IL-33转基因小鼠骨髓造血干/祖细胞向髓系细胞分化的能力增强

目的利用IL-33转基因小鼠研究IL-33对造血干/祖细胞的增殖和分化影响。方法利用流式细胞仪分析IL-33转基因小鼠及同窝野生对照小鼠的外周血、脾脏、骨髓细胞的免疫表型及造血干细胞分化不同阶段细胞的数量变化;利用体外成克隆实验和细胞周期分析研究IL-33对于造血干细胞增殖能力的影响。结果与野生型小鼠相比,IL-33转基因小鼠B细胞和T细胞在外周血中都明显降低,粒细胞在外周血和骨髓中都有明显增加;IL-33转基因小鼠的骨髓造血干细胞和多能祖细胞数量减少,共同淋系祖细胞数量减少,共同髓系祖细胞和粒单系祖细胞数量增加;IL-33转基因小鼠的造血干细胞处于S-G2-M的细胞增多;体外单克隆实验发现IL-33转基因小鼠造血干细胞形成的集落数增加。结论 IL-33转基因小鼠造血干细胞增殖能力增强,更易向髓系细胞分化。     

Cramp基因敲除对小鼠骨髓造血干细胞的影响

目的研究Cramp基因敲除在衰老过程中对小鼠造血干细胞的作用。方法应用流式细胞仪分析3月龄及12月龄Cramp基因敲除小鼠及同窝野生型小鼠的骨髓造血干细胞的比例及不同发育阶段B淋巴细胞的比例。结果与野生型小鼠相比,12月龄Cramp基因敲除小鼠的骨髓长期造血干细胞增多,多潜能造血祖细胞减少;前体B淋巴细胞和未成熟B淋巴细胞减少,成熟B淋巴细胞增多。结论在衰老过程中,Cramp基因敲除对骨髓造血干细胞及B淋巴细胞发育有重要影响。     

Exonuclease-1缺失延缓端粒酶缺失小鼠造血微环境的衰老

目的 研究Exo-1对端粒酶缺失小鼠造血微环境衰老的影响.方法 以端粒酶基因敲除小鼠( Terc-/-)和Exo-1基因敲除小鼠(Exo -1-/-)杂交,并进一步互交产生第三代端粒酶基因敲除小鼠(G3Terc -/-)以及第三代Terc和Exo-1双基因敲除小鼠(G3Terc-/- Exo-1-/-).以CD45.1野生型小鼠的骨髓细胞为供体,以2月龄G3Terc-/-或G3Terc-/- Exo-1-/-小鼠为受体,进行骨髓移植.在受体小鼠9月龄时,取骨髓、脾脏、胸腺、外周血等组织器官的细胞进行流式分析,研究G3 Terc-/-和G3Terc-/-Exo -1-/-受体小鼠中的野生型供体来源的造血干细胞的发育分化.结果 同G3Terc-/-小鼠相比,G3Terc-/- Exo-1-/-双基因敲除受体小鼠骨髓中野生型供体来源的B220+细胞比例升高,前体B细胞的比例也明显升高;脾脏B220+细胞的比例明显升高;胸腺发育正常;外周血中B220+细胞比例升高.结论 Exo-1缺失延缓了端粒酶基因敲除小鼠造血系统微环境的衰老,从而逆转了端粒功能障碍引起的骨髓造血干细胞发育分化异常.     

RunX3对小鼠骨髓造血干细胞功能的影响

目的研究RunX3基因对造血干细胞自我更新和分化能力的影响。方法流式细胞术测定小鼠骨髓干细胞和外周血单个核细胞的比例;通过竞争性骨髓移植实验检测RunX3转基因小鼠骨髓干细胞的功能。结果移植后来源于RunX3-/-小鼠骨髓干细胞供体的外周血细胞占总外周血细胞的比例与野生对照鼠相比无明显差异,移植后来源于RunX3-/-小鼠骨髓干细胞供体的外周血中髓系细胞占总外周血髓系细胞的比例较野生型对照鼠高。结论RunX3基因缺失对骨髓造血干细胞的自我更新没有影响,但其可能参与了骨髓造血干细胞的分化过程。     

ApoE基因敲除使小鼠B、T淋巴细胞减少

目的 了解Apo E基因敲除对造血系统各种细胞的影响。方法 用不同抗体标记Apo E基因敲除及同窝野生对照小鼠的外周血、脾脏、骨髓等细胞,应用流式细胞仪进行分析,比较两组之间的差异。结果 对检测结果进行统计分析发现,与野生型小鼠相比,Apo E基因敲除小鼠的外周血、脾脏淋巴细胞均有改变,骨髓前体B淋巴细胞、胸腺T淋巴细胞、造血干细胞等没有显著变化。结论 Apo E基因敲除后,小鼠外周血及脾脏B淋巴细胞减少,但B及T淋巴细胞发育,以及骨髓造血干细胞都没有显著变化。     

