RGD和YIGSR衍生物的抗肿瘤侵袭、转移活性

目的 研究抗肿瘤转移肽Arg-Gly-Asp(RGD)和Tyr-Ile-Gly-Srg-Arg(YIGSR)的均叉、杂叉聚合肽的抗肿瘤侵袭、转移作用。方法 MTT法测定药物对PG和LA795细胞粘附Matrigel能力的影响；Transwell细胞培养小室测定药物对PG细胞侵袭重组基底膜能力的影响；观察药物对LA795小鼠肺腺癌细胞自发肺转移模型抗肿瘤转移的影响。结果 在50-100ug/ml浓度范围，RGD和YIGSR的杂叉肽WF12和YIGSR的均叉肽WF27的抗粘附作用强于RGD和YIGSR肽；以上二肽在100ug/ml浓度的抗肿瘤侵袭作用优于RGD和YIGSR肽；以上二肽100ug/只，静脉给药仅5次可显著抑制移植LA795细胞肺转移小鼠的肺脏重量和肺转移结节数。结论 RGD与YIGSR的杂叉肽WF12和YIGSR的均又肽WE27具有较强的抗肿瘤侵袭、转移活性。     

5-氟尿嘧啶、长春新碱与去甲二氢愈创木酸配伍对人恶性胶质瘤细胞株的作用

 目的 观察体外应用去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）、予氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）、长春新碱（ＶＣＲ）三种药物单用或合用对人恶性胶质瘤细胞系 ＳＨＧ－４４细胞的作用，并探讨其作用的可能机制。方法用 ＭＴＴ法检测药物作用效应，用免疫组化染色法检测细胞 ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因的蛋白表达情况。结果 （１）三种药物单用及两药合用时随着药物浓度的增加其抗肿瘤效应也增加，且两药合用时药物的效应增强；（２）先给ＮＤＧＡ ２４ｈ后再给 ５－Ｆｕ或 ＶＣＲ，与同时给药对该细胞的抗肿瘤效应无显著差异（Ｐ＞０．０５），而先给 ５－Ｆｕ或 ＶＣＲ ２４ｈ后再给 ＮＤＧＡ，与同时给药对细胞的抗肿瘤效应有显著差异（Ｐ＜０．０５）；（３）免疫组化染色结果表明，与对照组相比，ＮＤＧＡ处理后该细胞 ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因的蛋白表达明显降低。结论 ＮＤＧＡ与 ５Ｆｕ或 ＶＣＲ间有协同作用，且这种作用可能与 ＮＤＧＡ降低细胞 ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１基因的蛋白表达有关。     

尼妥珠单抗对耐多西紫杉醇人肺腺癌细胞株化疗敏感性的调变作用

目的　通过体内外实验研究人源化抗表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）单抗尼妥珠（ｈ-Ｒ３）对耐多西紫杉醇（ＤＴＸ）人肺腺癌细胞株（ＳＰＣ-Ａ１／ＤＴＸ）化疗敏感性的调变作用。方法　免疫组化法及流式细胞仪测定人肺腺癌细胞株ＳＰＣ-Ａ１和ＳＰＣ-Ａ１／ＤＴＸ肺腺癌细胞株表面ＥＧＦＲ的表达强度,突变富集液相芯片法检测其ＥＧＦＲ、Ｋ-Ｒａｓ和ＰＩ３ＫＣＡ基因的突变情况,流式细胞仪检测ｈ-Ｒ３对细胞周期的影响以及ｈ-Ｒ３联合ＤＴＸ对细胞凋亡的影响,ＭＴＴ法检测ｈ-Ｒ３与ＤＴＸ的联合指数（ＣＩ）,裸鼠ＳＰＣ-Ａ１／ＤＴＸ移植瘤模型观察联合组及单药组对裸鼠抑制瘤模型肿瘤的增殖情况并计算瘤重抑制率（ＴＷＩ）。结果　ＳＰＣ-Ａ１细胞株ＥＧＦＲ表达强度为（＋,２１.5３％）,ＳＰＣ-Ａ１／ＤＴＸ细胞株为（＋＋＋,９２.４７％）;ＳＰＣ-Ａ１／ＤＴＸ细胞株的ＰＩ３ＫＣＡ基因外显子２０突变,ＳＰＣ-Ａ１细胞株无突变。ｈ-Ｒ３作用２４ｈ后,ＳＰＣ-Ａ１／ＤＴＸ细胞Ｇ１ 期阻滞较ＳＰＣ-Ａ１细胞更显著（Ｐ＝０.０００２）;ｈ-Ｒ３及ＤＴＸ联合用药后ＳＰＣ-Ａ１／ＤＴＸ细胞株的凋亡率为（２４.７±０.５）％,明显高于ｈ Ｒ３单药组的（１４.５±０.１）％,而单用ＤＴＸ后的凋亡率无显著升高,ＳＰＣ-Ａ１细胞株单药组及联合组凋亡率均有升高（Ｐ＜０.０５）;１００μｇ／ｍｌ及２００μｇ／ｍｌｈ Ｒ３与ＤＴＸ联合对ＳＰＣ-Ａ１或ＳＰＣ-Ａ１／ＤＴＸ细胞株的增殖抑制具有协同作用;联合组对ＳＰＣ-Ａ１／ＤＴＸ肺腺癌荷瘤裸鼠的ＴＷＩ为７１.７％,高于ＤＴＸ组的５２.６％和ｈ-Ｒ３组的３６.９％。结论　ｈ-Ｒ３能明显增加耐ＤＴＸ的人肺腺癌细胞株化疗的敏感性,其机制可能为ｈ-Ｒ３具有Ｇ１期阻滞和逆转耐药细胞凋亡抵抗的作用,并且其疗效与耐药细胞较亲本细胞的ＥＧＦＲ表达增强有关,而耐药细胞的ＰＩ３ＫＣＡ基因突变对疗效的影响不显著。     

