复方黄连胶囊对早期糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1/ BMP-7表达失衡及其Smad信号通路的调控作用

目的: 研究复方黄连胶囊(CRCC)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织TGF-β1/BMP-7表达失衡及其Smad信号通路的调控作用,探讨CRCC对DN大鼠早期肾损伤的作用及其可能机制。 方法: 以链脲佐菌素(STZ)复制早期DN大鼠模型,动物分为正常组、模型组、消渴丸组(0.8 g·kg^-1)、依那普利组(1 mg·kg^-1)与CRCC 低、中、高剂量组(生药含量分别为1.09,2.18,4.36 g·kg^-1),灌胃给药,每天1次,5周后生化指标检测空腹血糖(FBG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、胰岛素(Ins)、24 h尿蛋白(24 h Upro)及24 h 尿微量白蛋白(24 h UmAlb);光镜观察肾组织形态学的改变;免疫组化法检测肾组织TGF-β1,BMP-7,Smad2/3,Smad1/5及Smad7蛋白表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织TGF-β1和BMP-7 mRNA表达。 结果: 与模型组比较,各CRCC治疗组均不同程度降低了DN大鼠FBG,BUN,Scr,24 h Upro 和24 h UmAlb水平,改善肾组织病理形态学异常,TGF-β1与Smad2/3蛋白表达减少,BMP-7,Smad1/5与Smad7蛋白表达增加,TGF-β1 mRNA表达减少,但BMP-7 mRNA表达未增加。 结论: CRCC可改善早期DN大鼠肾功能病变,延缓DN慢性病理进展,其机制可能与通过Smad信号通路调控DN肾组织TGF-β1/BMP-7表达失衡有关。     

基于TGF-β1/Smads信号通路探讨当归芍药散对卵巢储备功能低下模型大鼠的影响

目的 观察当归芍药散对雷公藤多苷片联合应激所致的卵巢储备功能下降（DOR）模型大鼠卵巢储备功能的改善作用,并探讨转化生长因子-β₁ （TGF-β₁）/Smads信号通路在其中的作用机制。方法 选取性周期正常的雌性SD大鼠48只,随机分为正常组8只和模型制备组40只。模型制备组以灌胃雷公藤多苷片（50 mg·kg^-1）联合随机应激法建立模型,时间15 d,造模成功后将其随机分为模型组、当归芍药散低、中、高剂量组（3.96,7.92,15.84 g·kg^-1）及戊酸雌二醇组（0.09 mg·kg^-1）各8只,各组在继续给予应激的同时,分别用生理盐水,低、中、高剂量当归芍药散及戊酸雌二醇进行相应剂量灌胃干预,连续15 d。各组大鼠每日观察动情周期,干预结束后处死大鼠,计算大鼠卵巢脏器指数,苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠卵巢组织病理变化,免疫组化法（IHC）检测大鼠卵巢组织中TGF-β₁,转化生长因子-β₁受体（TGF-β₁R）蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠卵巢组织中Smad2,Smad3,Smad7 mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠动情周期紊乱率明显升高（P<0.05）,卵巢指数明显下降（P<0.01）,卵巢组织中TGF-β₁,TGF-β₁R蛋白及Smad2,Smad3 mRNA表达水平降低（P<0.01）,Smad7 mRNA表达水平上升（P<0.01）;与模型组比较,中药3组与戊酸雌二醇组大鼠动情周期均有不同程度改善（P<0.05）,卵巢指数均有不同程度回升,其中以中、高剂量组最为明显（P<0.05,P<0.01）,卵巢组织中TGF-β₁,TGF-β₁R蛋白及Smad2,Smad3 mRNA水平均有不同程度升高（P<0.01）,Smad7 mRNA表达水平均下降（P<0.01）,其中TGF-β₁,TGF-β₁R蛋白表达改善程度以中剂量组和戊酸雌二醇组最为明显。结论 当归芍药散能够明显改善DOR大鼠卵巢储备功能,且作用机制与调控TGF-β₁/Smads信号通路密切相关。     

