Exonuclease-1缺失延缓端粒酶缺失小鼠造血微环境的衰老

目的 研究Exo-1对端粒酶缺失小鼠造血微环境衰老的影响.方法 以端粒酶基因敲除小鼠( Terc-/-)和Exo-1基因敲除小鼠(Exo -1-/-)杂交,并进一步互交产生第三代端粒酶基因敲除小鼠(G3Terc -/-)以及第三代Terc和Exo-1双基因敲除小鼠(G3Terc-/- Exo-1-/-).以CD45.1野生型小鼠的骨髓细胞为供体,以2月龄G3Terc-/-或G3Terc-/- Exo-1-/-小鼠为受体,进行骨髓移植.在受体小鼠9月龄时,取骨髓、脾脏、胸腺、外周血等组织器官的细胞进行流式分析,研究G3 Terc-/-和G3Terc-/-Exo -1-/-受体小鼠中的野生型供体来源的造血干细胞的发育分化.结果 同G3Terc-/-小鼠相比,G3Terc-/- Exo-1-/-双基因敲除受体小鼠骨髓中野生型供体来源的B220+细胞比例升高,前体B细胞的比例也明显升高;脾脏B220+细胞的比例明显升高;胸腺发育正常;外周血中B220+细胞比例升高.结论 Exo-1缺失延缓了端粒酶基因敲除小鼠造血系统微环境的衰老,从而逆转了端粒功能障碍引起的骨髓造血干细胞发育分化异常.     

移植前输注供体细胞的小鼠单倍体相合骨髓移植实验

目的建立小鼠非清髓性单倍体相合骨髓移植模型,探讨移植前输注供体细胞的造血干细胞植入效果。方法以CB6F1雌性小鼠为受鼠,C57BL/6雄性小鼠为供鼠,移植前3d经尾静脉输注供鼠脾细胞或骨髓细胞3×107,输注细胞后24h和48h分别通过腹腔注射阿糖胞苷0.015g/d,移植前1d予450cGy全身照射（TBI）,移植当天输注供鼠骨髓有核细胞5×107/只。监测受鼠白细胞恢复、Y染色体性别决定基因（SRY）以及外周血供鼠CD3＋细胞嵌合状态。结果单纯给予TBI小鼠均存活,且移植后30d白细胞恢复正常,TBI＋骨髓细胞移植（TBI＋BMT）组移植后14、30、60d时外周血SRY基因PCR检测结果均阳性,60d供体CD3^＋细胞嵌合率达54.4%。移植前输注供体脾细胞组嵌合率最高,移植后60d达93.5%±4.8%,优于移植前输注供体骨髓细胞组（P〈0.05）。结论 450cGy TBI的非清髓性预处理可以成功建立非清髓性单倍体相合骨髓移植模型,移植前输注供体脾细胞可促进造血干细胞植入。     

应用体细胞基因转移技术建立的遗传性极度高血脂小鼠模型

为探讨非清髓造血干细胞移植小鼠模型的制备,以10-12周龄C57BL/6(H-2b)雌性小鼠为受体,以10-12周龄BALB/c(H-2d)雄性小鼠为供体,移植前采用环磷酰胺200 mg/kg)加5 Gy Y射线全身照射的非清髓预处理方案,移植后36 d检测雌性受体小鼠体内Y染色体特异性基因表达作为移植植活指标。结果发现,非清髓的预处理方案下可以实现异基因造血细胞的植活,同时发现移植回输的造血细胞数量对于造模成功率有着关键作用,在回输异基因骨髓细胞数量为2×107个时移植植活率为80％(8/10)。     