MKP1基因对小鼠造血干细胞功能的影响

目的 通过构建MKP1转基因小鼠模型,研究MKP1基因对造血干细胞自我更新能力的影响.方法 运用显微注射法建立MKP1转基因小鼠;PCR和RT-PCR检测MKP1基因在转基因小鼠的表达水平;流式细胞术测定小鼠骨髓干细胞和外周血单个核细胞的比例;通过竞争性骨髓移植实验检测MKP1转基因小鼠骨髓干细胞的功能.结果 建立了MKP1转基因小鼠;MKP1转基因小鼠骨髓干细胞数量减少;竞争性骨髓移植实验显示MKP1转基因骨髓干细胞来源的外周血细胞总数、B细胞、粒细胞显著减少(P＜0.001),提示MKP1转基因小鼠骨髓干细胞的功能下降.结论 在MKP1转基因小鼠模型中,MKP1基因的过表达影响了小鼠的骨髓干细胞的功能.     

Cramp转基因小鼠的构建及鉴定

目的建立系统性表达Cramp转基因模型小鼠,为研究Cramp在衰老中的作用提供模型动物。方法把Cramp cDNA插入系统性表达CMV启动子下游,构建转基因表达载体,显微注射法建立Cramp转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因型,用RT-PCR和Western blotting方法筛选高表达品系。结果成功构建Cramp cDNA转基因载体,建立了Cramp转基因小鼠,通过RT-PCR和Western blotting方法筛选出3个高表达品系。结论建立了系统表达Cramp转基因小鼠,转入的Cramp基因在骨髓、脾脏、肝脏等组织高表达,为研究Cramp基因在衰老中的作用及机制提供了动物模型。     

ApoE基因敲除对小鼠B、T淋巴细胞的影响

目的了解Apo E基因敲除对淋巴细胞的影响。方法用不同抗体标记Apo E基因敲除及同窝野生对照小鼠的外周血、脾脏、骨髓等细胞,应用流式细胞仪进行分析,比较两组之间的差异。结果对检测结果进行统计分析发现,与野生型小鼠相比,Apo E基因敲除小鼠的外周血、脾脏淋巴细胞、短期造血干细胞均有改变,骨髓前体B淋巴细胞、胸腺T淋巴细胞、长期造血干细胞等没有显著变化。结论 Apo E基因敲除后,小鼠外周血及脾脏B淋巴细胞减少,骨髓短期造血干细胞增加,但B及T淋巴细胞发育,以及骨髓长期造血干细胞、淋系共同祖细胞都没有显著变化。     

长期食用何首乌对小鼠造血系统的影响

目的探讨长期食用何首乌后,小鼠造血系统的变化。方法小鼠随机分为2组,对照组,喂饲正常饲料;何首乌饲料组,喂饲添加何首乌的饲料,10个月后,处死小鼠,应用流式细胞仪分析外周血、脾脏、胸腺及骨髓中各种细胞。结果何首乌饲料组小鼠,脾脏B细胞增多,胸腺CD4+细胞增多,CD8+细胞减少;骨髓造血干细胞显著减少,其中静止期细胞增多,增殖分裂期细胞减少。结论长期适量食用何首乌有助于减缓小鼠造血系统的衰老,维持造血系统稳定。     

急性单核细胞白血病存活31年1例

急性白血病是起源于造血系统(或淋巴)干细胞的克隆性恶性疾病.由于干细胞受损,其克隆中的白血病细胞失去进一步分化成熟的能力,或增殖分化能力不平衡而停滞在细胞发育的不同阶段.骨髓中异常的原始细胞大量增殖并浸润各种器官、组织,正常造血组织受到抑制,主要表现为贫血、出血、发热、感染及各器官浸润等.我院于1979年6月收治1例急性非淋巴细胞白血病(M5a)患者,已存活31年,现报告如下.     