补肾疏肝方对老年抑郁症小鼠海马氧化应激及TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的 观察慢性轻度不可预见性应激（CUMS）后老年抑郁症小鼠海马组织氧化应激和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）/Smad信号通路变化,并探讨补肾疏肝方抗抑郁的可能机制。方法 5月龄的小鼠90只,随机分为正常组、模型组、补肾疏肝方高、中、低剂量组和氟西汀组共6组,每组15只。除正常组外,其余各组小鼠均采用CUMS建立老年抑郁症模型。补肾疏肝方高、中、低剂量组小鼠在造模第1天开始同时灌胃补肾疏肝方19.5,9.75,4.87 g·kg^-1,氟西汀组小鼠灌胃氟西汀0.033 g·kg^-1,正常组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水,共21 d。用矿场实验评价各组小鼠的行为反应,采集小鼠海马组织并进行相关指标检测,WST-1法测超氧化物歧化酶（SOD）含量,TBA法测丙二醛（MDA）的含量,微量酶标法测谷胱甘肽（GSH）含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测TGF-β₁,Smad2,Smad3,Smad7 mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠OFT水平得分和垂直得分明显降低,海马组织SOD,GSH水平均下降,MDA含量明显升高（P<0.05）;TGF-β₁,Smad2,Smad3 mRNA表达均上调,Smad7 mRNA表达下调（P<0.05）。与模型组比较,补肾疏肝方高、中、低剂量组及氟西汀组小鼠海马组织SOD,GSH含量均上升,MDA含量下降（P<0.05）,补肾疏肝方高、中、低剂量组及氟西汀组小鼠海马组织TGF-β₁,Smad2,Smad3 mRNA表达均下调,Smad7 mRNA表达上调（P<0.05）。与补肾疏肝方高剂量组比较,补肾疏肝方中、低剂量组小鼠海马组织SOD,GSH含量下降,MDA含量均上升（P<0.05）;补肾疏肝方中、低剂量组小鼠海马组织TGF-β₁,Smad2,Smad3 mRNA表达均上调,Smad7 mRNA表达下调（P<0.05）。结论 补肾疏肝方可显著改善SAPM8小鼠的老年抑郁症状,其机制可能与调节海马氧化应激及TGF-β₁/Smad信号通路有关。     

补阳还五汤对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1/Smad3表达的影响

目的： 观察补阳还五汤对博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织病理及转化生长因子β₁（TGF-β₁）_mRNA,Smad3 mRNA表达的影响。方法： 将144只健康雄性SD大鼠随机分成6组,即假手术（NS）组、模型（BLM）组、强的松（P）组、补阳还五汤高、中、低（A,B,C）组,每组各24只。除NS组外,其余各组采用一次性气管滴注博莱霉素复制肺纤维化大鼠模型,NS组气管内滴注等量NS,造模第2天起,A,B,C组用补阳还五汤（剂量分别为18.48,9.24,4.62 g·kg^-1）灌胃,P组用强的松混悬液（4.2 mg·kg^-1）灌胃,NS组及BLM组用NS（10 mL·kg^-1）灌胃,于造模后第7,14,28 d分3批处死动物,每次8只,取左肺制备病理切片,行HE,Masson染色观察肺泡炎及肺纤维化程度改变情况;取右肺上中叶组织,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组大鼠肺组织TGF-β₁mRNA,Smad3 mRNA的表达。结果： ①BLM组大鼠肺泡炎及肺纤维化程度在不同时间点均明显高于同期NS组,差异明显（P<0.01）;②与BLM组相比,补阳还五汤各剂量组肺泡炎及肺纤维化程度有不同程度的改善（P<0.01 或 P<0.05）;③与NS组相比,BLM组肺组织TGF-β₁,Smad3表达水平在不同时间点均明显增高（P<0.01）,尤以第7天最为明显,并随时间推移有逐渐下降的趋势;④补阳还五汤各剂量组TGF-β₁,Smad3表达水平与同期BLM组相有不同程度的降低（P<0.01或P<0.05）,其中B组在7,14,28 d,C组在14,28 d下降较明显（P<0.01）,A组与同期BLM组相比虽有所降低,但早期不如B,C组明显。结论： 补阳还五汤可以明显改善模型大鼠肺组织肺泡炎和肺纤维化程度,抑制博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺组织TGF-β₁mRNA、Smad3mRNA的表达上调,从而减轻肺纤维化程度。     

“通利大肠”对COPD模型大鼠肺组织SP、VIP含量的影响

目的:观察"通利大肠"对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺组织P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)含量的影响,从神经肽角度探讨COPD"从肠论治"的效应机制。方法:采用熏烟联合气管注射脂多糖复制COPD大鼠模型。50只雄性大Wistar鼠随机分为正常组、模型组、治肠组、治肺组、肺肠同治组。正常组和模型组均灌胃给予生理盐水,治肠组、治肺组、肺肠同治组分别用治肠药(生大黄)、治肺药(生石膏、苦杏仁、瓜蒌皮)、肺肠同治药(生大黄、生石膏、苦杏仁、瓜蒌皮)灌胃,连续7 d。用免疫组织化学法和酶联免疫吸附法检测肺组织中SP、VIP含量。结果:免疫组化结果显示,与正常组相比,模型组大鼠肺组织SP表达较强,而治肠组、治肺组、肺肠同治组表达较弱;VIP在正常大鼠支气管上皮表达较强,模型组表达明显减弱,各治疗组VIP表达明显增强。酶联免疫吸附法结果显示,与正常组相比,SP在模型组肺组织中含量明显升高,VIP含量明显降低(P0.01);与模型组相比,治肠组、治肺组、肺肠同治组肺组织SP含量均明显降低,VIP含量明显升高(P0.01或P0.05);与治肺组相比,肺肠同治组肺组织SP含量明显降低(P0.05)。结论:通利大肠或治肺基础上增加通利大肠,可调节COPD模型大鼠肺组织神经肽SP、VIP的含量,这可能是COPD"从肠论治"的效应机制之一。     

