促进了辐射所致的骨髓抑制小鼠的造血干细胞的恢复。     

Exo-1基因对端粒酶缺陷小鼠造血干细胞植入效率的影响

目的 利用不同的造血干细胞移植方式,探讨Exo-1基因缺失对端粒酶基因敲除小鼠的造血干细胞植入效率的影响.方法 以CD45.1小鼠的骨髓细胞或骨髓造血干细胞为供体,以端粒酶基因敲除小鼠或Exo-1基因和端粒酶基因双敲除小鼠为受体,在给予不同剂量X线照射或不照射的情况下,重复进行静脉注射全骨髓细胞或分选的骨髓造血干细胞(c-kit<''+>、Sca-1<''+>、lineage<''->,KSL),于移植后1个月取外周血,流式分析嵌合率.结果 未经X线照射及1 Gy、2 Gy照射情况下,端粒酶基因缺陷受体小鼠的外周血中供体来源的细胞嵌合率较低;6 Gy照射后,供体来源的外周血细胞嵌合率仍低于50%,而且端粒酶基因缺陷受体小鼠在移植后1个月内死亡较多;3 Gy照射可形成较高嵌合率,Exo-1基因缺失对端粒酶缺陷小鼠的造血干细胞植入效率的影响不显著.结论 以端粒酶缺陷小鼠作为衰老模型研究造血干细胞植入效率时,3 Gy X线照射能够有效地形成较高的外周血供体细胞的嵌合率,但是Exo-1基因没有进一步提高造血干细胞在端粒酶敲除小鼠的植入效率.     

RunX3对小鼠骨髓造血干细胞功能的影响

目的研究RunX3基因对造血干细胞自我更新和分化能力的影响。方法流式细胞术测定小鼠骨髓干细胞和外周血单个核细胞的比例;通过竞争性骨髓移植实验检测RunX3转基因小鼠骨髓干细胞的功能。结果移植后来源于RunX3-/-小鼠骨髓干细胞供体的外周血细胞占总外周血细胞的比例与野生对照鼠相比无明显差异,移植后来源于RunX3-/-小鼠骨髓干细胞供体的外周血中髓系细胞占总外周血髓系细胞的比例较野生型对照鼠高。结论RunX3基因缺失对骨髓造血干细胞的自我更新没有影响,但其可能参与了骨髓造血干细胞的分化过程。     

p53和Gadd45a蛋白在胰腺癌组织中的表达及临床病理学意义

目的探讨胰腺浸润性导管癌(IDC)组织中p53和Gadd45a蛋白表达及临床病理学意义.方法采用免疫组织化学方法检测59例胰腺IDC标本中p53和Gadd45a蛋白的表达情况,分析其与临床病理学参数之间的关系.结果p53蛋白表达阳性率为67.8%(40/59),Gadd45a蛋白为42.4%(25/59).＜65岁胰腺IDC患者的p53蛋白表达阳性率明显高于≥65岁者(x2=4.711,P=0.030),Gadd45a蛋白表达则与患者年龄无关.不同组织学分化程度和不同TNM分期癌组织中p53蛋白表达差异无显著性;不同TNM分期癌组织中Gadd45a蛋白表达差异无显著性,但不同组织学分化程度癌组织中则差异有显著性(x2=10.052,P=0.007).p53( )组和Gadd45a( )组中位生存时间分别短于p53(-)组和Gadd45a(-)组(x2=0.09,P=0.764;x2=0.14,P=0.704).结论p53和Gadd45a在胰腺癌组织中均有较高表达.p53和Gadd45a蛋白的过表达可能与胰腺癌的恶性生物学行为有关.两者单独或联合表达与胰腺癌患者的预后无关.     

人脐血干细胞对裸小鼠移植的实验研究

目的　探讨脐血干细胞移植到小鼠体内的增殖、分化以及维持情况。方法　将人脐血单个核细胞注入经致死量照射后的免疫缺陷小鼠— BAL B/C nu 小鼠。观察小鼠的生存、造血重建和植入指标情况。结果　移植组小鼠生存、造血重建及植入指标表达明显优于对照组 (P<0 .0 5 ) ,人脐血中的 CD34 细胞可植入且定居于小鼠骨髓中 ,并可在其中增殖、分化。结论　人脐血干细胞移植入裸鼠显示脐血的造血干 /祖细胞在体内具有长期重建造血的能力     