耐顺铂人肺腺癌细胞系A549DDP的建立及耐药机制

采用递增顺铂（ＤＤＰ）浓度的方法，体外连续培养建成一株耐ＤＤＰ的人肺腺癌细胞系Ａ（５４９）ＤＤＰ，耐ＤＤＰ为亲代Ａ（５４９）的２４．４倍。在无ＤＤＰ的培养基中培养５月余，其耐药性仍稳定。Ａ（５４９）ＤＤＰ细胞内谷胱甘肽（ＧＳＨ）水平显著高于亲代细胞（Ｐ＜０．０１）。ＢＳＯ耗竭细胞内ＧＳＨ后，Ａ（５４９）ＤＤＰ细胞对ＤＤＰ敏感性增加５倍，ＢＳＯ对亲代Ａ（５４９）细胞无增敏作用，Ａ（５４９）ＤＤＰ细胞ＧＳＴ酶同功酶ＧＳＴ—π含量较Ａ（５４９）高１．６倍，却无ＧＳＴ基因扩增，表明ＧＳＨ／ＧＳＴ解毒系统参与Ａ（５４９）ＤＤＰ耐药性的产生。实验结果亦示Ａ（５４９）ＤＤＰ与卡铂及氨甲喋呤间存在交叉耐药，而与易产生ＭＤＲ或ａｔＭＤＲ之ＡＤＭ、ＶＣＲ、ＶＰ－１６、ＶＭ－２６无交叉耐药，Ａ（５４９）细胞无Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）表达，Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ研究Ａ（５４９）ＤＤＰ无ｍｄｒｌＴｏｐｏⅡ基因扩增，提示Ａ（４５９）ＤＤＰ细胞系与ＭＤＲ及ａｔ－ＭＤＲ无交叉耐药。     