柴胡含药血清通过Smad3/Rheb轴调节HFL1细胞凋亡和肌成纤维细胞转化

目的 利用转化生长因子-β₁（TGF-β₁）刺激人胚肺成纤维细胞（HFL1）模拟特发性肺纤维化（IPF）的病理过程,探讨柴胡含药血清对IPF的作用和机制。方法 采用10 μg·L^-1 TGF-β₁刺激HFL1细胞,给予不同体积分数柴胡含药血清（5%、10%、15%、20%）干预24 h后,利用细胞增殖与活性检测试剂盒-8（CCK-8）检测细胞增殖率。随后细胞分为空白血清组（20%空白血清）、TGF-β₁组（20%空白血清和10 μg·L^-1 TGF-β₁）、TGF-β₁+柴胡含药血清组（5%空白血清、15%含药血清和10 μg·L^-1 TGF-β₁）、TGF-β₁+SIS3组（3 μmol·L^-1 SIS3、20%空白血清和10 μg·L^-1 TGF-β₁）。采用原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡率;通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA表达情况;通过免疫荧光法检测α-SMA、脑Ras同源蛋白（Rheb）、磷酸化（p）-Smad3蛋白表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Rheb、p-Smad3、Smad3蛋白表达。结果 与空白血清组比较,TGF-β₁组细胞增殖率明显上升（P<0.05）。与TGF-β₁组比较,TGF-β₁+15%柴胡含药血清组和TGF-β₁+20%柴胡含药血清组细胞增殖率显著降低（P<0.01）。与空白血清组比较,TGF-β₁组细胞凋亡率显著下降,Bcl-2、α-SMA mRNA表达增加,Bax mRNA表达减少,α-SMA、Rheb蛋白表达增加,Smad3磷酸化水平明显上升（P<0.05）;与TGF-β₁组比较,TGF-β₁+柴胡含药血清组和TGF-β₁+SIS3组细胞凋亡率显著上升,Bcl-2、α-SMA mRNA表达减少,Bax mRNA表达增加,α-SMA、Rheb蛋白表达减少,Smad3磷酸化水平下降（P<0.05）。结论 柴胡能够抑制TGF-β₁诱导的HFL1细胞增殖和肌成纤维细胞转化,促进成纤维细胞凋亡,该作用可能与Smad3/Rheb轴有关。     

COPD大鼠AQPs mRNA表达及“从肠论治”干预作用

目的:观察"从肠论治"对COPD模型大鼠AQPs mRNA表达的影响,从津液敷布角度探讨COPD"从肠论治"的效应机制。方法:采用气管注脂多糖加熏香烟联合造模方法建立COPD大鼠模型,随机分为正常组、模型组、治肺组、治肠组及肺肠同治组。正常组、模型组灌胃生理盐水,各给药组灌胃相应中药,连续14天。定时荧光定量PCR法检测肺组织AQP1、AQP3、AQP5mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠气道AQP1、AQP3、AQP5mRNA表达减少(P<0.01)。与模型组比较,治肠组AQP1、AQP3、AQP5mRNA表达增强(P<0.05)。与治肺组比较,肺肠同治组AQP1、AQP3、AQP5mRNA表达增强(P<0.01)。结论:通利大肠,或在治肺的基础上增加通利大肠,可增强AQPs mRNA的表达,改善肺脏津液敷布及宣肺功能,这可能是COPD"从肠论治"效应产生的作用环节之一。     

丹芪合剂对糖尿病大鼠肾组织Smurf 2信号通路的调节作用研究

目的: 观察丹芪合剂对糖尿病(DM)大鼠肾组织Smad泛素化调节因子2(Smurf 2)表达的影响,初步探讨丹芪合剂抑制糖尿病肾病(DN)的分子机制。方法: 链脲佐菌素诱导1型DM大鼠模型,分为正常组、DM组和丹芪合剂 1.8 g·kg^-1治疗组;12周处死各组大鼠,HE染色观察胰腺和肾组织病理学改变;免疫组化和Western blot测肾组织Smurf 2、核转录共抑制因子(SnoN)、转化生长因子β₁(TGF-β₁)、磷酸化Smad 2和Smad 3表达。结果: 与正常组相比,DM组肾组织Smurf 2蛋白显著增加,SnoN蛋白表达下调,TGF-β₁、 磷酸化Smad 2和磷酸化Smad 3蛋白上调;与DM组相比,丹芪合剂治疗组Smurf 2蛋白显著减少,SnoN蛋白上调,TGF-β₁和磷酸化Smad 2蛋白下调,磷酸化Smad 3无显著差异。结论: 丹芪合剂作用机制可能与减少Smurf 2蛋白表达、进而抑制SnoN蛋白泛素化降解有关。     