Gadd45a和p53在乳腺癌中的表达及临床病理意义

目的:探讨Gadd45a和p53在乳腺癌中的表达情况及其与临床病理参数和预后的关系?方法:采用免疫组化法检测78例乳腺癌组织及其癌旁正常组织中Gadd45a和p53的表达?结果:Gadd45a在乳腺癌组织中的阳性表达率为38.4%,明显低于正常乳腺组织,p53在乳腺癌组织中的阳性表达率为65.4%,明显高于正常乳腺组织,差异均具有统计意义 (P < 0.05);Gadd45a在乳腺癌组织学Ⅰ级组?Ⅱ级组?Ⅲ级组的阳性表达率依次下降,差异均有统计学意义(P < 0.05);p53在伴有淋巴结转移组中的阳性表达率高于无淋巴结转移组,差异均有统计意义(P < 0.05);p53表达与Gadd45a表达呈负相关(P < 0.05);Gadd45a阳性组的生存期长于阴性组,生存率高于阴性组,存在统计学差异;p53阳性组的生存期短于阴性组,生存率低于阴性组,存在统计学差异(P < 0.05);p53(+)Gadd45a(-)组(即阳性组)中位生存时间短于阴性组,生存率低于阴性组?结论:Gadd45a和p53蛋白的检测可作为乳腺癌恶性程度的检测指标;p53的表达与乳腺癌的转移相关,Gadd45a的表达与乳腺癌的分化分级相关;p53高表达及Gadd45a低表达与乳腺癌的不良预后相关;p53(+)Gadd45a(-)表型与乳腺癌的不良预后相关;Gadd45a蛋白有望成为乳腺癌治疗的新的靶点?     

Cramp过表达对小鼠骨髓造血干细胞功能的影响

目的 研究Cramp蛋白过表达对小鼠骨髓造血干细胞自我更新和分化能力的影响.方法 应用流式细胞仪分析Cramp过表达转基因小鼠及同龄野生型小鼠的骨髓、脾脏、胸腺等组织器官中各种细胞的比例;分选 骨髓造血干细胞,体外培养,观察其克隆形成能力.结果 与野生型小鼠相比,Cramp过表达转基因小鼠的骨髓、脾脏、胸腺等组织器官中各种细胞的比例、骨髓造血干细胞的克隆形成能力等均无明显变化.结论 本研究中,Cramp过表达转基因小鼠骨髓造血干细胞的分化能力、克隆形成能力无明显变化.     

MKP1基因对小鼠造血干细胞功能的影响

目的 通过构建MKP1转基因小鼠模型,研究MKP1基因对造血干细胞自我更新能力的影响.方法 运用显微注射法建立MKP1转基因小鼠;PCR和RT-PCR检测MKP1基因在转基因小鼠的表达水平;流式细胞术测定小鼠骨髓干细胞和外周血单个核细胞的比例;通过竞争性骨髓移植实验检测MKP1转基因小鼠骨髓干细胞的功能.结果 建立了MKP1转基因小鼠;MKP1转基因小鼠骨髓干细胞数量减少;竞争性骨髓移植实验显示MKP1转基因骨髓干细胞来源的外周血细胞总数、B细胞、粒细胞显著减少(P＜0.001),提示MKP1转基因小鼠骨髓干细胞的功能下降.结论 在MKP1转基因小鼠模型中,MKP1基因的过表达影响了小鼠的骨髓干细胞的功能.     

槲皮素对结肠癌的抑癌机制研究

目的 探讨槲皮素对结肠癌细胞系RKO中P53蛋白以及其下游基因Gadd45a表达的影响.方法 采用免疫细胞化学的方法 检测不同浓度槲皮素作用于RKO细胞后的P53蛋白表达的变化,采用RT-PCR与Western Blot技术检测不同浓度槲皮素作用于RKO细胞后的Gadd45a mRNA和蛋白表达的变化.此外,采用Western Blot技术检测不同浓度槲皮素作用于EC109细胞后的Gadd45a蛋白表达的变化.结果 槲皮素作用于RKO细胞后,细胞的P53表达增高,Gadd45a mRNA和蛋白表达水平逐渐增高,并且呈现出一定浓度依赖性.另外,槲皮素作用于EC109细胞后,Gadd45a蛋白表达水平逐渐增高,也呈现出一定浓度依赖性.结论 槲皮素可能通过上调P53依赖途径中p53基因表达使Gadd45a表达增高,由此介入了对肿瘤发生发展的抑制.     