FOXO3A对全身照射小鼠造血系统辐射损伤的影响

目的利用FOXO3A基因敲除小鼠探讨FOXO3A在造血系统电离辐射(ionizing radiation,IR)损伤中的影响。方法 FOXO3A~(-/-)小鼠和WT小鼠(FVB/N)分为野生型小鼠对照组(WT组),FOXO3A~(-/-)小鼠对照组(FOXO3A~(-/-)组),野生型小鼠照射组(WT+IR),FOXO3A~(-/-)小鼠照射组(FOXO3A~(-/-)+IR)四组,分别接受假照射和4 Gy X射线全身照射(total body irradiation,TBI),剂量率为0.9 Gy/min。接受TBI后14 d检测FOXO3A~(-/-)小鼠和WT小鼠脏器指数、外周血和骨髓细胞计数,骨髓细胞分型,造血祖细胞(HPCs)粒细胞巨噬细胞集落形成单位(colony forming unit-granulocyte and macrophage,CFU-GM)形成能力,观察FOXO3A基因敲除对造血系统辐射损伤的影响。结果生理情况下,FOXO3A~(-/-)小鼠骨髓有核细胞计数下降,HPCs比例升高(P0.05);小鼠接受4 Gy X射线TBI后14 d,FOXO3A基因敲除会加重电离辐射诱导的HPCs和造血干细胞(HSCs)比例下降,但也会抑制辐射诱导的骨髓有核细胞数下降和造血祖细胞CFU-GM形成能力减退。结论 FOXO3A基因敲除破坏造血系统稳态维持,加重TBI小鼠HPCs和HSCs的辐射损伤,对造血细胞辐射敏感性产生一定的影响。FOXO3A在造血系统电离辐射损伤中的调节作用以及能否作为防治损伤的靶点还有待进一步研究。     

异基因造血干细胞移植后小鼠共刺激分子表达与急性移植物抗宿主病的关系

目的 探究异基因造血干细胞移植后小鼠共刺激分子表达及其与急性移植物抗宿主病（aGVHD）发病的关系。方法 供体为5只C57BL/6J（H2KD^-H2KB⁺）雄性小鼠,受体为30只CB6F1（H2KD⁺H2KB⁺）雌性小鼠。将受体小鼠随机分为单纯照射组、骨髓移植组和aGVHD组,每组10只。单纯照射组：受体小鼠接受γ射线照射后不注射任何细胞;骨髓移植组：受体小鼠接受γ射线照射后注射5×10⁶个供体来源去T淋巴细胞的骨髓有核细胞;aGVHD组：受体小鼠接受γ射线照射后,同时注射5×10⁶个供体来源去T淋巴细胞的骨髓有核细胞和3×10⁷个供体来源脾细胞。采用log-rank生存曲线分析各组小鼠移植后生存情况。分别在移植后7、14、21、28 d采用流式细胞术检测骨髓移植组和aGVHD组小鼠外周血CD4⁺T淋巴细胞和CD8⁺T淋巴细胞表面共刺激分子细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）、程序性死亡蛋白1（PD-1）、可诱导共刺激分子（ICOS）和CD28的表达情况,以及移植后21 d两组小鼠脾组织CD4⁺T淋巴细胞内白细胞介素（IL）-17、γ干扰素、IL-4的表达情况,并在移植后21 d采用3,3''-二氨基联苯胺（DAB）染色检测两组小鼠结肠组织共刺激分子配体的表达情况。结果 单纯照射组受体小鼠均在γ射线照射后19 d内死亡;骨髓移植组小鼠在γ射线照射后均未出现aGVHD症状,30 d内均存活;aGVHD组小鼠在γ射线照射后出现aGVHD症状的时间为14（11~18）d,生存时间为22（13~30）d。随着时间的推移,aGVHD组小鼠外周血CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞表面CTLA-4、PD-1表达在移植后均呈下降趋势,ICOS、CD28表达均呈上升趋势。在移植后28 d时aGVHD组小鼠外周血CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞表面CTLA-4、PD-1表达均低于骨髓移植组,ICOS、CD28表达均高于骨髓移植组,差异均有统计学意义（P均<0.05）。DAB染色结果示,骨髓移植组结肠组织CD80、ICOS配体（ICOSL）、PD-1配体（PD-L1）表达均为阴性,aGVHD组结肠组织CD80、ICOSL、PD-L1阳性表达率分别为40%、80%、80%。与骨髓移植组比较,aGVHD组小鼠脾组织CD4⁺T淋巴细胞内IL-17、γ干扰素表达均增加,IL-4表达减少,差异均有统计学意义（P均<0.05）。结论 异基因造血干细胞移植小鼠发生aGVHD后,共刺激分子CTLA-4表达随时间推移逐渐降低。CTLA-4、ICOS、PD-1均可能通过调节辅助性T细胞（Th）1、Th2、Th17等T淋巴细胞亚群分布参与aGVHD的发生、发展。     