COPD大鼠气道黏液分泌调控机制及“从肠论治”干预作用

目的:探讨"从肠论治"抑制慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠气道黏液高分泌的调控机制,从黏液高分泌角度探讨COPD"从肠论治"的效应机制。方法:采用气管注射脂多糖加熏香烟联合造模方法建立COPD大鼠模型,随机分为正常组、模型组、治肺组、治肠组及肺肠同治组。正常组、模型组灌胃生理盐水,各给药组灌胃相应中药,连续14d。RT-PCR法检测支气管组织表皮生长因子受体(EGF-R)mRNA及白介素-13(IL-13)mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠气道EGF-R mRNA、IL-13 mRNA表达增加(P0.01);与模型组比较,治肠组EGF-R mRNA、IL-13 mRNA表达减少(P0.05);与治肺组比较,肺肠同治组EGF-R mRNA、IL-13 mRNA表达减少(P0.01)。结论:通利大肠或在治肺的基础上增加通利大肠,均能降低EGF-R mRNA、IL-13 mRNA表达,从而抑制气道黏液高分泌信号传导通路,这可能是COPD"从肠论治"效应产生的作用环节之一。     

薏苡仁油对UUO大鼠肾间质纤维化的影响

目的: 观察薏苡仁油对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响. 方法: 雄性SD大鼠54只随机分为假手术组、单侧输尿管结扎模型组和薏苡仁油治疗组(15 mL·kg^-1·d^-1),术后第3,7,14天分批处死大鼠.用HE和Masson染色光镜下观察肾间质的病理改变,用免疫组织化学方法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达,用Western blot法检测肾组织Smad2,Smad7蛋白的表达. 结果: 薏苡仁油能够改善梗阻侧肾小管间质纤维化评分,显著减少肾组织α-SMA和TGF-β1的表达,治疗组肾组织磷酸化Smad2蛋白表达显著低于模型组,而Smad7蛋白水平则明显高于模型组. 结论: 薏苡仁油具有抗肾间质纤维化的作用,其机制与降低肾组织中促纤维化细胞因子TGF-β1含量,抑制Smad2的磷酸化和恢复拮抗蛋白Smad7的表达有关.     

下瘀血汤通过Wnt/β-catenin和TGF-β1/Smad信号串联干预肾纤维化大鼠的机制

目的 观察下瘀血汤对腺嘌呤致肾纤维化大鼠的保护作用及其对Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）/Smad信号通路的影响。方法 50只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组,氯沙坦组（9 mg·kg^-1）,下瘀血汤低、高剂量组（2.43,4.86 g·kg^-1）,采用腺嘌呤灌胃（250 mg·kg^-1）诱导肾纤维化大鼠模型,造模连续24 d,随后给予相应药物,给药连续30 d。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血肌酐（SCr）和尿素氮（BUN）水平;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肾脏组织病理改变情况;马松（Masson）染色观察大鼠肾脏胶原沉积情况;免疫组化法（IHC）和蛋白免疫印迹法（Western blot）测定大鼠肾脏Wnt5a,Wnt5b,β-catenin,TGF-β₁,Smad4,Smad7蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠SCr和BUN水平显著升高（P<0.01）,给予下瘀血汤干预后SCr和BUN水平显著降低（P<0.01）;HE和Masson染色结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肾间质损伤严重且肾间质胶原大量沉积,给予下瘀血汤干预后肾间质损伤减轻,胶原物质沉积减少;IHC和Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肾脏Wnt5a,β-catenin,TGF-β₁表达上调（P<0.01）,Wnt5b,Smad7表达下调（P<0.01）,给予下瘀血汤干预后Wnt5a,β-catenin,TGF-β₁表达下调（P<0.01）,Wnt5b,Smad7表达上调（P<0.01）,且下瘀血汤低、高剂量组间差异无统计学意义。结论 下瘀血汤对腺嘌呤致肾纤维化大鼠具有保护作用,其机制与抑制Wnt/β-catenin和TGF-β₁/Smad信号通路串联相关。     