整合素α5与卵巢上皮性癌铂类耐药SKOV3/DDP细胞增殖、侵袭和凋亡的相关研究

目的：研究卵巢癌 ＳＫＯＶ３细胞及其铂类耐药 ＳＫＯＶ３／ＤＤＰ细胞中整合素 α５（ｉｎｔｅｇｒｉｎα５,ＩＴＧＡ５）的表达情 况,探索 ＩＴＧＡ５沉默后对卵巢癌 ＳＫＯＶ３／ＤＤＰ细胞铂类敏感性、增殖、侵袭及凋亡的影响。方法：使用 ｑＲＴ ＰＣＲ检测 卵巢癌 ＳＫＯＶ３细胞及铂类耐药细胞 ＳＫＯＶ３／ＤＤＰ中的 ＩＴＧＡ５表达情况。随后将 ＳＫＯＶ３／ＤＤＰ细胞分别分为 ｓｉＩＴ ＧＡ５ ＳＫＯＶ３／ＤＤＰ组（ＩＴＧＡ５沉默组）、ｓｉＮＣ组（阴性对照组）和对照组,ｓｉＩＴＧＡ５ ＳＫＯＶ３／ＤＤＰ组和 ｓｉＮＣ组分别转染 ＩＴＧＡ５沉默质粒 ｓｉＩＴＧＡ５和阴性对照质粒 ｓｉＮＣ,对照组给予空载体。采用 ＣＣＫ８法检测各组细胞顺铂的半数致死率 （５０％ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ,ＩＣ５０）、细胞增殖活性;Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验检测各组细胞侵袭能力;流式细胞术检测各组细 胞的凋亡情况。结果：卵巢癌铂类耐药细胞 ＳＫＯＶ３／ＤＤＰ中 ＩＴＧＡ５表达明显高于 ＳＫＯＶ３细胞,差异有统计学意义 （Ｐ＜０．０５）;ｓｉＩＴＧＡ５ ＳＫＯＶ３／ＤＤＰ组、ｓｉＮＣ组及对照组顺铂的 ＩＣ５０分别为 ２．０９６μｇ／ｍＬ、２．５０７μｇ／ｍＬ及 ２．６１９μｇ／ ｍＬ,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;与 ｓｉＮＣ组及对照组细胞系相比,ｓｉＩＴＧＡ５ ＳＫＯＶ３／ＤＤＰ组细胞第 ５、６、７天的细胞 增殖活性明显下降,同时侵袭能力亦明显下降,细胞凋亡率上升,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论：ＩＴＧＡ５在人 卵巢上皮性癌铂类耐药细胞 ＳＫＯＶ３／ＤＤＰ中表达升高,ＩＴＧＡ５表达下降后 ＳＫＯＶ３／ＤＤＰ对顺铂的敏感性增加,增殖和 侵袭能力下降;ＩＴＧＡ５可能通过抑制卵巢癌 ＳＫＯＶ３／ＤＤＰ细胞凋亡参与铂类的耐药。     

半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞周期的影响及体外增效作用

目的：研究半边旗抗肿瘤有效成分６Ｆ对ＨＬ－６０细胞周期的影响及对常用抗肿瘤药的体外增效作用。方法：应用流式细胞光度术（ＦＣＭ）测定细胞周期，应用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定药物对细胞的抑制率。结果：不同浓度６Ｆ作用６小时即可使ＨＬ－６０细胞Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期比例升高，Ｇ１期比例下降，并呈一定的剂量效应关系，当作用到２４小时后，Ｓ期比例进一步升高，但Ｇ２／Ｍ期比例稍有回落。低浓度６Ｆ分别与２－氯代脱氧腺苷（２－ＣＬｄＡｄｏ），顺铂（ＣＤＤＰ），长春新碱（ＶＣＲ），氟尿嘧啶（５ＦＵ）合用可增强它们对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用，ｑ值大于０．８５，与各药有相加或协同作用，６Ｆ对２－ＣｌｄＡｄｏ，ＣＤＤＰ，ＶＣＲ，５ＦＵ的增效倍数分别为１．５８，１．５３，１．５５，１．３８。结论：６Ｆ可明显阻断ＨＬ－６０细胞在Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期；６Ｆ可增强上述药物对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用。已知，２－ＣｌｄＡｄｏ阻断细胞在Ｓ期，ＣＤＤＰ和ＶＣＲ阻断Ｇ２／Ｍ期，５ＦＵ阻断Ｇ１期。鉴于所试药物对细胞周期的影响不同，提示６Ｆ的体外增效作用可能与此有关。     