E2F1基因敲除小鼠骨髓造血干、祖细胞减少

目的了解转录因子E2F1基因敲除对造血干、祖细胞的影响。方法用不同抗体标记E2F1基因敲除及同窝野生对照小鼠的外周血、脾脏、骨髓等细胞,应用流式细胞仪进行分析,比较两组之间的差异。结果对检测结果进行统计分析发现,与野生型小鼠相比,E2F1基因敲除小鼠的外周血、骨髓细胞均有改变,脾脏细胞未见明显变化,骨髓前体B细胞、髓系祖细胞、造血干细胞等均有显著变化。骨髓造血干、祖细胞减少,G1期造血干细胞减少。结论 E2F1基因敲除可使小鼠造血干、祖细胞减少。     

人参多糖动员的造血干/祖细胞移植重建造血衰竭小鼠造血功能的研究

目的:探讨经人参多糖动员的外周血造血干/祖细胞移植对造血衰竭小鼠造血重建的作用。方法:建立小鼠造血衰竭模型,移植经人参多糖动员的外周血单个核细胞,检测受体小鼠生存时间,外周血WBC,脾湿重及脾集落数,进行染色体嵌合实验。结果:经人参多糖动员的雄性小鼠外周血MNC1×105个输注给致死剂量照射的雌性小鼠,可明显延长小鼠存活时间;提高受体小鼠外周血WBC数;亦能增加脾湿重,提高脾集落(CFU-S)数;经Y染色体检测(PCR法)受体小鼠外周血单个核细胞可检出581bpY染色体序列。结论:经人参多糖动员小鼠的外周血中存在数量较多的造血干/祖细胞,回输给造血衰竭小鼠能重建小鼠造血功能。     

骨髓间充质干细胞移植重建极重度放射损伤小鼠造血功能

目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞(mouse bone marrow mesenchymal stem cell,mMSC)单独输注对重度放射损伤小鼠造血功能重建的影响.方法:将体外培养扩增的雄性C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞输注给受致死剂量全身照射(8 Gy)的雌性C57BL/6小鼠,检测移植后外周血象、骨髓有核细胞数、病理变化、粒-单核细胞系祖细胞集落(CFU-GM)计数及性染色体比例,以未输注MSCs的小鼠作对照.结果:对照组小鼠(n=6)在照射后20 d内全部死于造血功能衰竭;MSCs组移植后血象明显下降,但2周后迅速恢复,28 d时恢复到照射前的60%左右,42 d外周血象基本恢复.MSC促进骨髓有核细胞数及CFU-GM快速恢复,有利于骨髓组织学的明显恢复改善.移植后42 d,仍可在受致死量照射的受体鼠内检测到供体MSC,但不能长期植入.结论:小鼠骨髓间充质干细胞单独输注可促进重度放射损伤小鼠的造血功能恢复,其植入时间长短可能与输注的细胞量有关.     

大剂量放疗联合造血干细胞移植动物模型的建立

目的 :建立大剂量放疗联合造血干细胞移植的动物模型。方法 :用60 Coγ射线照射 BALB/ C小鼠 ,模拟大剂量放 /化疗的骨髓衰竭作用 ,摸索60 Coγ射线照射的绝对致死剂量 ,观察造血干细胞移植后存活率及外周血白细胞数目恢复情况。结果 :60 Coγ射线照射的绝对致死剂量最小为 8Gy,造血干细胞移植后小鼠存活率为 80 % ,外周血血象恢复良好。结论 :该动物模型的成功建立为造血干细胞移植的进一步研究提供了新的途径     