大黄䗪虫丸经p38 MAPK/NF-κB/TGF-β1通路抑制小鼠硅肺纤维化的机制探讨

目的 运用中医经方大黄?虫丸干预小鼠硅肺纤维化模型，观察其对小鼠硅肺纤维化的影响并探讨其作用机制。方法 选用SPF级雄性昆明种小鼠36只，分为正常组，模型组，大黄?虫丸高、中、低剂量（1.560，0.780，0.390 g·kg^-1）组，汉防己甲素组（0.039 mg·kg^-1），每组6只。除正常组外，其余组均用静式染毒法连续40 d吸入二氧化硅（SiO₂）粉尘复制小鼠硅肺纤维化模型，并用相应药物进行干预28 d后处死小鼠，获得血清和肺组织样品，运用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α），白细胞介素-1β（IL-1β），IL-6和羟脯氨酸（HYP）的含量，运用肺组织样本进行病理切片观察，并采用蛋白免疫印迹法（Western blot），实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）方法检测肺组织中p38 丝裂原活化蛋白激酶（MAPK），核转录因子-κB（NF-κB），转化生长因子-β₁（TGF-β₁），α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA），Smad2，Smad3，Smad7的蛋白和mRNA的表达水平。结果 与正常组比较，模型组中的TNF-α，IL-1β，IL-6和HYP的含量均明显升高，差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，大黄?虫丸高剂量组能够明显降低小鼠血清中TNF-α，IL-6和HYP的含量（P<0.05，P<0.01），可见大黄?虫丸能够减轻硅肺小鼠肺部炎症。同时，与正常组比较，模型组中的p38 MAPK，NF-κB p65，TGF-β₁，α-SMA，Smad2和Smad3蛋白和mRNA表达水平均明显升高（P<0.05，P<0.01），Smad7蛋白和mRNA表达水平均显著降低（P<0.01）；与模型组比较，大黄?虫丸高剂量组中的p38 MAPK，NF-κB p65，TGF-β₁，α-SMA，Smad2和Smad3蛋白和mRNA表达水平均明显降低（P<0.05，P<0.01），Smad7蛋白和mRNA表达水平均明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 大黄?虫丸能改善硅肺小鼠肺泡炎症、细胞外基质沉积的情况，因而起到减轻纤维化的作用，这可能是通过调节p38 MAPK/NF-κB/TGF-β₁通路来实现的。     

COPD大鼠AQPsmRNA表达及“从肠论治”干预作用

目的：观察＂从肠论治＂对COPD模型大鼠AQPs mRNA表达的影响,从津液敷布角度探讨COPD＂从肠论治＂的效应机制。方法：采用气管注脂多糖加熏香烟联合造模方法建立COPD大鼠模型,随机分为正常组、模型组、治肺组、治肠组及肺肠同治组。正常组、模型组灌胃生理盐水,各给药组灌胃相应中药,连续14天。定时荧光定量PCR法检测肺组织AQP1、AQP3、AQP5mRNA表达水平。结果：与正常组比较,模型组大鼠气道AQP1、AQP3、AQP5mRNA表达减少（P〈0.01）。与模型组比较,治肠组AQP1、AQP3、AQP5mRNA表达增强（P〈0.05）。与治肺组比较,肺肠同治组AQP1、AQP3、AQP5mRNA表达增强（P〈0.01）。结论：通利大肠,或在治肺的基础上增加通利大肠,可增强AQPs mRNA的表达,改善肺脏津液敷布及宣肺功能,这可能是COPD＂从肠论治＂效应产生的作用环节之一。     

鳖甲煎丸通过Wnt/β-catenin信号通路逆转大鼠肝卵圆细胞EMT的机制

目的 研究鳖甲煎丸对转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导的大鼠肝卵圆细胞WB-F344上皮间质转化（EMT）的影响,探讨其逆转EMT改变的作用机制。方法 将WB-F344细胞随机分为空白组,TGF-β₁模型组（10 μg·L^-1TGF-β₁）,鳖甲煎丸低剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+0.55 g·kg^-1鳖甲煎丸）,鳖甲煎丸中剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+1.1 g·kg^-1鳖甲煎丸）,鳖甲煎丸高剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+2.2 g·kg^-1鳖甲煎丸）,除空白组外,均采用TGF-β₁诱导WB-F344细胞构建EMT模型,分别加入鳖甲煎丸低、中、高剂量含药血清处理细胞,采用细胞划痕实验检测WB-F344细胞迁移能力的改变;使用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）,N-钙黏蛋白（N-cadherin）,波形蛋白（Vimentin）表达的变化;使用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测β-连环蛋白（β-catenin）mRNA表达的改变;使用细胞免疫荧光法检测β-catenin的表达。结果 与空白组比较,TGF-β₁诱导WB-F344细胞4 d,WB-F344细胞间隙从紧密逐渐变得松散,细胞形态由鹅卵石状向成纤维样细胞转变,且E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin蛋白表达升高（P<0.01）,说明成功构建了WB-F344细胞EMT模型。划痕实验结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组WB-F344细胞的迁移能力增强（P<0.01）;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸中、高剂量组可以明显抑制WB-F344细胞的迁移能力（P<0.05）。Western blot结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组E-cadherin蛋白表达水平降低,N-cadherin,Vimentin蛋白表达水平升高（P<0.01）;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸中、高剂量组E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin,Vimentin蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）。Real-time PCR结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组中β-catenin mRNA表达升高（P<0.01）;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸低、中、高剂量组中β-catenin mRNA的表达降低（P<0.01）。细胞免疫荧光结果显示,与空白组比较,TGF-β₁模型组β-catenin在细胞核内荧光表达增强;与TGF-β₁模型组比较,鳖甲煎丸低、中、高剂量组β-catenin在细胞核内荧光表达减弱,且鳖甲煎丸对细胞核内β-catenin抑制作用与其浓度呈正相关。结论 鳖甲煎丸可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,逆转TGF-β₁诱导WB-F344细胞的EMT进程,抑制WB-F344细胞的迁移能力。     