干扰素诱导跨膜蛋白１对结肠癌ＳＷ４８０细胞株侵袭和转移能力的影响

目的　研究干扰素诱导跨膜蛋白１（ＩＦＩＴＭ１）对结肠癌ＳＷ４８０细胞株侵袭和转移的影响。方法　构建ＩＦＩＴＭ１／ｐＥＧＦＰ-Ｃ３重组质粒并且转染大肠癌细胞株ＳＷ４８０,免疫荧光显微镜和激光共聚焦显微镜（ＬＣＳＭ）、ＲＴ ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴定ＩＦＩＴＭ１／ｐＥＧＦＰ-Ｃ３重组质粒。Ｇ４１８筛选稳定过表达ＩＦＩＴＭ１的ＳＷ４８０细胞株（ＩＦＩＴＭ１／ＳＷ４８０）,细胞侵袭性实验、明胶酶法测定ＭＭＰ-２和ＭＭＰ-９活性,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ＭＭＰ-９蛋白表达及ＩＦＩＴＭ１／ＳＷ４８０侵袭和转移能力。结果　成功构建ＩＦＩＴＭ１／ｐＥＧＦＰ-Ｃ３重组表达质粒,获得ＩＦＩＴＭ１／ＳＷ４８０细胞株;细胞侵袭实验显示ＳＷ４８０细胞、ＩＦＩＴＭ１／ＳＷ４８０细胞的细胞穿透数分别为（４４８.６４±３８.０９）个和（５４０.４５±４４.６１）个,差异有统计学意义（Ｐ＜０.０１）;明胶酶法测定显示ＩＦＩＴＭ１／ＳＷ４８０细胞ＭＭＰ-２、ＭＭＰ-９活性较ＳＷ４８０和ｐＥＧＰＦ／ＳＷ４８０细胞明显增强。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎ显示ＩＦＩＴＭ１／ＳＷ４８０细胞ＭＭＰ-９表达水平明显高于ＳＷ４８０和ｐＥＧＦＰ／ＳＷ４８０细胞株。结论　ＩＦＩＴＭ１可增加大肠癌ＳＷ４８０细胞株侵袭和转移的能力。     

红霉素及细胞因子逆转白血病细胞耐药性的研究

利用亲脂性药物Ｅｒｙ单独或与Ｄｏｘ合用处理Ｋ５６２／ＶＣＲ细胞，观察了其对细胞的增殖抑制作用，以及对细胞内Ｄｏｘ浓度的影响，实验结果表明：在无Ｅｒｙ存在下，Ｄｏｘ对Ｋ５６２／ＶＣＲ细胞的增殖抑制作用较小，与Ｅｒｙ合用后可明显地提高Ｋ５６２／ＶＣＲ细胞内Ｄｏｘ的浓度，并可增强Ｄｏｘ对Ｋ５６２／ＶＣＲ细胞的增殖抑制作用。此结果与国外的结果相一致。因而进一步提示了亲脂类药物逆转肿瘤细胞ＭＤＲ的机制可能与其抗肿瘤药物竞争性地与Ｐ－Ｇｐ结合，以减少抗肿瘤药物的外排有关，但是本组实验结果还表明：Ｅｒｙ与Ｄｏｘ合用处理Ｋ５６２／ＶＣＲ细胞对细胞膜Ｐ－Ｇｐ的表达影响较小，提示了亲脂类药物作用于Ｐ－Ｇｐ的位点可能和单克隆抗体结合抗原决定簇不同，故亲脂类药物与Ｐ－ＧＰ结合不影响单克隆抗体与Ｐ－Ｇｐ结合。     

5—氟脲嘧啶对耐顺铂人肺腺癌细胞A549^DDP的程序依赖性逆转作用

用耐顺铂（ＣＤＤＰ）人肺腺癌细胞系Ａ５４９ＤＤＰ作模型，研究了５－ＦＵ对ＣＤＤＰ耐药的程序依赖性逆转作用。５－氟脲嘧啶（５－ＦＵ）预处理Ａ５４９ＤＤＰ２４ｈ后立即给予ＣＤＤＰ，ＣＤＤＰ细胞毒性增加３．９倍；５－ＦＵ预处理Ａ５４９ＤＤＰ后间隔２４或４８ｈ再给予ＣＤＤＰ，其细胞毒性分别增加２０倍和２５０倍，甚至较亲代细胞Ａ５４９更为敏感；如先给ＣＤＤＰ后给５－ＦＵ则细胞毒性仅增加１．８倍。５－ＦＵ对亲代细胞亦有类似效应但细胞毒性增加程度明显低于耐药细胞。５－ＦＵ预处理后间隔２４，４８ｈ，细胞内ＧＳＨ含量逐渐降低，与细胞毒性逐渐增加相一致。如用ＢＳＯ耗竭Ａ５４９ＤＤＰ细胞内ＧＳＨ，ＣＤＤＰ细胞毒性增加６．４倍，仅能部分逆转ＣＤＤＰ耐药。５－ＦＵ明显抑制ＭＲＰ的表达，但对ＧＳＴπ的表达无影响。在５－ＦＵ预处理后的无药间隔时间内，给予无毒浓度的三苯氧胺则有明显的协同效应。结论：程序性给予５－ＦＵ通过降低细胞内ＧＳＨ含量和抑制ＭＲＰ的表达能完全逆转ＣＤＤＰ耐药     

