鳖甲煎丸通过Wnt/β-catenin信号通路逆转大鼠肝卵圆细胞EMT的机制

目的 研究鳖甲煎丸对转化生长因子-β₁（TGF-β₁）诱导的大鼠肝卵圆细胞WB-F344上皮间质转化（EMT）的影响，探讨其逆转EMT改变的作用机制。方法 将WB-F344细胞随机分为空白组，TGF-β₁模型组（10 μg·L^-1TGF-β₁），鳖甲煎丸低剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+0.55 g·kg^-1鳖甲煎丸），鳖甲煎丸中剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+1.1 g·kg^-1鳖甲煎丸），鳖甲煎丸高剂量组（10 μg·L^-1TGF-β₁+2.2 g·kg^-1鳖甲煎丸），除空白组外，均采用TGF-β₁诱导WB-F344细胞构建EMT模型，分别加入鳖甲煎丸低、中、高剂量含药血清处理细胞，采用细胞划痕实验检测WB-F344细胞迁移能力的改变；使用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测E-钙黏蛋白（E-cadherin），N-钙黏蛋白（N-cadherin），波形蛋白（Vimentin）表达的变化；使用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测β-连环蛋白（β-catenin）mRNA表达的改变；使用细胞免疫荧光法检测β-catenin的表达。结果 与空白组比较，TGF-β₁诱导WB-F344细胞4 d，WB-F344细胞间隙从紧密逐渐变得松散，细胞形态由鹅卵石状向成纤维样细胞转变，且E-cadherin蛋白表达降低，N-cadherin蛋白表达升高（P<0.01），说明成功构建了WB-F344细胞EMT模型。划痕实验结果显示，与空白组比较，TGF-β₁模型组WB-F344细胞的迁移能力增强（P<0.01）；与TGF-β₁模型组比较，鳖甲煎丸中、高剂量组可以明显抑制WB-F344细胞的迁移能力（P<0.05）。Western blot结果显示，与空白组比较，TGF-β₁模型组E-cadherin蛋白表达水平降低，N-cadherin，Vimentin蛋白表达水平升高（P<0.01）；与TGF-β₁模型组比较，鳖甲煎丸中、高剂量组E-cadherin蛋白表达升高，N-cadherin，Vimentin蛋白表达降低（P<0.05，P<0.01）。Real-time PCR结果显示，与空白组比较，TGF-β₁模型组中β-catenin mRNA表达升高（P<0.01）；与TGF-β₁模型组比较，鳖甲煎丸低、中、高剂量组中β-catenin mRNA的表达降低（P<0.01）。细胞免疫荧光结果显示，与空白组比较，TGF-β₁模型组β-catenin在细胞核内荧光表达增强；与TGF-β₁模型组比较，鳖甲煎丸低、中、高剂量组β-catenin在细胞核内荧光表达减弱，且鳖甲煎丸对细胞核内β-catenin抑制作用与其浓度呈正相关。结论 鳖甲煎丸可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路，逆转TGF-β₁诱导WB-F344细胞的EMT进程，抑制WB-F344细胞的迁移能力。