肺肠合治法对支气管哮喘小鼠血管活性肠肽和p38 MAPK信号通路的影响

目的 观察中医治疗肺系疾病的常用治法肺肠合治法对支气管哮喘小鼠的治疗作用,进一步检测与哮喘发病机制密切相关的血管活性肠肽（VIP）和p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路相关蛋白的变化,以阐明肺肠合治法治疗支气管哮喘的作用机制。方法 将60只昆明种小鼠随机选12只作为正常组。其余小鼠通过卵清蛋白致敏复制小鼠支气管哮喘模型。分为正常组、模型组、地塞米松组（0.5 mg·kg^-1·d^-1）、中药治肺组（2.73 g·kg^-1·d^-1）、肺肠合治组（6.825 g·kg^-1·d^-1）,灌胃30 d后取血清及肺组织样本。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组小鼠血清中VIP、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测各组小鼠肺组织中TNF-α、IL-6、p38 MAPK mRNA的表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠肺组织中TNF-α、IL-6、p38 MAPK,磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）蛋白的表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠血清VIP含量明显降低（P<0.05）,TNF-α、IL-6含量明显升高（P<0.05）,肺组织TNF-α、IL-6、p38 MAPK mRNA和TNF-α、IL-6、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白相对表达量明显升高（P<0.05）;与模型组比较,各治疗组小鼠血清VIP含量明显升高（P<0.05）,TNF-α、IL-6含量明显升高（P<0.05）,肺组织TNF-α、IL-6、p38 MAPK mRNA和TNF-α、IL-6、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白相对表达量明显降低（P<0.05）;与肺肠合治组比较,地塞米松组小鼠血清TNF-α、IL-6明显增高（P<0.05）,肺组织TNF-α、IL-6 mRNA和TNF-α、IL-6蛋白相对表达量明显降低（P<0.05）,肺组织p38 MAPK、VIP mRNA和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白相对表达量明显升高（P<0.05）,中药治肺组小鼠血清VIP、TNF-α、IL-6明显降低（P<0.05）,肺组织TNF-α、IL-6、p38 MAPK mRNA和TNF-α、IL-6、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白相对表达量均明显升高（P<0.05）,肺组织VIP mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。结论 肺肠合治法可以增加内源性VIP,抑制p38 MAPK信号通路的过度活化,减少炎症因子释放,抑制肺部炎症反应,治疗支气管哮喘。     

益肺化痰汤减轻哮喘脾虚证大鼠气道高黏状态的作用与机制

目的 探讨益肺化痰汤减轻哮喘脾虚证大鼠气道高黏状态的作用与机制。方法 将55只8~9周龄、清洁级SD大鼠采用中医脾虚证复合西医哮喘动物建模方法制备哮喘脾虚证模型,造模成功后采用随机数字表法分为模型组、地塞米松组、益肺化痰汤低、中、高剂量组,另取11只SD大鼠记为正常组。地塞米松组予0.087 5 mg·kg^-1醋酸地塞米松灌胃,益肺化痰汤低、中、高剂量组分别予0.8、1.6、3.2 g·kg^-1益肺化痰汤流浸膏灌胃,模型组和正常组分别予10 mL·kg^-1蒸馏水灌胃。每日1次,共8周。观察各组一般情况;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-13（IL-13）、γ干扰素（IFN-γ）水平;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肺组织病理改变;阿尔辛蓝-过碘酸雪夫（AB-PAS）染色观察大鼠气道杯状细胞增生与黏液分泌状况;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠肺组织转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、Smad2、Smad3、黏蛋白5AC（MUC5AC）、黏蛋白5B（MUC5B） mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肺组织TGF-β₁、Smad2、Smad3、MUC5AC、MUC5B蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠存在体质量下降、肌肉消瘦、食量减少、饮水增多、肛温升高、倦怠少动及游泳耐力下降等脾虚证症状,同时伴随喘促、点头等呼吸困难症状。与正常组比较,模型组大鼠BALF中IL-4和IL-13水平显著上升,IFN-γ水平显著下降（P<0.01）,气道黏膜层及黏膜下层见大量炎性细胞浸润、气管平滑肌明显增厚、黏膜处存在大量上皮细胞增生、变形及脱落现象,肺组织病理评分显著上升（P<0.01）,气道可见大量杯状细胞增生、且形成大量黏液栓,气道阳性相对着色面积、TGF-β₁、Smad2、Smad3、MUC5AC、MUC5B mRNA和蛋白质相对表达量显著上升（P<0.01）;与模型组比较,地塞米松组和益肺化痰汤各剂量组BALF中IL-4、IL-13水平下降,IFN-γ水平上升（P<0.05,P<0.01）,气道黏膜层及黏膜下层炎性细胞浸润逐渐减少、气管平滑肌增厚现象逐渐减少、黏膜处上皮细胞增生、变形及脱落现象逐渐减少,肺组织病理评分显著下降（P<0.01）,气道杯状细胞增生逐渐减轻,气道阳性相对着色面积、TGF-β₁、Smad2、Smad3、MUC5AC、MUC5B mRNA和蛋白表达下降（P<0.05,P<0.01）;与地塞米松组比较,益肺化痰汤低剂量组上述指标差异无统计学意义,益肺化痰汤中、高剂量组改善更明显（P<0.05,P<0.01）;上述指标改善益肺化痰汤各剂量组呈剂量依赖性。结论 益肺化痰汤可减轻哮喘脾虚证大鼠气道高黏状态,可能与抑制TGF-β₁、Smad2、Smad3、MUC5AC、MUC5B表达,下调IL-4和IL-13水平,上调IFN-γ水平相关。     