C－erbB－2，人表皮生长因子及其受体在大肠癌中表达的意义

用ＡＢＣ免疫组化法测定２００例大肠癌组织中Ｃ－ｅｒｂＢ－２，人表皮生长因子（ｈＥＧＦ）及其受体（ＥＧＦＲ）。结果发现：１）Ｃ－ｅｒｂＢ－２，ｈＥＧＦ，ＥＧＦＲ在２００例大肠癌中阳性表达分别为３６％、４４％、４７％，三者共同阳性为１６．５％。２）ｈＥＧＦ，ＥＧＦＲ在大肠癌ＤｕｋｅｓＣ、Ｄ期，肿瘤＞２ｃｍ、低分化腺癌，有深度浸润和淋巴结转移者阳性率显著高于其它各型（Ｐ＜０．０１）。３）Ｃ－ｅｒｂＢ－２，ｈＥＧＦ和ＥＧＦＲ阳性病例存活率明显低于这些阴性病例（Ｐ＜０．０１）。结果表明，Ｃ－ｅｒｂＢ－２，ｈＥＧＦ和ＥＧＦＲ在大肠癌的侵袭性生长中起重要作用，ｈＥＧＦ和ＥＧＦＲ可作为大肠癌患者高度恶性的生物学指标。     

芹菜素对人结肠癌细胞株SW480体外侵袭能力的抑制作用

目的:观测芹菜素对大肠癌细胞株SW480体外侵袭、粘附和运动能力的影响。方法:人工重组基底膜技术观察药物对细胞侵袭、运动和粘附的影响。结果:芹菜素处理后SW480细胞的侵袭、运动及粘附能力下降,并呈时间和剂量依赖性。结论:芹菜素多个层面抑制SW480细胞的侵袭、运动和粘附。     

Inhibition by retinoids of in vitro invasive ability of human lung carcinoma cells

The effect of retinoid treatment of A549 human lung carcinoma cells on in vitro cell invasion using the human amnion basement membrane (BM) was investigated. A 2-day retinoid pretreatment of the cells resulted in a significant reduction in their invasive ability. The most effective retinoid, retinol acetate, inhibited cell migration through the BM and degradation of [3H] proline labeled BM components by 50% at noncytotoxic concentrations of 0.09, and 3 micrograms/ml, respectively. Inhibition by retinol acetate of A549 cell invasive potential was accompanied by a significant decrease in type IV collagenase activity and no change in transglutaminase activity.     

芹菜素对人结肠癌细胞株SW480体外侵袭能力的抑制作用

目的：观测芹菜素对大肠癌细胞株SW480体外侵袭、粘附和运动能力的影响。方法：人工重组基底膜技术观察药物对细胞侵袭、运动和粘附的影响。结果：芹菜素处理后SW480细胞的侵袭、运动及粘附能力下降,并呈时间和剂量依赖性。结论：芹菜素多个层面抑制SW480细胞的侵袭、运动和粘附。     

齐墩果酸抗人肺癌细胞增殖、侵袭和诱导细胞凋亡的研究

 目的　研究齐墩果酸抗人肺癌细胞增殖、侵袭和诱导细胞凋亡的作用 ,并探讨其抗侵袭作用的机理。方法　用细胞增殖抑制试验、软琼脂集落形成试验、对重建基底膜的侵袭试验、趋化运动试验、对层粘连蛋白的粘附试验以及组织蛋白酶B活性测定观察齐墩果酸对PGCL3细胞侵袭能力的影响 ,用吖啶橙 -溴乙啶荧光双染法和TUNEL法检测细胞凋亡。结果　齐墩果酸可降低PGCL3细胞增殖能力并呈剂量依赖性 ,IC50 为 4 0 .71 μmol/L ;35 μmol/L和 4 5 μmol/L齐墩果酸均能抑制PGCL3细胞的侵袭能力 (P <0 .0 1 )且有剂量依赖性。抗侵袭作用机理的分析结果显示上述浓度的该药物对细胞的运动、粘附及组织蛋白酶B分泌均有明显的抑制作用 (P <0 .0 5和P <0 .0 1 ) ;软琼脂集落形成率也显著降低 ;上述浓度的药物处理 4 8h均使PGCL3细胞凋亡率显著升高 (P <0 .0 1 )。结论　齐墩果酸有抗PGCL3人肺癌细胞增殖和侵袭作用 ,并有诱导PGCL3细胞凋亡的作用。其抗侵袭机理不是对侵袭的某一环节的阻断 ,而是对侵袭各个基本环节都有抑制作用     