小鼠到大鼠骨髓移植诱导供者特异的免疫耐受

目的　探索适用临床的异种骨髓移植诱导免疫耐受的方案。方法　受体SD大鼠接受亚致死剂量照射(5 5Gy)当天尾静脉注射BALB/c小鼠骨髓细胞 8× 10 7,2d后腹腔内注射环磷酰胺 15 0mg/kg。分别于移植后 3 0 ,60及90d取受体大鼠外周血 ,用特异性单抗作直接免疫荧光染色后上流式细胞仪 (FACS)分析 ,检测骨髓植入的嵌合情况 ,并于 4周后作皮片移植和混合淋巴反应 (MLR) ,检查免疫耐受情况。结果　受体大鼠外周血可检测到小鼠骨髓源性细胞 ,嵌合体在 90d时仍存在。皮片移植和MLR证明受体SD大鼠对供体BALB/c小鼠产生特异性免疫耐受 ,对无关第 3者C5 7BL/ 6小鼠仍有强烈免疫应答。结论　小鼠到大鼠骨髓移植成功地诱导了特异性免疫耐受。     

基于CRISPR/Cas9的PALM基因敲除约氏疟原单克隆虫株的构建

目的：基于CRISPR/Cas9技术构建并鉴定Plasmodium yoelii 17XNL PALM基因敲除单克隆虫株。方法：根据PlasmoDB数据库中的约氏疟原虫P.yoelii 17XNL PALM基因序列信息,设计引物与sgRNA。PCR扩增左、右同源臂,将同源臂和sgRNA与载体pYCm-golden-blue连接,构建用于基因敲除的CRISPR工具质粒pYCm-PALM KO。pYCm-PALM KO CRISPR质粒电转染至P.yoelii 17XNL裂殖体,尾静脉注射感染小鼠,24 h后采血查获疟原虫后,给予小鼠6 mg/mL乙胺嘧啶喂水进行药物压力筛选基因敲除疟原虫。此后每2天鼠尾采血涂片镜检疟原虫,喂药8 d时提取疟原虫基因组DNA进行PCR鉴定,最终经测序确定是否发生PALM基因敲除。将已证实存在PALM基因敲除疟原虫的鼠血采用有限稀释法接种小鼠,8 d后采血镜检疟原虫,PCR鉴定,筛选获取单克隆虫株。将获取的PALM基因敲除的单克隆虫株和P.yoelii 17XNL各接种至6只昆明小鼠体内,每只接种1×10⁵感染疟原虫的红细胞(iRBC)...     

探讨γδT细胞在小鼠胰岛移植排斥反应中的作用

目的 通过胰岛移植模型,观察移植后小鼠血糖及存活时间,从而探讨肠上皮γδT细胞在胰岛移植排斥反应中的作用.方法 建立小鼠胰岛移植模型,分为野生型小鼠组、γδ敲基因小鼠组和γδ敲基因回输γδT细胞小鼠组,移植后分别于1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29 d测量空腹血糖,并于术后两周取移植物观察病理情况.结果 术后野生型小鼠组和γδ敲基因回输γδT细胞小鼠组移植后血糖升高明显慢于γδ敲基因小鼠组,差异有统计学意义(P＜0.05),γδ敲基因回输γδT细胞小鼠组与野生型小鼠组差异无统计学意义(P＞0.05).野生型小鼠组存活时间(27±2)d及γδ敲基因再回输组小鼠组存活时间(24±1)d均明显长于γδ敲基因小鼠组的(17±3)d,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肠上皮γδT细胞作为一种特殊的T细胞在胰岛移植排斥反应中起着重要作用.     

瞬时性受体电位通道香草酸受体亚型6基因敲除小鼠模型的建立

目的 建立Trpv6基因剔除小鼠模型,为在体研究Trpv6的生物学功能及其与骨代谢关系创造条件。 方法 从Ensembl数据库中获得小鼠Trpv6基因组序列。设计基因剔除策略,构建基因剔除载体pBR322-MK-Trpv6。以电穿孔方法将基因剔除载体导入ES细胞,用G418和Ganciclovoir进行正负筛选,获得双抗性克隆。PCR鉴定出正确同源重组的胚胎多能干细胞（ES细胞）克隆。将正确同源重组的ES细胞注射到C57BL/6J小鼠的囊胚中,获得嵌合体小鼠。挑选嵌合率在50%的雄鼠与C57BL/6J小鼠交配,获得的灰鼠,PCR鉴定为杂合子小鼠。杂合子小鼠交配后获得纯合子小鼠。 结果 成功构建了打靶载体pBR322-MK-Trpv6。电穿孔后,共获得24个正确同源重组的克隆,同源重组效率为25%。同源重组的克隆经显微注射后,共获得4只嵌合率大于50%的雄鼠。嵌合鼠与野生型C57BL/6J交配,获得57只来源于ES细胞的灰鼠,PCR鉴定证实17只为杂合子小鼠,阳性率为33.3％。杂合子小鼠交配获得纯合子小鼠。经Western印迹证实纯合子小鼠无Trpv6蛋白的表达。 结论 已成功建立了Trpv6基因剔除小鼠模型,其中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象。     