Cramp基因敲除对小鼠骨髓造血干细胞的影响

目的研究Cramp基因敲除在衰老过程中对小鼠造血干细胞的作用。方法应用流式细胞仪分析3月龄及12月龄Cramp基因敲除小鼠及同窝野生型小鼠的骨髓造血干细胞的比例及不同发育阶段B淋巴细胞的比例。结果与野生型小鼠相比,12月龄Cramp基因敲除小鼠的骨髓长期造血干细胞增多,多潜能造血祖细胞减少;前体B淋巴细胞和未成熟B淋巴细胞减少,成熟B淋巴细胞增多。结论在衰老过程中,Cramp基因敲除对骨髓造血干细胞及B淋巴细胞发育有重要影响。     

Gene Transfer into Hematopoietic Cells of Mouse and Its in vivo Expression after Transplantation

Genetransferintohematopoieticcellshasfoundmanyapplicationinexperimentalresearchesaswellasclinicalpractice['1.Atpresent,thestrategyofgenetransferusedmostcommonlyistheretrovirusvectorsystem[2].However,theuseofretrovirusvectorssuffersfromseveraldrawbacks:(1)thegenerationandmanufacturingofretrovirusvectorsarecomplexandnotinexpensive;(2)generalsafetyconcernsareassociatedwiththeuseofanyviral--basevectorsystem,includingreplicationdefectivemurineretrovirusvectorsj(3)retrovirusvectorscurrentlyusedareab…     

Gene transfer into hematopoietic cells of mouse and itsin vivo expression after transplantation

Summary We have shown previously that high-efficient gene transfer can be attained in primary hematopoietic cells using liposome-mediated gene transfer strategy. In order to examine the stability of gene expression mediated by this gene transduction protocol, we observed the expression of marker genein vivo by using bone marrow transplantation (BMT) to engraft lethally irradiated mouse with the genetically modified hematopoietic cells. The results showed that the mouse transplanted with appropriated number of transduced cells remained alive and healthy. The PCR analysis and G418 selection of the spleen colonies and bone marrow cells isolated from lethally irradiated animals 15 days and 30 days after injection of genetically modified bone marrow cells showed that the progeny cells of the transduced hematopoietic stem cells still contained and expressed the transduced genes, suggesting that the hematopoietic system is at least partially re-constructed by the stem cells with marker gene and that the stable expression of foreign genesin vivo can be attained by using this easy and harmless transduction protocol. These findings provide experimental basis for clinician to further investigate the biology of marrow reconstruction and the mechanism of leukemia relapse after BMT. This project was supported by the grant of Scientific Research Foundation of Public Health Ministry (320. 2430-330).     

MDR-1基因骨髓造血干细胞移植抑制大鼠肝癌移植术后复发的研究

目的探讨MDR-1基因骨髓造血干细胞移植对大鼠肝移植术后复发转移的影响。方法选用雄性Wistar大鼠30只为肝移植供体,另选雌性SD大鼠30只为异基因肝移植受体(将HCCLM6肿瘤组织原位接种于大鼠肝脏,10 d后行肝移植,2周后处死大鼠)随机分为两组,A组MDR-1基因骨髓造血干细胞移植联合肝移植组,B组为单纯肝移植组。比较两组大鼠肝移植术后2周生存率、肝内复发和肝外转移情况。结果术后两周,A组大鼠存活14只,B组存活10只(P<0.05)。两组大鼠肝内复发率均为100%,但复发瘤大小差异有统计学意义(P<0.05),A组为(323.23±29.56)mm3,B组为(692.73±142.56)mm3。A组肺转移率为22%,B组为70%,A组淋巴结转移率为15%,B组为50%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MDR-1基因骨髓造血干细胞移植对大鼠肝移植术后复发转移有一定抑制作用。     