草分枝杆菌联合羟基喜树碱对SPCA/I人肺腺癌细胞抗增殖效应的研究

目的　探讨草分枝杆菌 (mycobacteriumphlei)对人肺腺癌细胞系SPCA/I的抗增殖效应 ,以及不同浓度草分枝杆菌与羟基喜树碱联合应用时的协同效应。方法　应用细胞培养和MTT比色法 ,检测不同浓度组的草分枝杆菌 ,以及草分枝杆菌与羟基喜树碱联合应用对SPCA/I人肺腺癌细胞生长的抑制作用 ,波长定于 5 70nm ,测定光密度 (A值 )并计算抑制率。结果　不同浓度的草分枝杆菌 ,在体外对SPCA/I人肺腺癌细胞株均有直接的抑制作用 ,其抑制率与所用药物浓度呈正相关。 1.72 0 μg/ml及0 .860 μg/ml浓度的草分枝杆菌与羟基喜树碱 (1.0PPC、0 .5PPC)联用 ,在体外对人肺腺癌细胞的抑制率显著高于单用羟基喜树碱组。结论　草分枝杆菌在体外对SPCA/I人肺腺癌细胞有直接抑制作用 ,该药与羟基喜树碱联合应用有显著的协同抗肿瘤效应。     

Inhibition of invasion of invasive human bladder carcinoma cells by protein kinase C inhibitor staurosporine

To study the effect of the protein kinase C (PKC) inhibitor staurosporine on invasion, we selected the invasive human bladder carcinoma cell line EJ. Total PKC activity was more than twofold higher in the EJ cells than in RT4 cells (superficial human bladder carcinoma cells), which do not pass through an artificial basement membrane. There was more PKC activity in the cytosol than in the membrane of EJ cells. Staurosporine, at nontoxic concentrations, inhibited the invasion of EJ cells through an artificial basement membrane in a dose-dependent manner. Staurosporine caused a dose-dependent inhibition of cell motility but did not inhibit cell attachment. Staurosporine represents a new agent for the inhibition of tumor cell invasion and may prove useful in studying the mechanisms responsible for this phenomenon.     

Inhibitory Effects of Syk Transfection on Lung Cancer Cell Invasion

Objective: Spleen tyrosine kinase (Syk) is closely related to tumor invasion and metastasis, and has been shownto have potential inhibitory effects in tumors. In this study, we constructed a eukaryotic expression vector forSyk and analyzed its effects on invasive ability of the A549 non-small cell lung cancer cell line in vitro. Methods:A fragment of Syk was obtained by RT-PCR from human lung cancer cells and cloned into the expression vectorpLNCXSyk. After restriction endonuclease digestion, PCR and DNA sequencing confirmation, the recombinantSyk expression plasmid was transfected into A549 human lung cancer cells using lipofectamine protocols. Afterselection, the cells stably expressed Syk. Detection of Syk expression of the cells by RT-PCR, and invasive abilitywere examined. Results: The eukaryotic expression plamid pLNCXSyk was constructed and expressed stablyin the A549 human lung cancer cells. The RT-PCR results showed that Syk mRNA expression was upregulatedsignificantly (P<0.05). Lower invasion through a basal membrane were apparent after transfection (P<0.05).Conclusions: A eukaryotic expression plasmid to cause Syk expression in lung cancer cells can obviously inhibittheir invasive ability in vitro.     