环磷酰胺对铁过载小鼠骨髓造血干细胞的影响

目的 研究环磷酰胺对铁过载小鼠骨髓造血干细胞的影响。方法 建立铁过载小鼠模型,随机将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、低剂量组（0.25 g/kg）、中剂量组（0.5 g/kg）、高剂量组（1 g/kg）。模型组小鼠腹腔注射不同浓度及剂量的右旋糖酐铁,对照组小鼠注射磷酸缓冲盐溶液（PBS液）0.2 mL/次,观察体质量及肝脾、骨髓等脏器改变,检测血清铁蛋白水平;进一步选择中剂量组模型小鼠按不同时间点分组（D1,D2,D3,D4,D5,D6,D7,D14）,连续2 d腹腔注射环磷酰胺（Cy）50 mg/kg,对照组小鼠注射PBS液0.2 mL/次,建立铁过载小鼠Cy预处理模型,流式细胞仪检测骨髓单个核细胞（BMMNCs）、造血干细胞（HSCs）细胞数目及其在细胞周期中的分布、骨髓微环境等变化情况。结果 与对照组小鼠相比,铁过载组小鼠体质量明显降低、血清铁蛋白明显升高、肝脾明显增大、脏器铁沉积明显,差异具有统计学意义（P<0.05）;铁过载组小鼠外周血未见明显改变;Cy小鼠外周血白细胞（WBC）数目、淋巴细胞百分率（YM%）第1~4天明显降低,第4天降至最低,差异具有统计学意义（P<0.05）;铁过载小鼠BMNNCs、造血祖细胞（HPCs）数目未见明显改变,但HSCs、长期造血干细胞（LT-HSCs）数目减少,差异具有统计学意义（P<0.05）;而Cy组HSCs数量变化第1天开始升高,第3天升至最高,差异有统计学意义（P<0.05）;铁过载小鼠细胞周期分布未见明显改变;Cy组小鼠DNA合成前期（G0/G1期）细胞比例在第1~3天明显减少,第3天降至最低,差异有统计学意义（P< 0.05）。结论 通过腹腔注射不同剂量的右旋糖酐铁,成功建立铁过载三级危险模型。研究显示铁沉积在骨髓并对骨髓长期造血干细胞造成损伤,但是未引起外周血血象的改变;Cy 50 mg/kg连续2 d使铁过载小鼠更多静息状态的HSC进入细胞周期,起到动员造血干细胞的作用,并且在第4天动员作用最大。     

肝癌荷瘤小鼠肥大细胞前体数量和表型的变化特点

目的 研究肝癌荷瘤小鼠肥大细胞前体的数量和表型的变化特点。方法 建立H22肝癌荷瘤小鼠模型,获取骨髓、脾脏及肿瘤组织并制备单细胞悬液,进行荧光抗体染色,流式细胞术检测骨髓中粒-单核细胞前体（GMP）、脾脏中肥大细胞和嗜碱性粒细胞共同前体（BMCP）和外周肿瘤组织中肥大细胞前体的比例,以及后两者内源性危险相关模式分子（DAMP）的识别受体Toll样受体2（TLR2）的表达情况。结果 肝癌荷瘤小鼠骨髓细胞中GMP、脾脏细胞中BMCP和外周肿瘤组织中肥大细胞前体的比例均显著高于正常对照小鼠（P<0.05）。与正常小鼠比较,荷瘤小鼠脾脏BMCP中TLR2表达阳性细胞的比例无明显增高（P>0.05）,但外周肿瘤组织肥大细胞前体中TLR2表达阳性细胞的比例显著升高（P<0.05）。结论 H22肝癌荷瘤小鼠肥大细胞动员明显增强,表现为骨髓、髓外器官和外周肿瘤组织中肥大细胞前体的比例显著升高。髓外器官阶段BMCP中TLR2的表达无明显变化,其变化主要发生在外周肿瘤组织阶段的肥大细胞前体。     