神经系统SARM1条件性敲除小鼠的构建及其应用

目的：构建SARM1基因在神经细胞中条件性敲除小鼠模型,为探究SARM1基因在神经系统中的功能提供研究工具。方法：运用ES细胞打靶的方式构建SARM1flox/flox转基因小鼠,并将其与表达Nestin-Cre重组酶的工具鼠进行杂交以产生神经元特异性SARM1基因敲除小鼠。然后使用PCR对敲除小鼠进行基因型鉴定,使用Western blot验证基因敲除效果。通过对小鼠进行旷场与高架十字迷宫试验来评估小鼠的情绪行为和焦虑水平。结果：SARM1蛋白主要表达于中枢神经系统,在神经元中高表达。PCR结果表明,成功构建了神经元特异性SARM1基因敲除小鼠。Western blot结果显示,与正常小鼠对比,SARM1Nestin-CKO小鼠的脑组织中SARM1蛋白表达显著降低（P＜0.05）,并且SARM1基因敲除不影响小鼠的正常生长发育,也不影响脑组织的一般形态和神经细胞的数量。同时发现该条件性敲除小鼠不存在明显的焦虑样表型。结论：成功构建了SARM1基因在神经细胞中特异性敲除的小鼠动物模型,可为探讨SARM1基因在神经精神疾病中的作用提供重要研究平台。     

Inhibiting effect of antisense hTRT on telomerase activity of human liver cancer cell line SMMC-7721

Objective: To induce changes in biological character of human liver cancer cell line SMMC-7721 by blocking the expression of telomerase genes hTRT and to explore its value in cancer gene therapy. Methods: The vehicle for eukaryotic expression of antisense hTRT was constructed and then transfected into SMMC-7721 cells. The effects of antisense hTRT gene on telomerase activity, cancer cell growth and malignant phenotypes were analyzed. Results: The obtained transfectants that could express antisense hTRT gene stably showed marked decrease in telomerase activity;the shortening of telomere was obvious; cells presented contact growth inhibition; in nude mice transplantation, the rate of tumor induction dramatically decreased. Conclusion : Antisense hTRT gene expression can significantly inhibit telomerase activity of cancer cells and decrease malignant phenotypes in vitro and in vivo. Therefore, as a telomerase inhibitor, antisense hTRT gene may be a new pathway for cancer therapy.     

胰腺β细胞生长激素受体基因敲除对STZ诱发1型糖尿病小鼠的影响

目的：利用胰腺β细胞组织特异性生长激素受体（GHR）基因敲除小鼠结合链脲佐菌素(STZ )诱导1型糖尿病模型,从基因水平研究胰腺β细胞GHR缺失对1型糖尿病的影响。方法： 实验小鼠分4组,包括LLc对照组［胰腺β细胞特异敲除GHR小鼠（βGHRKO,LLc）、LL对照组［含有GHR等位基因纯合子小鼠(LL)］、LLc STZ组及LL STZ组（LLc 小鼠和LL小鼠分别给予STZ注射造模）,小鼠餐后血糖≥25 mmol•L^-1为造模成功。对小鼠进行葡萄糖耐量实验（GTT）、小鼠胰腺组织HE染色和免疫组织化学检测。结果：STZ注射后,LL STZ组和LLc STZ组小鼠血糖出现上升趋势,16 d后达到1型糖尿病诊断标准。GTT,LL STZ组和LLc STZ组小鼠血糖值分别较LL对照组和LLc 对照组小鼠血糖值明显升高（P<0.05）,HE染色,与LL 对照组比较,LLc 对照组小鼠胰岛形态及结构无明显变化;LL STZ和LLc STZ组小鼠胰岛萎缩,β细胞数量明显减少。免疫组织化学检测,LL STZ组较LL对照组小鼠胰岛素分泌显著减少,LLc STZ组较LLc 对照组小鼠胰岛素分泌显著减少。结论：在STZ诱导1型糖尿病条件下,胰腺β细胞GHR基因敲除对1型　糖尿病小鼠血糖及β细胞功能无明显影响。     