Immunohistochemical Detection of Hepatocyte Growth Factor/Scatter Factor in Human Cancerous and Inflammatory Lesions of Various Organs

Hepatocyte growth factor (HGF)/scatter factor (SF) is a multifunctional factor considered to be potentially involved in tissue regeneration, wound healing, embryogenesis, angiogenesis and cancer invasion. Here we examined immunohistochemically the distribution of HGF/SF in human tissues, including cancerous and inflammatory tissues, using anti-HGF antibody. HGF/SF accumulation was clearly detected in the extracellular matrix, particularly along the basement membrane, in cancerous and inflammatory tissues, but only a little was detected in normal tissues. HGF/SF is well known to have a strong affinity for heparin in vitro , and from the results of our immunohistochemical assay, we considered that HGF/SF was bound to heparin or heparan sulfate of the extracellular matrix and basement membrane. HGF/SF was well localized in cancerous and inflammatory lesions of human lung, liver and pancreas, and in apparently normal tissues of kidney, adrenal gland and pancreas obtained at autopsy. In lung, HGF/SF was localized along the basement membranes of cancer cell nests, in the extracellular matrix of the cancer cell surface, cancer stroma and tissues invaded by cancer, and the basement membranes of bronchial epithelium and capillary vessels in inflammatory stroma. Since HGF/SF makes some cancer cells more invasive in vitro , the accumulation of HGF/SF in cancerous tissue suggests that the invasiveness of some cancer cells may be increased by HGF/SF in vivo .     

蛋白激酶C调控大肠癌HT-29细胞粘附、侵袭能力的研究

目的探讨蛋白激酶C(ProteinKinaseC,PKC)对大肠癌HT-29细胞体外粘附、侵袭能力的调控作用。方法采用体外细胞培养的方法,通过PKC激动剂佛波酯PMA和抑制剂Staurosporine(SP)对大肠癌HT-29细胞粘附人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)能力、侵袭血管小块的形态学和侵袭人羊膜能力影响的研究,探讨PKC对HT-29细胞体外粘附、侵袭能力的调控作用。结果采用3H-TdR标记的同位素液闪测定发现,PMA不同浓度处理HT-29细胞可使其粘附HUVECs的能力增强,在一定浓度范围内,随着PMA浓度的增加,粘附作用也逐渐增强,SP可拮抗HT-29细胞粘附HUVECs的作用。侵袭血管小块的扫描电镜观察发现,PMA处理细胞后,细胞侵袭血管的能力增强,细胞伸出伪足,向血管内侵袭,而SP可拮抗PMA作用,细胞侵袭性下降。PMA可显著增强HT-29细胞侵袭人羊膜的能力,100nmol/LPMA诱导4h,可使HT-29细胞在体外获得最大的侵袭羊膜的能力,而SP则可拮抗PMA的这种诱导作用。结论PKC对HT-29细胞体外粘附、侵袭能力存在调控作用,PKC的激活使HT-29细胞粘附性、侵袭性增强,而PKC的抑制使HT-29细胞粘附性、侵袭性下降。     

4—乙酰胺苯基维甲酸酯抑制肿瘤细胞侵袭重组基底膜及其作用机理

目的研究新维甲类化合物４－乙酰胺苯基维甲酸酯（４－ＡＰＲ）对Ｂ１６－Ｆ１０小鼠黑色素瘤细胞侵袭能力的抑制作用,探讨其作用机理。方法癌细胞侵袭能力用重组基底膜侵袭试验衡量;ＰＡＧＥ底物酶谱方法检测Ⅳ型胶原酶活性;斑点杂交检测ＣＮＥ－２Ｚ细胞ＴＩＭＰ－１ｍＲＮＡ表达;以细胞生长曲线评价药物对Ｂ１６－Ｆ１０细胞的生长抑制作用。结果在１０－５ｍｏｌ／Ｌ和１０－６ｍｏｌ／Ｌ时,４－ＡＰＲ对Ｂ１６－Ｆ１０小鼠黑色素瘤细胞侵袭重组基底膜的抑制率分别为５４．２％和４１．９％,对ＣＮＥ－２Ｚ细胞培养上清中的Ⅳ型胶原酶活性有降低作用。此外,４－ＡＰＲ可抑制Ｂ１６－Ｆ１０细胞与ＬＮ、ＦＮ和Ｍａｔｒｉｇｅｌ的粘附,诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞ＴＩＭＰ－１ｍＲＮＡ表达。结论４－ＡＰＲ抑制Ｂ１６－Ｆ１０细胞侵袭重组基底膜。４－ＡＰＲ的抗侵袭活性与抑制肿瘤细胞的粘附,降低肿瘤细胞培养上清中Ⅳ型胶原酶的活性和（或）诱导肿瘤细胞ＴＩＭＰ－１ｍＲＮＡ表达等有关。