甘草总黄酮抑制硫代乙酰胺诱导肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1及Caspase-3的表达

目的:研究甘草总黄酮(LF)对硫代乙酰胺(TAA)诱导慢性大鼠肝纤维化的抑制作用及对肝脏中转化生长因子-β₁(TGF-β₁)和半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响。 方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、LF组(400,200,100,50 mg·kg^-1·d^-1)及水飞蓟素(silymarin,30 mg·kg^-1·d^-1)阳性药物组共7组。除正常对照组外,其余各组均按150 mg·kg^-1剂量给予腹腔注3% TAA,每周2次,连续12周诱导大鼠慢性肝纤维化模型。期间正常对照组、模型组灌胃给予1 mL·kg^-1·d^-1的生理盐水。造模及药物干预后,HE,Masson染色法观察肝组织病理变化及肝纤维化的形成程度;采用生化法检测血清中ALT,AST,ALP及肝组织中羟脯氨酸(HYP)的含量;采用放免法测定血清透明质酸(HA)的含量;采用免疫组织化学法测定肝组织中TGF-β₁和Caspase-3的蛋白表达,qRT-PCR方法检测肝组织中TGF-β₁的mRNA表达。 结果 :与模型组相比较,甘草总黄酮能够保护肝组织结构的完整,并能明显减轻肝细胞变性坏死和纤维组织增生程度;甘草总黄酮能够显著降低血清中AST,ALT和ALP的水平;降低血清HA水平的同时降低肝组织中HYP的含量;甘草总黄酮能够剂量依赖性的下调肝组织中TGF-β₁,Caspase-3蛋白的表达同时,下调肝组织中TGF-β₁的mRNA的表达。 结论:甘草总黄酮具有抗硫代乙酰胺诱导大鼠慢性肝纤维化的作用;其作用机制可能与下调TGF-β₁和Caspase-3的蛋白表达有关。     

三物白散含药血清通过TGF-β/Smad通路抑制TGF-β1诱导的人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化

目的 基于转化生长因子-β/Smad（TGF-β/Smad）信号通路,体外研究三物白散含药血清对TGF-β₁诱导的人胃癌SGC-7901细胞上皮间质转化（EMT）的影响及其机制。方法 SPF级3月龄雄性SD大鼠28只,随机分为空白组及三物白散低、中、高剂量组,每组7只,三物白散低、中、高剂量组分别按0.031 25、0.062 5、0.125 g·kg^-1·d^-1的剂量灌胃,空白组以等体积超纯水灌胃。每日1次,连续7 d。末次给药后45 min经腹主动脉取含药血清;细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测三物白散高剂量组含药血清对SGC-7901细胞活性的影响;镜下观察经TGF-β₁和三物白散含药血清处理后的细胞形态变化;细胞划痕实验和Transwell实验分别检测经TGF-β₁诱导和三物白散低、中、高剂量组含药血清处理后SGC-7901细胞的迁移率和侵袭率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）、Snail、TGF-β₁、Smad3、磷酸化（p）-Smad3、Smad7蛋白的表达。结果 与空白组比较,10%、15%、20%三物白散高剂量组含药血清可呈浓度-时间依赖性抑制SGC-7901细胞活性;与空白组比较,模型组细胞失去梭形形态,多数细胞变圆、变长;与模型组比较,各药物组细胞伪足减少,细胞变小且形态恢复正常;与空白组比较,模型组细胞迁移和侵袭能力增强（P<0.01）;与模型组比较,三物白散中、高剂量组处理SGC-7901细胞24 h后能显著抑制其迁移能力（P<0.01）;三物白散低、中、高剂量组处理SGC-7901细胞48 h后均能显著抑制其迁移能力（P<0.01）;与模型组比较,三物白散低、中、高组剂量组均能显著抑制其侵袭能力（P<0.01）;与空白组比较,模型组E-cadherin及Smad7蛋白的表达水平显著降低（P<0.01）,Snail、p-Smad3、TGF-β₁蛋白的表达水平显著升高（P<0.01）,Smad3总蛋白水平不变;与模型组比较,三物白散高剂量组E-cadherin蛋白显著增加（P<0.01）、三物白散中剂量组有明显上升（P<0.05）;Smad7蛋白三物白散中、高剂量组表达水平显著增加（P<0.01）;三物白散中、高剂量组Snail蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;三物白散低、中、高组TGF-β₁、p-Smad3蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）。三物白散含药血清可以有效地逆转TGF-β₁诱导的人胃癌SGC-7901细胞EMT,并可能通过TGF-β/Smad信号通路发挥作用。结论 三物白散能抑制TGF-β₁诱导的SGC-7901细胞EMT的发生,其机制可能与调控TGF-β/Smad信号通路有关。     