miR-15a/16-1基因敲除小鼠的鉴定及其脾脏免疫细胞频率分析

目的:探讨miR-15a/16-1基因敲除小鼠的繁育与子代鼠的鉴定,及其脾脏免疫细胞频率?方法:从子鼠鼠尾中提取基因组DNA,采用PCR方法进行基因型鉴定?miR-15a/16-1基因敲除小鼠眼眶取血,用动物血液分析仪进行全血细胞分析?采用流式细胞仪分析miR-15a/16-1基因敲除小鼠脾脏中免疫细胞频率?结果:miR-15a/16-1+/+?miR-15a/16-1+/-?miR-15a/16-1-/- 各表型小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律?流式结果显示,miR-15a/16-1基因敲除小鼠与野生型小鼠相比,CD19+?NKG2D+ 细胞增多,其余无明显差异?全血细胞分析结果显示淋巴细胞增多?结论:实验所用PCR方法可以鉴定miR-15a/16-1-/-小鼠;miR-15a/16-1-/-小鼠的获得为进一步探究miR-15a/16-1的作用提供了较理想的动物模型;敲除miR-15a/16-1基因,小鼠脾脏CD19+?NKG2D+细胞增多?     

基于CRISPR/Cas9技术构建严重联合免疫缺陷小鼠

目的 应用CRISPR/Cas9技术靶向敲除编码小鼠T、B细胞的Rag2基因及编码NK细胞的IL2rg基因,构建T、B细胞及NK细胞联合免疫缺陷小鼠。方法 根据Genbank报道的Rag2及IL2rg基因序列,分别针对其外显子设计25 bp左右的sgRNA并进行合成, sgRNA退火后克隆入pX330载体。Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA及Cas9重组质粒体外转录为mRNA后显微注射入BALB/c小鼠受精卵细胞,受精卵细胞移植到受体动物获得子代小鼠,首建鼠（F0）与野生型小鼠交配获得F1代小鼠,突变的F1代小鼠互交后筛选F2代纯合子小鼠。通过基因测序、流式细胞技术及接种人源性肿瘤细胞系方法检测子代小鼠基因型和表型。结果 成功构建了Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA重组质粒并对其进行了体外转录,mRNA显微注射并移植后获得57只F0小鼠。连续交配后,获得F2代纯合子小鼠。序列分析表明子代小鼠中IL2rg有两个基因型,分别是10 bp和11 bp的缺失突变;而Rag2只有一个基因型,为8 bp的缺失突变。与野生型BALB/c小鼠相比,小鼠外周血中CD3、B220及NKp46阳性细胞数量明显降低。接种人乳腺癌细胞系SKBR-2HL后,肿瘤生长良好,且随着时间延长肿瘤组织逐渐增大。结论 利用CRISPR/Cas9技术可有效实现BABL/c小鼠体内Rag2、IL2rg基因突变,并导致小鼠T、B及NK细胞功能异常。     

Rtn4-A/B基因敲除小鼠模型的制备

目的通过制备Rtn4-A/B基因敲除小鼠,探索Rtn4-B基因的生物学功能。方法用细菌人工染色体(BAC)载体构建Rtn4-A/B基因打靶载体并使其线性化,通过电转化法将其转入129SvEv品系雄性小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)。将正确同源重组的ES细胞注射入C57BL/6J小鼠囊胚腔,繁育出嵌合体小鼠后,进一步繁殖以获得杂合子小鼠。抽提小鼠尾尖组织DNA,采用PCR法鉴定小鼠的基因型。结果基因打靶后,得到14个发生双臂正确同源重组ES细胞克隆。利用阳性ES细胞克隆进行囊胚内显微注射,得到5只嵌合率大于50%的雄鼠,最终繁育得到4只Rtn4-A+/-B+/-杂合子小鼠。结论利用ES细胞基因打靶、同源重组等方法,成功获得Rtn4-A/B基因敲除杂合子小鼠。