组蛋白去乙酰化酶3对恒定型自然杀伤性T细胞发育和功能的调控作用

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）缺失对恒定型自然杀伤性T细胞（iNKT）数量、发育表型和细胞因子产生功能的影响,确定HDAC3在iNKT细胞发育和功能发挥中的调控作用。方法：采用T细胞特异的hdac3基因敲除（HDAC3KO）及其野生型正常对照（WT）小鼠,每种小鼠各取3~5只,分离小鼠胸腺、脾脏、淋巴结和肝脏淋巴细胞,采用细胞表面抗体染色和流式细胞术检测HDAC3对iNKT细胞数量和发育表型的变化,实验至少重复3次。采用HDAC3KO小鼠及其同系B6.SJL小鼠,每种小鼠各取4~6只;提取以上2种小鼠骨髓细胞,混合后经尾静脉注入经γ射线照射的B6.SJL小鼠,以制备骨髓混合嵌合体模型,8周后流式细胞术检测不同骨髓来源iNKT细胞在胸腺的产生和发育,实验重复3次。选取HDAC3KO和WT小鼠,每种各取小鼠3~5只;采用iNKT细胞特异激活剂半乳糖神经酰胺腹腔注射4 h后,收集各组小鼠脾脏淋巴细胞和血清,分别采用细胞内染色、流式细胞术和酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测HDAC3作用下iNKT细胞因子水平,实验至少重复3次。结果：与WT小鼠比较,HDAC3KO小鼠胸腺和外周免疫器官中iNKT细胞比例和数量均明显降低（P<0.05）,且HDAC3KO小鼠胸腺iNKT细胞中CD44-NK1.1-和CD44+NK1.1-细胞比例明显升高（P<0.05）,而CD44+NK1.1+、CD122+、CD69+和DX5+细胞比例明显降低（P<0.05）。骨髓混合嵌合体实验,与正常B6.SJL小鼠来源的骨髓细胞比较,来源于HDAC3KO小鼠的骨髓细胞产生的iNKT细胞数量明显减少（P<0.05）,同时iNKT细胞中CD44+NK1.1+细胞比例也明显降低（P<0.05）。细胞因子胞内染色和ELISA法检测,与WT小鼠比较,HDAC3KO小鼠iNKT细胞和血清中IFN-γ和IL-4水平均明显降低（P<0.05）。结论：HDAC3缺失通过内源性机制导致iNKT细胞数量减少,细胞发育成熟受阻;同时HDAC3缺失导致iNKT细胞因子产生功能明显降低。提示HDAC3在iNKT细胞的发育和功能发挥中具有重要调控作用。     

骨髓间充质干细胞输注对MRL/lpr狼疮鼠B淋巴细胞CXCR4表达的影响

目的：研究骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs）输注对狼疮鼠血浆C3、IgG浓度及B细胞、浆细胞表面CXCR4表达的影响,分析BMMSCs改善系统性红斑狼疮疾病活动的机制。方法：分离培养C57BL/6小鼠的BMMSCs,并对MRL/lpr 狼疮鼠进行尾静脉输注。实验分为C57BL/6组（C57BL/6小鼠未进行尾静脉输注）、MRL/lpr组（MRL/lpr鼠未进行尾静脉输注）、BMMSCs组（MRL/lpr鼠12周龄注射BMMSCs）和PBS 组（MRL/lpr鼠12周龄注射PBS）。在20周末取小鼠的外周血、骨髓、脾脏进行流式细胞分析,检测B细胞、浆细胞表面CXCR4表达;同时取4组血浆,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测C3、 IgG浓度。取小鼠肾脏组织行苏木精伊红（HE）染色。结果：① MRL/lpr组较C57BL/6组小鼠血浆C3浓度明显降低、IgG浓度明显增高（P均<0.01）;MRL/lpr组较C57BL/6组小鼠B细胞表面CXCR4的表达在外周血明显下降,在骨髓和脾脏明显升高（P均<0.01）;MRL/lpr组小鼠骨髓（P<0.05）及脾脏（P＜0.01）浆细胞表面CXCR4表达明显高于C57BL/6小鼠。② BMMSCs组较PBS组、MRL/lpr组C3浓度明显升高、IgG浓度明显降低（P均<0.01）; BMMSCs组较PBS组B细胞表面CXCR4表达在外周血明显增加（P<0.01）,在骨髓（P<0.01）和脾脏（P<0.05）明显下降, 较MRL/lpr组在骨髓和脾脏均明显下降（P均<0.01）。③ BMMSCs组较PBS组、MRL/lpr组浆细胞表面CXCR4表达在骨髓和脾脏均明显降低（P均<0.05）。④ 肾脏HE染色提示输注BMMSCs后狼疮鼠肾脏炎症改善。结论：BMMSCs输注可调节B细胞、浆细胞表面CXCR4的表达,改善MRL/lpr鼠病情活动指标。     

血小板因子4的辐射防护作用

目的：研究血小板因子4(PF4)对全身照射小鼠的辐射防护作用．方法：实验分为两部分．第一部分．小鼠随机分为4组，第二部分分为3组，小鼠总数为70只．照射组和PF4保护组接受7．5Gy^60Coγ射线全身照射．观察小鼠30d存活率和存活天数．用自动细胞计数仪计数外周血细胞．测定骨髓单个核细胞数和CFU-GM的形成能力．用紫外分光光度计测定骨髓细胞内DNA的含量．用流式细胞仪测定细胞周期的变化．测定小鼠的体、脾脏和胸腺的质量．结果：PF4能够增加照射小鼠的生存率．增加骨髓细胞内．DNA的含量及骨髓单个核细胞数，提高CFU-GM的形成能力，降低造血细胞的增殖指数，增加照射小鼠的脾体比和胸体比．结论：PF4在小鼠全身照射前使用能够减少骨髓和淋巴组织的辐射损伤．可作为辐射防护剂．