基于VIP/cAMP/PKA/AQPs信号通路研究肺肠合治法减轻肺水肿治疗急性肺损伤的作用机制

目的 探究肺肠合治法（麻黄汤+大承气汤）减轻脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠肺水肿的作用和机制。方法 Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组。采用LPS（10 mg·kg^-1）腹腔注射复制ALI大鼠模型，造模后开始灌胃给药，正常组给予生理盐水（25 mL·kg^-1），肺肠合治低（5 g·kg^-1）、中（7.5 g·kg^-1）、高（10 g·kg^-1）剂量组分别给予（麻黄汤+大承气汤）灌胃，阳性药组给予地塞米松（5 mg·kg^-1），分别于LPS注射后0、8、16 h给药，共3次。给药结束后取肺组织及血清，肺组织苏木素-伊红（HE）染色，进行肺水肿评分；计算各组大鼠肺组织干/湿（D/W）质量比；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清血管活性肠肽（VIP）含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠肺组织水通道蛋白1（AQP1）、水通道蛋白5（AQP5）、VIP、环磷酸腺苷（cAMP）、磷酸化蛋白激酶A（p-PKA）、蛋白激酶A（PKA）蛋白的表达量；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠肺组织中VIP mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠肺损伤明显，水肿评分升高，肺组织D/W降低（P<0.01），肺组织AQP1、AQP5、cAMP、p-PKA/PKA明显降低（P<0.05，P<0.01），VIP含量显著升高（P<0.01），肺组织VIP蛋白和mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，肺肠合治组大鼠肺损伤减轻，肺组织D/W显著升高（P<0.01），肺组织AQP1、AQP5、VIP、cAMP、p-PKA/PKA升高（P<0.05，P<0.01），肺组织VIP表达升高（P<0.05，P<0.01）。结论 肺肠合治法能减轻急性肺损伤造成的肺组织水肿，其机制可能通过激活VIP/cAMP/PKA信号通路，进而促进水通道蛋白AQP1、AQP5的表达，增强肺组织的水液代谢有关。     

枳实及其有效成分柚皮苷预防术后肠粘连的作用机制分析

目的 研究枳实及柚皮苷对大鼠术后肠粘连的预防作用并探究其作用机制。方法 采用大鼠盲肠刮擦模型研究枳实和柚皮苷对肠粘连的预防作用，雄性SD大鼠造模后随机分为模型组、地塞米松磷酸钠组及枳实低、中、高剂量组（1.58、3.15、6.30 g·kg^-1·d^-1），另设假手术组仅进行开腹处理，给药7 d后用Nair法评估肠粘连情况，采用苏木素-伊红（HE）染色观察盲肠组织病理形态，免疫组化检测盲肠粘连组织中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达；同时，雄性SD大鼠造模后随机分为模型组、地塞米松磷酸钠组及柚皮苷低、中、高剂量组（50、100、200 mg·kg^-1·d^-1），另设假手术组仅进行开腹处理。给药7 d后评估肠粘连情况，采用HE染色观察盲肠组织病理形态，免疫组化检测盲肠粘连组织中MMP-9的表达，蛋白质免疫印迹法分析盲肠组织中转化生长因子-β₁（TGF-β₁）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果 枳实能抑制大鼠术后肠粘连的形成，组织病理学结果显示，其能减少受损盲肠组织中的炎性细胞浸润，并呈剂量依赖性地上调黏附组织中MMP-9的表达；柚皮苷各剂量组均能明显抑制大鼠术后肠粘连，减少组织中炎性细胞浸润和纤维增生，呈剂量依赖性地上调黏附组织中MMP-9的表达，并能抑制盲肠组织中TGF-β₁和α-SMA的表达。结论 枳实及其有效成分柚皮苷均能有效预防术后肠粘连，其作用可能与减轻组织纤维化和加速细胞外基质降解有关。