间充质干细胞在致敏受者造血干细胞移植中的作用

【目的】 本实验拟研究骨髓间充质干细胞(MSC)在致敏受者造血干细胞移植中的作用?【方法】 体外分离BALB/c小鼠骨髓细胞,通过贴壁培养方法获得MSC,应用流式细胞仪检测细胞表面分子标记?通过异基因脾细胞输注方法建立致敏动物模型;绿色荧光染料标记骨髓MSC,分别移植到非致敏及致敏受者体内,并于移植后不同时间点检测MSC的归巢情况?致敏BALB/c小鼠经照射预处理,联合应用同基因MSC与异基因骨髓细胞移植,每日观察小鼠的生存情况?【结果】 体外培养第4代MSC表现为长梭形,阴性表达造血细胞表面分子而阳性表达粘附分子?动物体内实验发现移植后第48小时,MSC在非致敏受者体内主要归巢于骨髓,而在致敏受者体内主要归巢于脾脏?造血干细胞移植实验中,致敏小鼠接受同基因骨髓MSC与异基因骨髓细胞移植,结果发现致敏小鼠在移植后第12 ~ 16天全部死亡,生存中位数时间是14 d?【结论】 成功培养小鼠骨髓MSC;移植后MSC在致敏受者体内主要归巢于脾脏组织;联合应用MSC移植并不能有效促进异基因造血干/祖细胞在致敏受者体内植入?     

转LacZ基因骨髓间充质干细胞体内造血分化的初步研究

目的　初步探讨小鼠骨髓间充质干细胞在体内造血细胞分化的潜能。方法　利用转LacZ基因小鼠MSCs输注X射线亚致死量照射的BALB/C小鼠,2个月后取骨髓细胞作体外甲基纤维素培养和X -Gal染色,取肝脏X -Gal染色。结果　MSCs输注组和对照组骨髓细胞体外集落培养均能形成鹅卵石样造血细胞集落,经X -gal组化染色后,输注组部分造血集落产生蓝绿色,对照组没有颜色变化。肝脏X -Gal染色输注组部分产生蓝色,对照组没有颜色变化。结论　小鼠MSCs具有向造血细胞分化的潜能。     

趋化素样因子（CKLF1）对骨髓细胞增殖活性的研究

目的 研究趋化素样因子1（CKLF1）对造血功能的调节作用。方法 利用MTT法,检测CKLF1真核细胞表达载体转染上清在液体培养基中,对人低密度骨髓细胞和小鼠骨髓细胞的增殖调控作用;并在兰固体培养基中,观察其对人低密度骨髓细胞集落形成的刺激作用。结果 COS－7细胞表达的CKLF1能明显促进人和小鼠骨髓细胞的增殖,并能促进人骨髓细胞的集落形成,与GM－CSF有协同刺激作用。结论 CKLF1能促进人和小鼠骨髓造血干／祖细胞的增殖和分化。     

bcl-2基因转染小鼠造血干细胞重建造血的生物学特性

目的 观察ｂｃｌ－２基因转染小鼠造血干细胞重建造血的小鼠对放化疗的抵抗作用。方法 （１）含ｂｃｌ－２ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体质粒,经脂质体介导转染ＰＡ３１７包装细胞,通过Ｇ４１８筛选和克隆,获得高病毒滴度的细胞株（Ｄ３）;（２）用Ｄ３细胞株的病毒上清转染小鼠胚胎肝造血干细胞;（３）经致死剂量照射小全注ｂｃｌ－２转 造血干细胞重建造血;（５）采用脾集落形成和再增殖能力观察ｂｃｌ－２转因干细胞重建造血     

参芪扶正注射液对化疗后小鼠造血功能影响的实验研究

目的 探讨参芪扶正注射液对化疗后小鼠造血功能的影响.方法 用5-氟尿嘧啶（5-FU）225 mg/kg腹腔注射复制骨髓抑制动物模型,治疗组给予参芪扶正注射液5 ml/kg,对照组给予同剂量生理盐水.治疗1周后,做血细胞计数、各系造血祖细胞集落（CFU-GM、CFU-E、CFU-MK）培养和骨髓病理检查.结果 参芪扶正注射液能升高外周血细胞计数：治疗组小鼠外周血的红细胞、白细胞和血小板计数均高于对照组（P〈0.05）.促进造血祖细胞增殖：治疗组小鼠的CFU-GM、CFU-E、CFU-MK集落数均大于对照组（P〈0.05）.改善骨髓抑制：骨髓病理检查对照组出现大片空白区,造血细胞稀少,而治疗组造血组织结构较完整,造血细胞量丰富.结论 化疗后小鼠在骨髓抑制、造血功能低下时,参芪扶正注射液能通过促进骨髓各系造血祖细胞的增殖,改善骨髓造血组织增生,从而促进血细胞的生成.